Композитный чумной антигенный f1-диагностикум для индикации специфических антител



 


Владельцы патента RU 2582941:

Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека ("РосНИПЧИ "Микроб") (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен диагностикум для индикации специфических антител к F1 антигену чумного микроба, который представляет собой взвесь композитных частиц, состоящих из углеродной метки размером не более 500 нм, заключенных в полимерную матрицу, представляющую собой привитой сополимер бычьего сывороточного альбумина с чумным капсульным антигеном F1, при соотношении компонентов, мг/мл: углеродная метка - 20-30, бычий сывороточный альбумин - 5-10, антиген F1 - 0,2-1,0; при этом полученные частицы композита стабилизированы в забуференном физиологическом растворе рН 7,0-7,4 высокомолекулярными полимерами и неионными детергентами. Изобретение направлено на повышение чувствительности метода дот-иммуноанализа за счет стабилизации антигена на поверхности углеродной метки, что приводит к повышению эффективности анализа, позволяющего выявлять специфические антитела в более низких титрах. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к иммунобиотехнологии, и может быть использовано в иммунохимической диагностике чумы у людей и животных при эпизоотологическом обследовании природных очагов и при производстве иммунных сывороток для определения активности антител к фракции 1 (F1) чумного микроба in vitro методом дот-иммуноанализа.

Сущность выявления специфических антител заключается в образовании комплексов антител исследуемой сыворотки, фиксированной на твердом носителе (например, на нитроцеллюлозной мембране), с антигенами, конъюгированными с ферментной, радиоизотопной, люминесцентной или оптической меткой.

Известен диагностикум эритроцитарный чумной антигенный для обнаружения специфических антител к фракции 1 (F1) чумного микроба в сыворотке крови производства Казахского научного центра карантинных и зоонозных инфекций им. М. Айкимбаева РГКП (Казахстан) (регистрационный номер РК-МТ-5№003645). Диагностикум представляет собой взвесь фиксированных эритроцитов, сенсибилизированных чумным антигеном F1, и предназначен для использования в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

Среди недостатков эритроцитарных диагностикумов приводят следующие:

- трудность стандартизации эритроцитов и, как следствие, нестандартность эритроцитарных диагностикумов;

- отсутствие 100% специфичности для диагностикума чумного эритроцитарного поликлонального;

- возможность получения неспецифического результата за счет наличия в исследуемом материале протеолитических ферментов, гетероантигенов или некоторых химических примесей;

- возможность спонтанной агглютинации диагностикума в нормальной кроличьей сыворотке, используемой в качестве стабилизатора для разведения исследуемых материалов. [1, 2].

Известна тест-система иммуноферментная для выявления антител к чумному микробу (ИФА-АТ-Ф1 Yersinia pestis) [3, 4, 5]. Тест-система представляет собой полистироловые планшеты для ИФА однократного применения, сенсибилизированные чумным антигеном F1 и набор реактивов, необходимых для проведения ИФА. Для выявления специфического комплекса «антиген F1+антитела к F1» тест-система содержит стафилококковый белок А, конъюгированный с пероксидазой хрена. Тест-система предназначена для целей серодиагностики чумы путем выявления в сыворотке крови антител, специфичных к чумному F1 антигену методом прямого гетерогенного иммуноферментного анализа.

Данной тест-системе присущи те же недостатки, что и другим иммуноферментным тест-системам: необходимость наличия сложного и дорогостоящего оборудования, что требует дополнительной подготовки персонала; необходимость дополнительного этапа субстратного проявления комплексов антител с мечеными ферментом антигенами, что увеличивает время анализа; использование канцерогенных веществ.

Известен антигенный F1-диагностикум, разработанный на основе окрашенного полиакролеинового латекса [6]. Диагностикум представляет собой суспензию полиакролеиновых частиц, сенсибилизированных чумным антигеном F1, и предназначен для иммунодиагностики чумы в реакции непрямой суспензионной агглютинации пластинчатым методом (на предметном стекле) или пробирочным методом.

