Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины, содержащей активное вещество и целевые добавки. В качестве активного вещества вакцина содержит смесь из авирулентных очищенных антигенных материалов из штаммов вируса ящура А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, А №2187/Кути/2013, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и О №2123/Южная Осетия/2011, полученных в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющих собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура. Кроме того, вакцина содержит поддерживающую среду и масляный адъювант в эффективных соотношениях. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 7,4-7,6. Из масляных адъювантов вакцина содержит масляный адъювант марок Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206 производства фирмы «Seppic» (Франция). Вакцина обеспечивает защиту от возбудителя инфекции, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока. 14 з.п. ф-лы, 4 ил., 8 табл., 9 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, касается вакцины инактивированной эмульсионной с биштаммовым антигеном, которая может быть использована для специфической профилактики парнокопытных животных против вируса ящура типов А, О, Азия-1.

Проблема профилактики ящура у животных и снижения экономического ущерба от его возникновения и распространения, способных вызывать чрезвычайные ситуации в животноводстве с тяжелыми социально-экономическими последствиями, актуальна для многих стран мира, в том числе и для Российской Федерации.

Ящур представляет собой мировую проблему, так как является высоко контагиозным и быстро распространяющимся заболеванием, к которому восприимчивы основные сельскохозяйственные животные: крупный рогатый скот(КРС), свиньи, мелкий рогатый скот(МРС), и многие дикие животные, всего более 100 видов. Имеются 7 разных типов вируса, вакцинация против одного типа не защищает от ящура другого типа [1].

Для профилактической вакцинации нашли практическое применение традиционные моно- и поливалентные сорбированные и эмульсионные вакцины, изготовленные из культурального вируса, выращенного в суспензии ВНК-21, инактивированного аминоэтилэтиленимином [2].

Несмотря на принимаемые меры, эпизоотическая ситуация по ящуру в мире, том числе и в странах Азии, в 2013 г. не улучшилась. С начала 2013 года и в последующее время в Китае в ряде провинций были отмечены вспышки ящура среди КРС и свиней, вызванные вирусом типов О и А. В 2013 году в 4 пограничных с Китаем районах Забайкальского края отмечены 9 вспышек ящура. По данным Всемирной референтной лаборатории МЭБ по ящуру, выделенные на территории Забайкальского края и Амурской области Российской Федерации, Казахстана и Монголии, изоляты на 99% идентичны изолятам A/QHXN-CHA-2013-B и A/GDMM-CHA-2013S. В 2013 г. заболевание ящуром среди КРС отмечено на Северном Кавказе и в Краснодарском крае. Выделенные изоляты относились к генетической линии А/Иран/2005. Изоляты данной генетической линии в 2013 г. вызывали вспышки ящура на территории стран Ближнего Востока [3].

Следует отметить, что все выделенные изоляты отличаются в антигеном отношении от штаммов вируса ящура типа А, используемых до последнего времени для изготовления противоящурных вакцин [3].

Благодаря систематической вакцинации животных и контролю иммунного фона поголовья, подавляющее большинство субъектов РФ, в том числе Северного Кавказа, длительное время являются благополучными по ящуру. Однако неблагоприятная эпизоотическая обстановка по ящуру в мире и реальная возможность заноса возбудителя на территорию России диктует необходимость усиления противоящурных мероприятий, среди которых основным является осуществление профилактической поголовной вакцинации животных в зонах высокого риска возникновения и распространения ящура [4].

Опубликованные результаты исследований свидетельствуют о преимуществах эмульсионных препаратов, которые готовят с использованием масляных адъювантов [5, 6].

Эмульсионные препараты получают в результате смешивания двух взаимно нерастворимых фаз: масляной (масляного адъюванта) и водной, содержащей антиген (антигены) в поддерживающей среде, - путем их энергичного перемешивания (эмульгирования).

При этом в зависимости от состава масляного адъюванта получают эмульсии различных типов: «вода в масле» (обратная), «масло в воде» (прямая) или «вода-масло-вода» (множественная). Для иммунизации сельскохозяйственных животных наиболее широко используют эмульсии обратного типа.

Технология изготовления противоящурной вакцины из инактивированного вируса начинается с подбора производственных штаммов на основе эпизоотологического анализа динамики ящура в стране и сопредельных государствах. При создании препаратов для специфической профилактики используют соответствующие типы вируса ящура и подбирают штаммы с широким антигенным спектром внутри типа с выраженной перекрестной иммуногенностью. Штамм с широким спектром иммуногенности и удовлетворяющий требованиям региона выбирают с помощью его испытания в реакции перекрестной защиты или чаще в реакции перекрестной нейтрализации. Как правило, в качестве производственного штамма используется популяция вируса, которая в совокупности с системой и условиями промышленного культивирования обеспечивает гарантированное и высокое накопление 146S и 75S компонентов вируса и получение иммуногенной вакцины.

Кроме того, производственному штамму предъявляются требования стабильности вируса в процессе очистки от тканевых компонентов и концентрирования, а также сохранения вируса при инактивации и длительном его хранении [7].

Возбудитель ящура обладает значительной антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях и зависит от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других различных факторов.

Антигенная изменчивость вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков. Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма приводят к тому, что вакцинация животных производственным вакцинным штаммом не гарантирует защиту поголовья от антигенно отличающихся эпизоотических штаммов вируса ящура [7, 8].

Зарубежные ученые показали, что смесь из двух вакцин, обусловила защиту у морских свинок против гетерологичного штамма, в то время как каждая из них в отдельности не обеспечивала иммунного ответа против гетерологичного штамма вируса ящура [9].