К недостаткам латексных диагностикумов относят то, что партии латекса разнятся по сорбционной активности, что затрудняет стандартизацию диагностикума; гидрофилизированные участки латексного носителя экранируют полимерные цепи иммунореагентов в поверхностном слое латексных частиц, что снижает чувствительность диагностикума; при использовании сорбционных методов нагрузки латексных частиц диагностикум снижает свою чувствительность в 4-8 раз уже в течение месяца; зачастую срок использования латексных диагностикумов сокращается за счет десорбции специфического белка с поверхности полимера из-за конкуренции с балластным белком, содержащимся в диагностикуме; и, наконец, латексным диагностикумам присущ недостаток, характерный для всех диагностикумов, используемых в иммуносуспензионных реакциях - неспособность выявить неполные антитела в прямых методах, что также уменьшает их чувствительность [6, 7, 8, 9].

Известен иммунодиагностикум для определения сывороточных антител к инфекционным агентам методом дот-иммуноанализа на пористых стрипах, представляющий собой водную взвесь частиц активированного угля с размерами менее 10 мкм, сорбционно связанных с одним из специфических иммунореагентов антигенами или антивидовыми антителами или стафилококковыми протеинами А или G при соотношении по массе маркера к иммунореагенту в диапазоне от 1000:1 до 10000:1 и стабилизированных высокомолекулярными полимерами. Основным недостатком является сравнительно низкая стабильность диагностикума из-за обратимости сорбционных связей в условиях длительного хранения и/или при хранении диагностикума без соблюдения «холодовой цепи».

Наиболее близким аналогом (прототипом) является диагностикум с углеродной меткой для дот-иммуноанализа, на которой сорбирован видоспецифический чумной капсульный антиген фракция 1 (F1), полученный из штамма Yersinia pestis EV НИИЭГ [10]. Диагностикум представляет собой взвесь углеродных частиц неопределенного размера, сенсибилизированных чумным антигеном F1.

Основным недостатком прототипа является низкая стабильность диагностикума, приводящая к потере чувствительности при использовании в дот-иммуноанализе, и обусловлено это тем, что антиген F1 конъюгирован с углеродной частицей путем физической адсорбции, которая обратима и сопровождается процессом десорбции. При хранении диагностикума в нем устанавливается адсорбционное равновесие, выражающееся в том, что в диагностикуме всегда будет находиться некоторое количество антигена в свободном, несвязанном с оптической меткой состоянии. Несвязанные антигены будут конкурировать с сорбированным антигеном в иммунохимической реакции, тем самым снижая чувствительность диагностикума. Добавление в такой диагностикум неспецифических белков или полимеров, призванных блокировать свободные активные сорбционно-активные участки на оптической метке и предотвращать неспецифическое связывание диагностикума с выявляемыми антителами, приводит к конкуренции с сорбированным антигеном, что еще больше снижает чувствительность диагностикума. Кроме того, учитывая, что процесс десорбции зависит от температуры (чем выше температура, тем выше десорбция), то требуется соблюдение «холодовой цепи» при транспортировке и хранении такого диагностикума.

Задача изобретения заключается в создании чумного антигенного F1 диагностикума, позволяющего повысить чувствительность при индикации специфических антител.

Технический результат обеспечивает повышение чувствительности метода дот-иммуноанализа за счет стабилизации антигена на поверхности углеродной метки, что приводит к повышению эффективности анализа, позволяющего выявлять специфические антитела в более низких титрах.

Указанный технический результат достигается разработкой диагностикума для индикации специфических антител к F1 антигену чумного микроба, представляющего собой взвесь композитных частиц, состоящих из углеродной метки размером не более 500 нм, заключенных в полимерную матрицу, представляющую собой привитой сополимер бычьего сывороточного альбумина с чумным капсульным антигеном F1, при следующем соотношением компонентов, мг/мл:

Углеродная метка 20-30
Бычий сывороточный альбумин 5-10
Антиген F1 0,2-1,0,

при этом полученные частицы композита стабилизированы в забуференном физиологическом растворе рН 7,0-7,4 высокомолекулярными полимерами и неионными детергентами.

В заявляемом диагностикуме антиген F1 стабилизирован на поверхности матрицы композитных частиц путем ковалентных связей. Ковалентные связи значительно превосходят по силе адсорбционные связи и не позволяют антигену F1 находиться в диагностикуме в свободном состоянии, как в диагностикуме-прототипе. В результате предотвращается конкурентное взаимодействие свободных, несвязанных с углеродной меткой, молекул антигена F1 с антителами исследуемой сыворотки, фиксированными в виде пятна (реакционная зона) на мембране.

Кроме того, белковые молекулы, содержащиеся в жидкой части диагностикума для его стабилизации, могут неспецифически связываться с белками сыворотки крови в реакционной зоне за счет белок-белкового взаимодействия и экранировать тем самым активные центры специфичных к антигену F1 антител, выступая, таким образом, в роли конкурентов специфической реакции антиген-антитело в области реакционной зоны.

Ковалентно связанный антиген F1 позволяет вводить в диагностикум поверхностно-активные вещества, относящиеся к группе неионных детергентов (например, твин 20), обеспечивающие дополнительную стабилизацию композитных частиц диагностикума и предотвращающие указанные белок-белковые взаимодействия в реакционной зоне, что также приводит к повышению чувствительности предлагаемого диагностикума.

Приготовление композитного диагностикума состоит из нескольких этапов:

A. Приготовление оптической метки с частицами заданного размера;

Б. Приготовление композитного носителя путем создания на поверхности метки полимерной матрицы и его активация путем присоединения спейсера;

B. Формирование привитого сополимера чумного антигена F1 на поверхности активированного композита;

Г. Блокирование свободных активных групп спейсера;

Д. Очистка композитных частиц диагностикума и его стабилизация.

А) 0,5 г активированного таблетированного угля измельчают до мелкодисперсного порошка. Порошок увлажняют этанолом и взвешивают в дистиллированной воде в соотношении 1:20-1:30 и проводят ультразвуковую дезинтеграцию при частоте излучения 22 кГц и мощности 400 Вт в течение 10-20 мин.

Полученную угольную суспензию трижды отмывают дистиллированной водой от наполнителя, содержащегося в таблетированной форме угля, путем центрифугирования при 19000 g по 5 минут. Полученный осадок ресуспендируют в начальном количестве дистиллированной воды и повторно проводят ультразвуковую дезинтеграцию при указанном режиме.

Полученную угольную суспензию центрифугируют при 4700 g 5 мин для удаления крупных частиц угля. Супернатант содержит угольные частицы размером не более 500 нм (контролируется микроскопией).

Б) 5 мл угольной суспензии, приготовленной на первом этапе, содержащей 20-30 мг/мл угольных частиц, смешивают с 20 мл раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА), содержащего 5-10 мг/мл белка в 0,1 М фосфатно-солевом буфере (ФСБ) рН 7,0-7,4, при постоянном интенсивном перемешивании путем пипетирования. Полученную смесь обрабатывают ультразвуком 10 сек при 22 кГц и мощности 400 Вт. Смесь инкубируют при 4-10°С в течение 16-24 часов для физической адсорбции БСА на частицах оптической метки. По окончании адсорбции угольно-белковую суспензию отмывают трехкратно ФСБ рН 7,0-7,4 центрифугированием при 19000 g 20 мин. Осадок ресуспендируют в 5 мл 0,1 М ФСБ рН 7,0-7,4.

Для формирования полимерной матрицы 20 мл 25-50% глутарового альдегида (или иного бифункционального спейсера в подходящей концентрации) смешивают с полученной угольно-белковой суспензией при постоянном мягком перемешивании (переворачивание пробирки каждые 5-10 мин). При этом угольно-белковую суспензию добавляют в раствор глутарового альдегида небольшими порциями. Смесь инкубируют 3-5 часов при мягком перемешивании при комнатной температуре для формирования полимерной формы БСА на поверхности угольных частиц и формирования на поверхности функциональных групп (-СОН), способных связываться со свободными аминогруппами белков (- NH2).