Отечественные ученые провели исследования по сравнению иммуногенной активности моно- и полиштаммовых вакцин. Из полученных результатов следует, что введение в состав вакцины других, антигенно отличающихся штаммов вируса данного типа приводит к расширению антигенного спектра действия, за счет чего повышается иммуногенная активность полиштаммовой вакцины в отношении гомо- и гетерологичных штаммов вируса данного типа и не снижается активность против производственного [10].

Разработка новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики ящура является актуальной задачей.

Известна трехвалентная инактивированная эмульсионная вакцина против вируса ящура типов А, О и Азия-1 RAKSHA OVAC TRIVALENT производства INDIAN IMMUNOLOGICALS LIMITED RAKSHAPURAM, GACHIBOWLI HYDEREBAD, Индия [11].

Известна инактивированная вакцина «Decivac FMD DOE» (Децивак) против ящура крупного рогатого скота, буйволов, свиней, овец и коз «MSD Animal Health (Intervet International GmbH», Германия [12].

Известна вакцина инактивированная очищенная против ящура жвачных животных и свиней «Aftopor» (Автопор) трехвалентная (тип А, О, Азия-1) Компания «Merial Animal Health Ltd », Франция [13].

Известна вакцина FUTVAC (Foot and Mouth Disease Vaccine, Inactivated, types O,A, Asia-1) Brilliant Bio Pharma Limited, Hyderabad)), India [14].

Известна вакцина против ящура культуральная инактивированная эмульсионная «АРРИАХ-ВАК» трехвалентная [15].

Основным недостатком известных вакцин является невысокая эффективность из-за существующих антигенных различий между штаммами одного типа вируса ящура, а также недостаточной очищенности антигенных материалов.

Задачей изобретения является получение вакцины инактивированной эмульсионной типов А, О, Азия-1, обладающей высокой иммуногенной активностью с широким спектром антигенности при вакцинации от различающихся эпизоотических штаммов вируса ящура.

Поставленная задача достигается тем, что для профилактики и борьбы с заболеванием получена вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов А, О, Азия-1 с биштаммовым антигеном вируса ящура типа А, создающая эффективную защиту восприимчивых животных от заражения вирусом ящура типов А, О, Азия-1 и имеющая расширенное антигенное действие к вирусу ящура типа А.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в повышении иммуногенной активности вакцины инактивированной эмульсионной против ящура типов А, О, Азия-1, за счет расширения антигенного спектра действия по валентности А.

Указанный технический результат достигнут созданием вакцины инактивированной эмульсионной против ящура типов А, О и Азия-1 с биштаммовым антигеном типа А, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.

Предлагаемая вакцина в 1 см3 препарата в качестве активного вещества содержит смесь авирулентных и очищенных материалов из штаммов вируса ящура: биштаммовый антиген вируса ящура типа А в виде авирулентных и очищенных материалов из штаммов вируса ящура А № 2187/Кути/2013 и А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, авирулентного и очищенного материала из штамма вируса ящура О №2123/Южная Осетия/2011 и авирулентного и очищенного материала из штамма вируса ящура Азия-1 №1946/Шамир 3/89 - полученных предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, в количествах не менее 3 мкг, обеспечивающих антигенную активность в организме животного при введении ему целевого препарата и целевые добавки: поддерживающую среду и масляный адъювант - в количестве, обеспечивающем толерантную презентацию антигена в организме иммунизированного животного. Содержание целевых добавок в готовом препарате рассчитывают с учетом объема прививной дозы вакцины для каждого вида животных.

Исходный вирус для получения штамма вируса ящура А №2187/Кути/2013 выделен в 2013 году в России. Штамм получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первичнотрипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным культурам ВНК-21, IBRS-2 и ПСГК-30.

Исходный вирус для получения штамма

А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 выделен в июле 2013 году в селе Нижний Куркужин Баксанского района Кабардино-Балкарской Республики. Штамм получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первичнотрипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным культурам ВНК-21, IBRS-2 и ПСГК-30.

Штамм вируса ящура Азия-1 №1946/Шамир 3/89 получен из Всемирной справочной лаборатории Pirbright.

Исходный вирус для получения штамма вируса ящура О №2123/Южная Осетия/2011 выделен от свиней в 2011 году в селе Стырфас Дзауского района Республики Южная Осетия. Штамм получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первичнотрипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным культурам ВНК-21, IBRS-2 и ПСГК-30.

Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды раствор Эрла без сыворотки с добавлением ферментативных гидролизатов мышц сухого (ФГМС), гидролизатов белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков при рН 7,4-7,6.

Для инактивации вируса используют АЭЭИ, который добавляют в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025-0,05%. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия [16].

Полученный антиген очищают от балластных примесей с помощью полигексаметиленгуанидина гидрохлорида (ПГМГ), который вносят в суспензию до концентрации 0,005-0,007% [17].

Авирулентный и очищенный антигенный материал из штаммов: А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013,

Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и О №2123/Южная Осетия/2011, представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура.

Количественное и качественное содержание вирусного сырья определяют методом турбидиметрии [18].

Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1 см3 не менее 0,5 мкг 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.

Необходимую концентрацию 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура в вакцинном препарате обеспечивают путем концентрирования антигена проточной ультрафильтрацией.

Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата ящурного антигена и масляного адъюванта в соотношении 3:7 и 1:1 по массе соответственно. Для усиления иммунного ответа преимущественно используют масляный адъювант производства фирмы «Seppic» марок Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206.