Образовавшуюся суспензию активированного композита отмывают от не прореагировавших компонентов 0,1 М ФСБ рН 7,0-7,4 дополнительно содержащим 0,01 - 0,005% неионного детергента (например, Твин 20), путем центрифугирования при 19000g 20 мин не менее 3-4 раз. Осадок ресуспендируют пипетированием в 5 мл 0,1 М ФСБ рН 7,0-7,4, содержащим 0,01-0,005% неионного детергента (Твин 20).

Добавление неионного детергента способствует стабилизации композитных частиц, что позволяет проводить многократное центрифугирование и ресуспендирование, обеспечивающее возможность полноценной очистки диагностикума от непрореагировавших реагентов.

В) К 5 мл полученной суспензии активированного композита добавляют 1 мл раствора чумного F1-антигена (концентрация 1-5 мг/мл) при постоянном перемешивании. Полученную смесь инкубируют при комнатной температуре 3-5 часов при мягком перемешивании (не использовать вортекс или ультразвук). При увеличении времени инкубации увеличивается количество ковалентно связанного антигена.

Г) К 5 мл полученных композитных частиц, содержащих полимерную матрицу в виде привитого сополимера F1, для блокировки свободных активных групп спейсера добавляют 3 мл 1М раствора лизина (рН 7,0). Смесь инкубируют 2-5 часов при мягком перемешивании.

Д) Полученную взвесь композитных частиц диагностикума отмывают от несвязавшихся реагентов центрифугированием при 19000g 20 мин (не менее 3-4 раз) 0,1 М ФСБ, рН 7,0 - 7,4, содержащим 0,01-0,005% Твина 20.

После отмывки частиц диагностикума осадок ресуспендируют пипетированием в 5 мл забуференного физиологического раствора, рН 7,2-7,4, содержащего 0,5% БСА и 0,01-0,005% Твина 20, а для консервации добавляют мертиолят натрия в конечном разведении 1:10000.

Возможность использования антигенного диагностикума подтверждается примерами его конкретного выполнения.

Пример 1. Использование приготовленного диагностикума для выявления антител к антигену F1 в сыворотке крови.

Исследуемую сыворотку крови разводят забуференным физиологическим раствором до разведения 1:400. 2-3 мкл разведенной сыворотки крови наносят на стрип из нитроцеллюлозной мембраны (Владисарт, Россия) с размером пор 0,2 мкм. Стрип высушивают на воздухе в течение 15 минут. Высушенный стрип помещают в блокирующий раствор (1-3% раствор БСА в 0,1 М ФСБ) на 30 минут при комнатной температуре. Заблокированный стрип промывают физиологическим раствором с 0,05% Твина 20. На стрип наливают готовый диагностикум и инкубируют при комнатной температуре 30-60 мин. По окончании инкубации стрип промывают дистиллированной водой и высушивают на фильтровальной бумаге. При наличии в исследуемой сыворотке крови антител, специфичных к чумному капсульному антигену F1, на месте нанесения сыворотки крови образуется серое пятно, отличное от фона (фиг. 1). На фигуре 1 приведен дот-иммуноанализ с использованием заявляемого диагностикума. Цифрами обозначены ряды дот-иммуноанализа с различными образцами сыворотки крови. Ряд 1 - дот-иммуноанализ с образцами сыворотки крови, содержащими антитела к антигену F1 чумного микроба, Ряд 2 - дот-иммуноанализ с образцами сыворотки крови, не содержащими указанных антител.

На стрип может быть нанесено несколько проб сывороток крови от различных животных или людей.

Пример 2. Определение титра антител в сыворотке крови.

Готовят двукратные разведения исследуемой сыворотки крови. На нитроцеллюлозный стрип аликвотами по 2 мкл наносят каждое разведение сыворотки крови. Все дальнейшие манипуляции проведения дот-иммуноанализа идентичны примеру 1.

Результат приведен на фигуре 2. На фигуре цифрами обозначены столбцы проб, содержащих различные разведения испытуемой сыворотки. Верхний ряд содержит двухкратные разведения сыворотки, (слева направо) от 1:50 до 1:800, нижний ряд - разведения сыворотки от 1:1600 до 1:25000.

Учет результатов: Титр антител в сыворотке крови определяется по последнему разведению, в котором выявляется пятно серого цвета, хорошо отличимое от фона стрипа.

Пример 3. Сравнение чувствительности дот-иммуноанализа с использованием заявляемого композитного диагностикума и диагностикума-прототипа.

Готовят двукратные разведения сыворотки крови, содержащей антитела к фракции 1 (F1) чумного микроба. Из каждого разведения сыворотки по 2-3 мкл наносят на два стрипа из нитроцеллюлозной мембраны (Владисарт, Россия) с размером пор 0,2 мкм. Все дальнейшие манипуляции проведения дот-иммуноанализа идентичны примеру 1. За исключением того, что один стрип обрабатывается предлагаемым диагностикумом, а второй обрабатывается диагностикумом-прототипом. По окончании инкубации стрипов, их промывки и высушивания учитывают результат. Результат приведен в таблице, из которой видно, что полученный композитный чумной антигенный F1-диагностикум характеризуется более высокой чувствительностью в дот-иммуноанализе, чем прототип, позволяя выявлять специфические антитела в более высоких титрах.

Таким образом, за счет повышения стабильности диагностикума, достигаемого в результате включения чумного антигена F1 в состав матрицы композита в качестве привитого сополимера, чувствительность метода дот-иммуноанализа повышается в 4 раза, а эффективность выявления антител возрастает.

Источники патентной и научно-технической информации

1. Зайцев А.А. Теоретическое и научно-методическое обоснование использования белковых фракций чумного микроба при создании новых диагностических препаратов и тест-систем / Автореферат на соискание ученой степени доктора биологических наук по специальности 03.00.23 Биотехнология.- Ставрополь, 2006.

2. Патент РФ 2493871. - Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) с целью индикации бруцелл в патматериале /Яникова Э.А., Юсупов О.Ю., Хаиров С.Г. - Опубликовано 27.09.2013.

3. ТУ 9388-041-01898109-2011 «Тест-система иммуноферментная для выявления антител к чумному микробу (ИФА-Ат_Ф1 Yersinia pestis».

4. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител к чумному микробу / Девдариани З.Л., Терешкина Н.Е., Голова А.Б., Шарова И.Н., Аленкина Т.В., Лобовикова О.А., Шульгина И.В., Ермаков Н.М., Терехова И.В., Полунина Т.А., Тараненко Т.М., Киреев М.Н. // Метериалы конференции 3-ей научно-практической школы-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора «Современные технологии обеспечения биологической безопасности».- 31 мая-2 июня, 2011 г. - Оболенск, 2011.- с. 178 - 180.

5. Результаты модельных экспериментов по конструированию тест-системы иммуноферментной для выявления антител к Ф1 чумного микроба (ИФА-Ат_Ф1 Yersinia pestis) / Девдариани З.Л., Терешкина Н.Е., Тараненко Т.М., Киреев М.Н., Терехова И.В., Григорьева Г.В., Исляева М.Н., Ермаков Н.М., Виноградова Н.А., Малахаева А.Н./ Проблемы особо опасных инфекций.- вып. 1, 2013.- с. 74-77.

6. Патент РФ 2199750. Способ получения диагностикума суспензионного антигенного на основе фракции 1. / Зайцев А.А. - Опубликовано 27.02.2003.

7. Патент РФ 2298798. Способ контроля биологической пробы в реакции латекс-агглютинации и аналитическая система осуществления./ Зимина Т.М. с соавт.- Опубликовано 10.05.2007.

8. Патент РФ 2231366. Иммунодиагностикум на основе полистирольного латекса./ Леонова В.Б., Розенфельд М.А. - Опубликован 27.06.2004.

9. Вершигора А.Е. Общая иммунология //Киев «Выща школа».- 1990.- 736 с.

10. Использование дот-иммуноанализа с углеродной меткой для тестирования специфических антител к возбудителям чумы и холеры / Полунина Т.А., Киреев М.Н., Тараненко Т.М., Громова О.В., Захарова Т.Л. //Биотехнология.- 2007.-№6.- С. 72-75.