Содержание антигена и поддерживающей среды с масляным адъювантом в прививной дозе вакцины для каждого вида животных в соотношении 3:7 и 1:1 является оптимальным, так как обеспечивает толерантную презентацию антигена в организме иммунизированного животного.

Полученная вакцина представляет собой молокоподобную жидкость, не растворимую в воде.

Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:

1. Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов А, О и Азия-1 с биштаммовым антигеном вируса ящура типа А.

2. Активное вещество в виде смеси авирулентных очищенных антигенных материалов из иммуногенных 146S и 75S компонентов вируса ящура штаммов А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и О №2123/Южная Осетия/2011, полученных предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 в эффективном количестве.

3. Целевые добавки.

Существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штаммов А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура, в эффективном количестве.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:

1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, в эффективном количестве.

2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

3. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 типа А, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, в эффективном количестве.

4. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 типа А, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

5. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2123/Южная Осетия/2011 типа О, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, в эффективном количестве.

6. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2123/Южная Осетия/2011 типа О, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

7. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89 типа Азия-1, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, в эффективном количестве.

8. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89 типа Азия-1, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

9. Из целевых добавок вакцина содержит поддерживающую среду.

10. Вакцина содержит поддерживающую среду в количестве 299996,0÷899988,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

11. Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант.

12. Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант ISA-70.

13. Вакцина содержит масляный адъювант ISA-70 в количестве 500000,0÷700000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

14. Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант ISA-206.

15. Вакцина содержит масляный адъювант ISA-206 в количестве 1000000,0÷1575000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

16. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штаммов: А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура, полученных предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и целевые добавки: поддерживающую среду и масляный адъювант в количестве, мкг/см3 препарата для свиней и МРС:

17. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штаммов: А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура, полученных предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и целевые добавки: поддерживающую среду и масляный адъювант в количестве, мкг/см3 препарата для КРС:

Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вируса ящура серотипов А, О и Азия-1, циркулирующих в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Достижение технического результата от использования изобретения достигается тем, что в состав предлагаемой вакцины введен в качестве активного вещества антигенный материал из штамма А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и О №2123/Южная Осетия/2011, обладающий высокой иммуногенной активностью, создающий эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипов А, О и Азия-1, вызывающих вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма А №2187/Кути/2013, был выделен в сентябре 2013 года от больных свиней в селе Кути Приаргунского района Забайкальского края (экспертиза №2187). Производственный штамм получен из данного изолята путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.

Штамм А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А депонирован 22 января 2014 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером (ссылкой): штамм вируса ящура А №2187/Кути/2013 (производственный).

Дендрограмма отражает филогенетическое взаимоотношения штаммов вируса ящура А №2187/Кути/2013 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа А. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1 (Фиг. 1).

Сущность изобретения пояснена в перечне последовательностей, в котором:

SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А;

SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А.

Штамм вируса ящура А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки

Штамм вируса ящура А №2187/Кути/2013 типа А относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу А и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.

Антигенные свойства

По своим антигенным свойствам штамм А №2187/Кути/2013 вируса ящура относится к серотипу А. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА и РМН.

При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа А №2187/Кути/2013 индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:40.

Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 вируса ящура типа А №2187/Кути/2013 и выведена первичная структура белка VP1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм вируса ящура типа А №2187/Кути/2013 значительно отличается от производственных штаммов типа А. Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма А №2187/Кути/2013 со штаммами вируса ящура серологического типа А составило: А22№550 - 21,49%, А22/Ирак/64 - 21,73%, А/Иран/96 - 22,03%, А/Армения/98 - 22,39%, А/Турция/06 - 22,11%, А/Иран/05 - 22,32%.

Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм А №2187/Кути/2013 принадлежит к генетической линии Юго-Восточная Азия 97 (Sea-97) топотипа Азия.

Антигенное родство штамма ВЯ А №2187/Кути/2013 с имеющимися производственными штаммами ВЯ типа А исследовано серологическим методом в перекрестной реакции микронейтрализации (РМН). Штамм А №2187/Кути/2013 антигенно отличается от производственных штаммов А22 №550, А №2179/Щелковский биокомбинат, А/Иран/97, А/Киргизия/07 (А/Иран/05). Штамм ВЯ А №2187/Кути/2013 имеется слабо выраженное антигенное родство со штаммом А/Турция/06 (А/Иран/05).

Результаты исследований в РМН представлены в таблице 1. Антигенное соответствие (r1) составило для А22 №550 -0,13, А №2179/Щелковский биокомбинат -0,11, А/Иран/97 - 0,004, А/Турция/06-0,37, А №2045/Киргизия/07 - 0,13. При значении r1≥0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса [19, 20].

Биотехнологические характеристики

Штамм А №2187/Кути/2013 репродуцируется в первично-трипсинизированной монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), ВНК-21 и IB-RS-2, и в течение 18+24 часов инкубирования вируса в указанных культурах клеток накапливается от 6,0 до 7,0 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 5 пассажей (срок наблюдения).

Гено- и хемотаксономическая характеристика

Штамм А №2187/Кути/2013 вируса ящура типа А является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106 Д.

Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеиновая оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.

Физические свойства

Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.

Устойчивость к внешним факторам

Штамм А №2187/Кути/2013 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,2÷7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.

Дополнительные признаки и свойства

Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.

Антигенная активность - введение инактивированного антигена морским свинкам индуцирует образование вирусоспецифических антител.

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения).

Штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 вируса ящура типа А депонирован 28 января 2014 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером (ссылкой): штамм вируса ящура А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 (производственный).

Дендрограмма отражает филогенетические взаимоотношения штамма вируса ящура А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа А. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1 (Фиг. 2).

Сущность изобретения пояснена в перечне последовательностей, в котором:

SEQ ID NO: 3 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 вируса ящура типа А;

SEQ ID NO: 4 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 вируса ящура типа А.

Штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 вируса ящура типа А характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки:

Штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 вируса ящура типа А относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу А и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.

Антигенные свойства

По своим антигенным свойствам штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 вируса ящура относится к типу А. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА и РМН.

При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:30.

Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 вируса ящура типа А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 и выведена первичная структура белка VP1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм вируса ящура типа А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 значительно отличается от производственных штаммов типа А. Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 со штаммами вируса ящура серологического типа А составила: А22№550 - 22,65%, А22/Ирак/64 - 21,66%, А/Иран/96 - 21,43%, А/Армения/98 - 21,98%, А/Турция/06 - 8,23%, А/Иран/05 - 8,75%.

Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 принадлежит к генетической линии «Иран-2005» топотипа «Азия» вируса ящура серологического типа А и антигенно отличается от имеющихся производственных штаммов ВЯ типа А.

Антигенное родство штамма ВЯ А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 с имеющимися производственными штаммами ВЯ типа А исследовано серологическим методом в перекрестной реакции микронейтрализации (РМН). Штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 антигенно отличается от производственных штаммов А22 №550, А22 Ирак/64, А/Иран/97, А/Турция/06 (А/Иран/05), А/Киргизия/07 (А/Иран/05).

Результаты исследований в РМН представлены в таблице 2. Антигенное соответствие (r1) составило для А22 №550 -0,013, А22 Ирак/64 - 0,02, А/Иран/97 - 0,03, А/Турция/06 - 0,19 и А/Киргизия/2007 -0,03. При значении r1≥0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса [19, 20].

Биотехнологические характеристики

Штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 репродуцируется в монослойных культурах клеток: первично трипсинизированной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), ВНК-21 и IB-RS-2. В течение 18-24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах достигает значений от 6,00 до 7,50 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вирус вызывает ЦПД через 5 часов. Вирус сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 5 пассажей (срок наблюдения).

Гено- и хемотаксономическая характеристика

Штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 вируса ящура типа А является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106 Д.

Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.

Физические свойства

Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.

Устойчивость к внешним факторам

Штамм А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,2-7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.

Дополнительные признаки и свойства

Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей (срок наблюдения).

Штамм О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура типа О депонирован 25 апреля 2013 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером (ссылкой): штамм вируса ящура О №2123/Южная Осетия/2011 (производственный).

Дендрограмма отражает филогенетические взаимоотношения штамма вируса ящура О №2123/Южная Осетия/2011 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа О. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1 (Фиг. 3).

Сущность изобретения пояснена в перечне последовательностей, в котором:

SEQ ID NO: 5 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура типа О;

SEQ ID NO: 6 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура типа О.

Штамм вируса ящура О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура типа О характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки

Штамм вируса ящура О №2123/Южная Осетия/2011 типа О относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу О и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.

Антигенные свойства

По своим антигенным свойствам штамм О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура относится к серотипу О. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА и РМН.

При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа О №2123/Южная Осетия/2011 индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:30.

Филогенетический анализ показал, что штамм О №2123/Южная Осетия/2011 принадлежит к генетической линии О PanAsia 2 топотипа Средний Восток - Южная Азия.

Антигенное родство штамма ВЯ О №2123/Южная Осетия/2011 с имеющимися производственными штаммами ВЯ типа О исследовано серологическим методом в перекрестной реакции микронейтрализации (РМН). Штамм О №2123/Южная Осетия/2011 антигенно родственен к производственным штаммам Маниса, О №1734/Приморский/2000 (ПанАзия), О ПанАзия-2.

Результаты исследований в РМН представлены в таблице 3. Антигенное соответствие (r1) составило для О1 Маниса - 0,74, О №1734/Приморский/2000 (ПанАзия) - 1,0, О ПанАзия-2 - 1,0. При значении r1≥0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса [19, 20].

Биотехнологические характеристики

Штамм О №2123/Южная Осетия/2011 репродуцируется в первично-трипсинизированной монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), ВНК-21 и IB-RS-2, и в течение 18-24 часов инкубирования вируса в указанных культурах клеток накапливается от 6,0 до 7,0 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).

Гено- и хемотаксономическая характеристика

Штамм О №2123/Южная Осетия/2011 вируса ящура типа О является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106 Д.

Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеиновая оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.

Физические свойства

Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.

Устойчивость к внешним факторам

Штамм О №2123/Южная Осетия/2011 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,2÷7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.

Дополнительные признаки и свойства

Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.

Антигенная активность - введение инактивированного антигена морским свинкам индуцирует образование вирусоспецифических антител.

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей (срок наблюдения).

Штамм Азия-1 №1946/Шамир 3/89 вируса ящура типа Азия-1 депонирован 24 ноября 2014 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером (ссылкой): штамм вируса ящура Азия-1 №1946/Шамир 3/89 (производственный).

Дендрограмма отражает филогенетические взаимоотношения штамма вируса ящура Азия-1 №1946/Шамир 3/89 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа Азия-1. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1 (Фиг. 4).