Композитный чумной антигенный

F1-диагностикум для индикации

специфических антител

1. Композитный чумной антигенный F1-диагностикум для индикации специфических антител, содержащий водную взвесь углеродных частиц, связанных с F1 антигеном, отличающийся тем, что углеродная метка размером не более 500 нм заключена в полимерную матрицу, представляющую собой привитой сополимер бычьего сывороточного альбумина с чумным капсульным антигеном F1, при следующем соотношением компонентов, мг/мл:

Углеродная метка 20-30
Бычий сывороточный альбумин 5-10
Антиген F1 0,2-1,0,

а полученные частицы композита стабилизированы в забуференном физиологическом растворе рН 7,0-7,4 высокомолекулярными полимерами и неионными детергентами.

2. Диагностикум по п. 1, отличающийся тем, что в качестве высокомолекулярного полимера используют 0,5% БСА, а в качестве неионного детергента 0,01-0,005% Твина 20.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицинской аллергологии, иммунологии, медицинской лабораторной диагностике. Сущность способа состоит в том, что в периферической крови обследуемых лиц определяют концентрацию IgE и абсолютное содержание лимфоцитов СD23+.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки реакции бласттрансформации лимфоцитов. Для этого используют бруцеллин для специфической активации лимфоцитов.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики меланомы хориоидеи. Сущность способа состоит в том, что у пациента с подозрением на меланому хориоидеи осуществляют забор слезной жидкости из обоих глаз, далее определяют концентрацию в слезной жидкости интерлейкина-8 и при значении этого показателя выше 17,7 пг/мл диагностируют меланому хориоидеи.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для патоморфологической диагностики хронического аппендицита. Способ заключается в следующем: образец ткани фиксируют, изготавливают срезы, инкубируют с реагентом и проводят обработку проявляющим агентом, дегидратацию и заключение в среду.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его функциональному фрагменту, которые способны связывается с cMet. Также раскрыты мышиная гибридома, способная секретировать указное антитело, нуклеиновая кислота, которая экспрессирует указанное антитело и набор для прогнозирования эффективности лечения онкогенного расстройства, включающий указанное антитело.
Изобретение относится к медицине, а именно к малоинвазивным методам в хирургической эндокринологии, и касается дифференциальной диагностики образований шеи. Способ включает ультразвук-контролируемую тонкоигольную аспирационную пункционную биопсию, которую выполняют однократно одной иглой через один прокол.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и предназначено для прогнозирования течения вакцинального процесса у детей, имеющих неврологические нарушения ЦНС.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для диагностики формирования фетоплацентарной недостаточности при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине и касается способа оценки эффективности лечения больных хроническим бруцеллезом. Сущность способа заключается в том, что у больных хроническим бруцеллезом в фазе обострения до начала терапии и по ее окончании проводится определение сывороточного уровня ФНО α, ИФН γ, ИЛ 10, рассчитывается соотношение ИФН γ / ИЛ 10.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования развития безрецидивной выживаемости у больных множественной миеломой после аутологической трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено выделенное моноклональное антитело к FcRH5, охарактеризованное последовательностями HVR. Также рассмотрены: полинуклеотид, вектор экспрессии и клетка-хозяин для получения антитела по изобретению. Кроме того, на основе антитела по изобретению предложены иммуноконъюгаты, предназначенные для ингибирования роста клеток, экспрессирующих FcRH5; для определения присутствия FcRH5; для лечения расстройства, связанного с повышенной экспрессией и/или активностью FcRH5; а также фармацевтическая композиция для лечения расстройства, связанного с повышенной экспрессией и/или активностью FcRH5. Показано применение иммуноконъюгата по изобретению для получения лекарственных средств для ингибирования роста клеток, экспрессирующих FcRH5, и для лечения пролиферативного расстройства, опосредованного FcRH5. Также представлен способ получения конъюгата по изобретению и способ in vitro определения присутствия FcRH5 в образце. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в терапии и диагностике заболеваний, связанных FcRH5. 14 н. и 47 з.п. ф-лы, 31 ил., 7 табл., 13 пр.