Сущность изобретения пояснена в перечне последовательностей, в котором:

SEQ ID NO: 7 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89 вируса ящура типа Азия-1;

SEQ ID NO: 8 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89 вируса ящура типа Азия-1.

Штамм вируса ящура Азия-1 №1946/Шамир 3/89 вируса ящура типа Азия-1 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки

Штамм вируса ящура Азия-1 №1946/Шамир 3/89 типа Азия-1 относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу Азия-1 и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.

Антигенные свойства

По своим антигенным свойствам штамм Азия-1 №1946/Шамир 3/89 вируса ящура относится к серотипу Азия-1. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА и РМН.

При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа Азия-1 №1946/Шамир 3/89 индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:120.

Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 вируса ящура типа Азия-1 №1946/Шамир 3/89 и выведена первичная структура белка VP1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм вируса ящура типа Азия-1 №1946/Шамир 3/89 значительно отличается от производственных штаммов типа Азия-1. Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89 со штаммами вируса ящура серологического типа Азия-1 составило: Азия-1 №1987/Амурский/2005 - 26%, Азия-1/Таджикистан/2011 - 21,73%, Азия-1/Пакистан 29/09 - 22,03%.

Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм Азия-1 №1946/Шамир 3/89 принадлежит к топотипу Азия-1.

Антигенное родство штамма ВЯ Азия-1 №1946/Шамир 3/89 с имеющимися производственными штаммами ВЯ типа Азия-1 исследовано серологическим методом в перекрестной реакции микронейтрализации (РМН). Штамм Азия-1 №1946/Шамир 3/89 антигенно отличается от производственных штаммов Азия-1 №1987/Амурский/2005, Азия-1/Таджикистан/2011, Азия-1/Пакистан 29/09, Азия-1/Иран 58/99.

Результаты исследований в РМН представлены в таблице 4. Антигенное соответствие (r1) составило для Азия-1 №1987/Амурский/2005 - 0,20, Азия-1 /Таджикистан/2011 - 0,21, Азия-1/Пакистан 29/09 - 0,14.

При значении r1≥0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса [19, 20].

Биотехнологические характеристики

Штамм Азия-1 №1946/Шамир 3/89 репродуцируется в первично-трипсинизированной монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), ВНК-21 и IB-RS-2, и в течение 18÷24 часов инкубирования вируса в указанных культурах клеток накапливается от 6,0 до 7,0 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).

Гено- и хемотаксономическая характеристика

Штамм Азия-1 №1946/Шамир 3/89 вируса ящура типа Азия-1 является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106 Д.

Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеиновая оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.

Физические свойства

Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.

Устойчивость к внешним факторам

Штамм Азия-1 №1946/Шамир 3/89 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,2÷7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.

Дополнительные признаки и свойства

Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.

Антигенная активность - введение инактивированного антигена морским свинкам индуцирует образование вирусоспецифических антител.

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей (срок наблюдения).

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1.

Инактивированную эмульсионную вакцину против ящура типов А, О, Азия-1 с биштаммовым антигеном по типу А готовят из штаммов вируса ящура А №2187/Кути/2013, А №2171 /Кабардино-Балкарский/2013, 0№2123/Южная Осетия/2011 и Азия-1 №1946/Шамир 3/89.

Штаммы вируса ящура культивируют в отдельных биореакторах.

Культивирование вируса ящура ведут при температуре 36-37°С. Через 6-7 часов инкубирования проводят подсчет живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15-20%, то инкубирование продолжают еще 2-3 часа. При достижении количества мертвых клеток 90-95% культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S и 75S компонентов. Количество 146S+75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см3. Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20% раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до рН 8,0-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025-0,05%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при 36-37°С и рН 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.

В теплую суспензию добавляют 10% раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.

Пример 2.

Полученный антиген контролируют на авирулентность в культуре клеток свиной почки, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность.

Полученный антиген четырех штаммов, как описано в примере 1, объединяют в зависимости от содержания 146S и 75S компонентов вируса.

Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в 1 см3 достигают с помощью проточной ультрафильтрации.

Фильтрование ведут под давлением 1,5 атм.

Адъювант Montanide ISA-70 стерилизуют в биореакторе при температуре 120°С при давлении 1,1 атмосферы 40-60 минут.

Адъювант Montanide ISA-206 стерилизуют через фильтр с порами 0,20 µm.

Пример 3.

Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата антигена и масляного адъюванта в соотношении 3:7 и 1:1 соответственно. Из масляных адъювантов, в частности, использовали масляный адъювант марок Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206 производства фирмы «Seppic» (Франция).

При изготовлении эмульсионной вакцины на основе Montanide ISA-206 адъювант и антиген подогревают до 25-30°С. После этого проводят диспергирование на коллоидных мельницах в соотношении 1 доля антигена и 1 доля адъюванта.

Эмульсионную вакцину на основе Montanide ISA-70 изготавливают при температуре адъюванта и антигена от 18 до 25°С. После этого проводят диспергирование на коллоидных мельницах в соотношении 3 доли антигена и 7 долей адъюванта.

В результате получают вакцину инактивированную эмульсионную против ящура с биштаммовым антигеном по типу А из штаммов вируса ящура А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, О №2123/Южная Осетия/2011 и Азия-1 №1946/Шамир 3/89.

Оптимальный компонентный состав полученной вакцины представлен в таблицах 5, 6.

Вакцина легко рассасывается в месте введения, не вызывает абсцессов, общей реакции в виде подъема температуры и обладает выраженной иммуногенной активностью для свиней и КРС в прививной дозе 2÷3 см3, для MPC в прививной дозе 1÷2 см3 через 21 день после введения. Вакцину вводят свиньям, КРС и MPC внутримышечно. В прививном объеме должно содержаться не менее 3 мкг 146S и 75S компонентов вируса ящура.