Изобретение относится к областям биологии и генетической инженерии. Предложен выделенный пептид для терапевтических целей, содержащий последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную SEQ ID NO:4 (GG00444), или его фрагмент или вариант, способные связываться со слизью кишечника человека, а также содержащая его ворсинчатая структура, пищевой продукт, фармацевтическая композиция, полинуклеотид, экспрессионный вектор, клетка-хозяин, кластер генов, антитело, способ лечения и способ скрининга пробиотических бактериальных штаммов. 20 н. и 11 з.п. ф-лы, 11 ил., 2 табл., 11 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики различных форм адренокортикальной карциномы (АКК), синдрома Иценко - Кушинга (СИК) и гормонально-неактивных аденом (ГНА) коры надпочечников. Способ заключается в проведении иммунохемилюминесцентного (ИХЛА), радиоиммунологического (РИА) методов анализа, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ/МС) с определением значений диагностических показателей, согласно которым присваивают соответствующую форму новообразования коры надпочечников. Изобретение обеспечивает значительное повышение точности и чувствительности дифференциальной диагностики новообразований коры надпочечников. 5 пр., 8 табл.
Изобретение относится к медицине и касается способа определения состава индивидуальных внеклеточных везикул в крови человека, заключающегося в том, что кровь пациента берут из периферической вены, центрифугируют, получают плазму, обедненную тромбоцитами, хранят в замороженном виде, после размораживания проводят связывание EVs с МНЧ, предварительно конъюгированными с антителами, специфичными к различным поверхностным антигенам везикул, и меченными флуоресцентным Fab-фрагментом иммуноглобулина G; окрашивают полученный раствор МНЧ-EVs, к половине растворов с комплексами МНЧ-EVs добавляют флуоресцентные изотипические контроли; проводят иммобилизацию комплексов МНЧ-EVs-антитело с помощью магнитных колонок и промывание магнитных колонок, растворяют в буфере и фиксируют; к полученному раствору добавляют полистереновые частицы; полученные МНЧ-EVs комплексы, меченные антителами, анализируют на проточном цитометре. Изобретение обеспечивает определение состава всех фракций индивидуальных внеклеточных везикул (EVs) в крови человека для дальнейшего изучения их роли в патогенезе атеросклероза и процессе дестабилизации атеросклеротических бляшек. 1 пр.

Изобретение относится к области профилактической медицины и предназначено для прогнозирования сенсибилизации организма к формальдегиду у подростков. Предложен способ, включающий определение в крови относительного количества эозинофилов, относительного содержания ауто-АТ к мембранным антигенам паренхимы легких и расчет диагностического коэффициента у по формуле. При у меньше 0,5 делают заключение об отсутствии реакции организма на формальдегид и отсутствии к нему сенсибилизации организма. При у больше 0,5 реакцию на формальдегид считают положительной и прогнозируют сенсибилизацию организма к формальдегиду. Изобретение обеспечивает эффективное прогнозирование сенсибилизации организма к формальдегиду. 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, онкологии и может быть использовано для прогнозирования развития острого повреждения почки в условиях тепловой ишемии в эксперименте в зависимости от возраста и пола животных. При росте содержания цистатина С у молодых самцов в 1,7 раза, у старых самок в 1,3 раза и/или при росте содержания L-FABP у молодых самцов в 1,8 раз, у старых самок в 5,8 раз при длительности ишемии 15 минут прогнозируют развитие острой почечной недостаточности. При росте содержания цистатина С в 1,2 раза у молодых самок и в 1,5 раза у старых самцов и/или при росте содержания L-FABP в 1,6 раза у старых самцов при длительности ишемии 25 минут прогнозируют развитие острой почечной недостаточности. Способ позволяет доступно провести прогнозирование развития острой почечной недостаточности за счет оценки уровня цистатина С, L-FABP в зависимости от возраста и пола животных и длительности тепловой ишемии. 2 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования повышения артериальной жесткости у пациентов с высоким и очень высоким сердечно-сосудистым риском, получающих терапию статинами. Поставленная задача решается определением в сыворотке крови секреторной фосфолипазы A2 (sPLA2) до начала терапии статинами. При исходном значении sPLA2 в сыворотке крови пациентов, равном 7,69 нг/мл и более, прогнозируют повышение артериальной жесткости в течение 6 месяцев от начала терапии статинами. При исходном значении sPLA2, равном 4,09 нг/мл и менее, прогнозируют отсутствие повышения артериальной жесткости в течение 6 месяцев на терапии статинами. Предлагаемый способ позволяет прогнозировать повышение артериальной жесткости у данной группы больных путем использования нового биомаркера крови, провести коррекцию терапии и снизить остаточный кардиоваскулярный риск. 2 пр.
Изобретение относится к медицине. Способ характеризуется тем, что в сыворотке крови пациента определяют концентрации пепсиногенов I и II, вычисляют отношение концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II. При величине данного отношения, равной или ниже нижней границы нормы, определяют концентрацию интерферона-γ (IFNγ) в супернатанте пробы крови данного пациента после ее инкубации с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без него, вычисляют индекс влияния (ИВ) РЭА на продукцию IFNγ (ИВ РЭА IFNγ) клетками крови по формуле: ИВ РЭА IFNγ=А/Б, где А - концентрация IFNγ в супернатанте пробы крови после ее инкубации с РЭА, Б - концентрация IFNγ в супернатанте пробы крови без ее инкубации с РЭА, и при величине ИВ РЭА IFNγ, равной или ниже 1,2, делают вывод о наличии у пациента дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени, а при величине ИВ РЭА IFNγ, превышающей 1,2, делают вывод об отсутствии дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка у данного пациента или о наличии у него дисплазии 1-й степени. При использовании для иммуноферментного анализа наборов реагентов «Пепсиноген 1 - ИФА - БЕСТ» и «Пепсиноген 2 - ИФА - БЕСТ» производства ЗАО «Вектор-Бест» нижнюю границы нормы отношения концентрации пепсиногена I к концентрации пепсиногена II принимают равной трем. Способ позволяет выявить дисплазию (клеточный атипизм) эпителия слизистой оболочки желудка 2-й или 3-й степени у пациентов, у которых еще не была обнаружена атрофия слизистой оболочки желудка, т.е. предлагаемый способ дает возможность формировать группы риска пациентов по развитию у них опухолевой патологии желудка и проводить ее профилактику. Способ высокочувствителен, высокоспецифичен, низкоинвазивен. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения антител к аллогенным HLA-G в сыворотки крови. Для этого используют тест перекрестной совместимости (cross match) мононуклеаров донора с сывороткой реципиента. Проводят анализ субпопуляций мононуклеаров с помощью проточной цитофлуорометрии на связывание моноклональных антител HLA-G и оценивают степень экспрессии HLA-G на опытных и контрольных мононуклеарах донора. При этом значимыми являются субпопуляции CD3-HLA-G+ и CD3+HLA-G+, по которым рассчитывают коэффициент подавления (КП) в опытной постановке по отношению к контрольной по формуле: КП HLA-G = ( H L A − G О П − H L A − G К О Н Т ) H L A − G К О Н Т × 100, где HLA-Gоп - суммарное относительное число субпопуляций экспрессирующих HLA-G: (CD3-HLA-G++CD3+HLA-G+) в опытной постановке, %; HLA-Gконт - суммарное относительное число субпопуляций экспрессирующих HLA-G: (CD3-HLA-G++CD3+HLA-G+) в контрольной постановке, %. При этом наличие сенсибилизации к аллогенным HLA-G диагностируют при отрицательном значении КПHLA-G. Использование данного способа позволяет выявлять аллогенную сенсибилизацию к HLA-G с помощью проточной цитофлуориметрии, определяя субпопуляции CD3-HLA-G+ и CD3+HLA-G+. 3 пр., 3 ил., 2 табл.
Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики остеопороза при ревматоидном артрите. Сущность способа заключается в том, что в сыворотке крови больных определяют концентрацию белков и пептидов и дополнительно исследуют уровень адипонектина. При сывороточной концентрации адипонектина 44 мкг/мл и выше диагностируют наличие остеопороза, при его значениях 43,9 мкг/мл и ниже - диагностируют нормальную минеральную плотность костной ткани. Использование способа позволяет повысить точность диагностики остеопороза у больных ревматоидным артритом. 4 пр.
Наверх