Пример 4.

Биологический контроль на стерильность готовой вакцины осуществляли в соответствии с ГОСТ 280085-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности».

Приготовленная вакцина стерильна.

Пример 5.

Контроль авирулентности полученной вакцины осуществляли на КРС интрадермолингвальным методом введения по 0,1 мл в 20 точек. Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 дней.

Контроль безвредности на КРС проводили путем внутримышечного введения вакцины в дозе 6-10 см3.

Наблюдение за клиническим состоянием животных вели 5 суток. Вакцина была безвредной, все животные в течение указанного времени остались клинически здоровыми, и на месте введения вакцины не было чрезмерной воспалительной реакции.

Пример 6.

Для определения авирулентности вакцины на свиньях, отобранную пробу вакцины вводили внутрикожно по 0,1 см3 в две точки венчика на каждой конечности. Вакцина была авирулентной, свиньи в течение 10 суток наблюдения остались клинически здоровыми и при патологоанатомическом исследовании не обнаружено изменений характерных для ящура.

Контроль безвредности вакцины на свиньях проводили путем внутримышечного введения вакцины в область верхней трети шеи в дозе 6 см3. Срок наблюдения 10 суток. Температура тела животного может повышаться до 41°С и удерживаться на протяжении 1-3 суток.

Вакцина была безвредной, все животные в период наблюдения остались клинически здоровыми и при патологоанатомическом исследовании некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.

Пример 7.

Качество вакцины проверяли исследованием сывороток крови от вакцинированных животных на наличие антител к неструктурным белкам при помощи наборов PrioCHECK FMDV NS методом ELISA.

На 14 день после начала испытаний на авирулентность и безвредность животным вводили вакцину в количестве одной прививной дозы внутримышечно. Через 14 суток после последней вакцинации от животных производили отбор крови для получения сывороток.

Результат был отрицательным, процент позитивности сывороток от вакцинированных животных менее 50%.

Пример 8.

Проведены испытания иммуногенной активности вакцины инактивированной эмульсионной против ящура типов А, О, Азия-1, изготовленной так, как описано в примерах 1-3, и содержащей, мкг:

Авирулентный и очищенный

антигенный материал в виде

иммуногенных 146S и 75S

компонентов вируса ящура

штаммов:

А №2187/Кути/2013 6,0
А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 6,0
О №2123/Южная Осетия/2011 6,0
Азия-1 №1946/Шамир 3/89 6,0
Поддерживающая среда 655000,0
Масляный адъювант ISA-206 1100000,0

Иммуногенная активность данной вакцины проверена на 4 головах КРС массой 250÷300 кг. Вакцину вводили внутримышечно в область крупа в дозе 2 см3.

Контрольное заражение проводили гомологичными штаммами вируса ящура на 70 сутки после вакцинации. Результаты исследований представлены в таблице 7.

Исследования показали, что вакцинированные животные выдержали контрольное заражение, а невакцинированные заболели с генерализацией процесса, все 4 головы КРС были защищены от генерализации процесса на 70 сутки после вакцинации. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных на момент заражения составил против вируса ящура штамм А №2187/Кути/2013 - 5,62±0,46 log2, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 - 5,50±0,41 log2, О №2123/Южная Осетия/2011 - 5,56±0,50 log2, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 - 5,94±0,52 log2, что свидетельствует о высокой эффективности испытанной вакцины.

Пример 9.

Проведены испытания иммуногенной активности вакцины инактивированной эмульсионной против ящура типов А, О, Азия-1, изготовленной так, как описано в примерах 1-3, и содержащей, мкг:

Авирулентный и очищенный

антигенный материал в виде

иммуногенных 146S и 75S

компонентов вируса ящура

штаммов:

А №2187/Кути/2013 6,0
А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 6,0
О №2123/Южная Осетия/2011 6,0
Азия-1 №1946/Шамир 3/89 6,0
Поддерживающая среда 755000,0
Масляный адъювант ISA-70 1200000,0

Иммуногенная активность данной вакцины проверена на 4 головах КРС массой 250÷300 кг. Вакцину вводили внутримышечно в область крупа в дозе 2 см3.

Контрольное заражение проводили гомологичными штаммами вируса ящура на 70 сутки после вакцинации. Результаты исследований представлены в таблице 8.

Исследования подтверждают высокую эффективность вакцины, все вакцинированные животные выдержали контрольное заражение на 70 сутки после вакцинации. Контрольные животные заболели с генерализацией процесса. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных на момент заражения составил против вируса ящура А №2187/Кути/2013 - 6,75±1,10 log2, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 - 7,12±0,94 log2, О №2123/Южная Осетия/2011 - 6,31±0,81 log2, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 - 6,21±0,65 log2.

Таким образом, приведенная информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемой вакцины следующей совокупности условий:

- вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов А, О, Азия-1, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;

- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью приведенных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;

- вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов А, О, Азия-1, изготовленная из штаммов А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, О №2123/Южная Осетия/2011 и Азия-1 №1946/Шамир 3/89 в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов А, О и Азия-1».

1. Гуленкин В.М. Экономическая эффективность проведения профилактической вакцинации животных против ящура на территории Российской Федерации / Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир. 2012. - Т. 10. - С. 31-41.

2. Дудников А.И. Стратегия вакцинации при ликвидации ящура / Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир. 2006. - T. 4. - С.81-90.

3. Мищенко А.В., Кременчугская СР., Рахманов A.M. Обострение эпизоотической ситуации по ящуру животных в Азии и России // Инновационные процессы в АПК: сб. статей 6-й Междунар. научно-практ. конф. преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов. - М., 2014. - С. 168-171.

4. Рахманов A.M., Мищенко А.В., Фомина C.H. Эпизоотическая ситуация по ящуру животных на Северном Кавказе // Вестник ветеринарии. - 2014. - Т. 69, №2. - С. 11-14.

5. De Mello Р.А. The use of oil adjuvanted foot-and-mouth disease vaccine in endemic areas. - Bol. CPFA, 1982, 45-46, 33-42.

6. Bahnemann H.G. Large scale application of oil adjuvanted foot-and-mouth disease vaccine. In.: Europ. Comm. Control FMD. Rio de Janeiro, Brasil, 5-10 Oct. 1985, Rome, 1986, 132-135.

7. Ререр X. Ящур /Перевод с нем. Г.А. Сурковой. Под ред. и с предисл. канд. вет. наук П.В. Малярца. - М.: Колос, 1971. - 432 с.

8. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур / Под ред. А.Н. Бурдова. - М.: Агропромиздат, 1990. - С. 231-250.

9. Etudi immulogique comporative sur bovis de deuxsouches de virus aphteux de type О. О Flanders et O Espangne 64 / J. Fontaine [et al.] // Bull. Off. Intern. Epiz. - 1966. - Vol. 65, №11-12. - P. 2051-2062.

10. Сравнительное изучение иммуногенной активности моно- и полиштаммных вакцин из вируса ящура типа Азия-1 / Т.Ю. Черняева, А.Ф. Бондаренко, Е.В. Белик, Л.А. Дудников // Актуальные вопр. вет. вирусологии - Владимир, 1990. - С. 83-84.

11. Raksha (FOOT AND MOUTH DISEASE VACCINE BP (Vet)) - URL: https.//www.indimmune.com/livestock-vaccines.pdf (дата обращения 13.01.2015).

12. Официальный сайт MSD Animal Health - URL: http://www.thecattlesite.com/focus/msd-animal-health/1954/msd-anlmal-health-decivac-fmd-doe-from-msd-animal-health (дата обращения 13.01.2015).

13. Официальный сайт Merial - URL: http://www.merial.ph/Swine/Products/biologicals-products/Pages/aftopor.aspx (дата обращения 13.01.2015).

14. Официальный сайт BRILLIANT BIO PHARMA LIMITED - URL: http://shuka.fm.alibaba.com/product/127729792-103481258/FMD_Vaccine.html (дата обращения 13.01.2015).

15. Официальный сайт ФГБУ «ВНИИЗЖ» - URL: http://www.arriah.ru/main/production/price-vaccines/117 (дата обращения 13.01.2015).

16. Пат. РФ 594771, МПК А61K 39/12, Средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов/ Н.А. Улупов, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий, Д.С. Жук; ВНИЯИ - Заявл. 07.05.1973; опубл. 07.07.93 г.

17. Пат. РФ 2054039, МПК А61K 39/135, Способ очистки и стерилизации культурального вируса ящура/ Т.Н. Лезова, Н.А. Улупов, В.В. Борисов, В.В. Михалишин, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий; ВНИЯИ - Заявл. 07.02.1992; опубл. 10.02.1996 г.

18. Авт. свид. СССР 784335, C12Q 1/02, Способ определения качества вирусного сырья / А.Ф. Бондаренко; ВНИЯИ - Заявл. 04.07.1979; опубл. 20.03.2000 г.

19. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 7th Ed. -, Paris, 2012 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.

20. Selection of foot-and-mouth disease vaccine strains a review / D.J. Paton, J.F. Valacher, J. Bergman [et al.] // Rev. Sci. Tech. OIE. - 2005. - Vol. 24(3). - P. 981-983.

1. Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов А, О, Азия-1 с биштаммовым антигеном вируса типа А, содержащая активное вещество и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит смесь из авирулентного очищенного антигенного материала из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа А, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером А №2187/Кути/2013 (производственный), авирулентного очищенного антигенного материала из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа А, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером А №2171/Кабардино-Балкарский/2013 (производственный), из авирулентного очищенного антигенного материала из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа О, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером О №2123/Южная Осетия/2011 (производственный), из авирулентного очищенного антигенного материала из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа Азия-1, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером Азия-1 №1946/Шамир 3/89, в эффективном количестве.

2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2187/Кути/2013, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.

3. Вакцина по п. 2, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2187/Кути/2013, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

4. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А.

5. Вакцина по п. 4, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

6. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2123/Южная Осетия/2011, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа О.

7. Вакцина по п. 6, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2123/Южная Осетия/2011, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа О, в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

8. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа Азия-1.

9. Вакцина по п. 8, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа Азия-1, в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

10. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит поддерживающую среду.

11. Вакцина по п. 10, отличающаяся тем, что она содержит поддерживающую среду в количестве 299996,0÷899988,0 мкг в 1 см3 готового препарата.

12. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит масляный адъювант.

13. Вакцина по п. 12, отличающаяся тем, что она содержит масляный адъювант в количестве 500000,0÷1575000,0 в 1 см3 готового препарата.

14. Вакцина по любому пп. 1-13, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит смесь авирулентных и очищенных антигенных материалов из штаммов А №2187/Кути/2013, А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, О №2123/Южная Осетия/2011, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 вируса ящура, полученных предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, поддерживающую среду и масляный адъювант в количестве, мкг/см3 для свиней и MPC:
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2187/Кути/2013, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, в количестве не менее 3,0 мкг;
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, в количестве не менее 3,0 мкг;
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2123/Южная Осетия/2011, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа О, в количестве не менее 3,0 мкг;
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа Азия-1, в количестве не менее 3,0 мкг

Масляный адъювант 500000,0÷700000,0
Поддерживающая среда 299996,0÷499996,0

15. Вакцина по любому пп. 1-13, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит смесь авирулентных и очищенных антигенных материалов из штаммов А №2187/Кути/2013, А №2171 /Кабардино-Балкарский/2013, О №2123/Южная Осетия/2011, Азия-1 №1946/Шамир 3/89 вируса ящура, полученных предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, поддерживающую среду и масляный адъювант в количестве, мкг/см3 для КРС:
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2187/Кути/2013, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, в количестве не менее 3,0 мкг;
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа А, в количестве не менее 3,0 мкг;
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2123/Южная Осетия/2011, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа О, в количестве не менее 3,0 мкг;
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа Азия-1, в количестве не менее 3,0 мкг

Масляный адъювант 1000000,0÷1575000,0
Поддерживающая среда 599992,0÷899988,0.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и касается набора олигонуклеотидов-праймеров для получения первичной структуры F гена вирусов болезни Ньюкасла класса I. Представленный набор состоит из трех пар олигонуклеотидов, имеющих следующую структуру (5′→3′): Представленные олигонуклеотиды не дают перекрестных реакций с родственными видами, позволяют ограничивать манипуляции одноступенчатой процедурой проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан рекомбинантный аттенуированный штамм вируса осповакцины с нарушенными генами вирулентности ΔA56RΔB8RΔJ2RΔC3LΔN1L (1421ABJCN) на основе клонированного вируса осповакцины штамм ЛИВП.

Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и медицине. Диагностический штамм вируса гриппа RN9/13-human A(H6N9) получен путем скрещивания апатогенного вируса гриппа птиц А/серебристая чайка/Сарма/51 с/06(H6N1) с холодоадаптированным вакцинным штаммом А/17/Ануи/2013/61(H7N9) на основе донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(H2N2).
Изобретение относится к области защиты растений. Предложен способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов.

Настоящее изобретение относится к области бактериофаговой терапии для лечения и регулирования бактериальных инфекций. Представленная группа изобретений касается выделенного бактериофага, обладающего активностью против Pseudomonas aeruginosa, белков, кодируемых геномом такого бактериофага, фармацевтической композиции, содержащей такие белки, применяющейся для изготовления лекарственного средства для лечения инфекции, обусловленной Pseudomonas aeruginosa, способа диагностики бактериальной инфекции, вызванной Pseudomonas aeruginosa, и способа уменьшения или ингибирования колонизации или роста Pseudomonas aeruginosa на твердой поверхности.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу выделения вирусоподобных частиц VLP. Получают растения или растительный материал, содержащий VLP, локализованные в апопласте.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Штамм выделен от убитого кабана в охотхозяйстве «Озерное» Медынского района Калужской области в 2014 г., паспортизирован с названием «Калуга-2014» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115.
Способ относится к областям микробиологии и биотехнологии. Способ выделения бактериофага Bordetella bronchiseptica включает индуцирующее мутагенное воздействие ультрафиолетового излучения с длиной волны 250-260 нм на клетки лизогенных бактериальных культур Bordetella bronchiseptica, выращенных на плотной агаровой среде.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использована для получения одноразовой поливалентной комбинированной вакцины. Вакцина содержит антиген цирковируса свиней тип 2, являющийся белком, кодируемым последовательностью ДНК, которая по меньшей мере на 80% идентична ORF2 цирковируса свиней тип 2, и один вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером вирус ящура штамм О №2108/Забайкальский/2010.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером вирус ящура штамм О №2108/Забайкальский/2010.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины против ящура типа А. Охарактеризованная вакцина является инактивированной сорбированной и содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса ящура, депонированного в коллекции ФГБУ “ВНИИЗЖ” под регистрационным номером ВЯ А №2187/Кути/2013 (производственный), адъюванты гидроокись алюминия с сапонином и поддерживающую среду в эффективных соотношениях.

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к вирусологии и биотехнологии. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса ящура А №2171/Кабардино-Балкарский/2013, полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, адъюванты гидроокись алюминия с сапонином и поддерживающую среду в эффективных соотношениях.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Предложен штамм вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем.

Настоящее изобретение раскрывает стабильную вакцинную композицию, включающую по меньшей мере один иммуноген, выбранный из инактивированного цирковируса свиней типа 2 (PCV-2), вируса ящура (FMDV) и бактерий; сапонин, гидроксид алюминия, неионные поверхностно-активные вещества с конечным ГЛБ эмульсии от около 9 до около 12.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picomaviridae, рода Aphtovirus.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биофармацевтике, и может быть использована для сохранения иммуногенной композиции в пригодном состоянии для введения животному.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины против ящура типа А. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против ящура. Способ изготовления вакцины против ящура включает культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, при этом очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8.
Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарной вирусологии и микробиологии. Предложено применение этония в качестве адъюванта для производства сорбированной противоящурной вакцины, где этоний используют в виде 10%-ного водного раствора, который вносят в состав противоящурных вакцин в количестве 750 мкг на 1 см3 препарата.
Наверх