Способ определения угрозы функционирования плаценты при снижении пирувата на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации



Способ определения угрозы функционирования плаценты при снижении пирувата на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации
Способ определения угрозы функционирования плаценты при снижении пирувата на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2596493:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для определения угрозы нарушения ферментативной активности в плаценте и развития плода при снижении содержания пирувата на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови беременных измеряют титр антител к цитомегаловирусу, содержание пирувата в гомогенате плаценты, после чего выполняют цитофотометрический анализ выполненных гистологических срезов плаценты после проведения гистохимической реакции с последующим определением содержания пируватдегидрогеназы, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания пирувата в гомогенате плаценты до 0,015±0,002 ммоль/л и пируватдегидрогеназы до 35,0±0,95 усл. ед. создается угроза нарушения ферментативной активности в плаценте и развития плода. Способ позволяет оценить угрозу нарушения функционирования плаценты в целом и развития плода. 2 ил.

 

1. Цель изобретения - разработать способ оценки снижения содержания пирувата в синцитиотрофобласте плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа, позволяющего выяснить причину снижения в синцитиотрофобласте плаценты содержания пирувата в связи с обострением на третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции.

3. Раскрытие изобретения

Углеводы, жирные кислоты и аминокислоты окисляются через цикл лимонной кислоты до CO2 и H2O. Прежде чем эти вещества вовлекаются в заключительный этап катаболизма, их углеродная цепь превращается в двухуглеродный фрагмент в форме ацетил-КоА [1,5-7]. В этой форме углеводы, жирные кислоты и аминокислоты включаются в цикл лимонной кислоты [7]. Основным источником в этой цепи превращений в сторону образования ацетил-КоА является пировиноградная кислота (пируват), образующаяся в реакциях катаболизма глюкозы и аминокислот [1, 7]. Превращение пирувата в ацетил-КоА происходит при участии набора ферментов, объединенных под названием пируватдегидрогеназного комплекса. Окислительное декарбоксилирование пирувата происходит в матриксе митохондрий синцитиотрофобласта. Окислительное декарбоксилирование пирувата сопровождается образованием NADH+, поставляющим электроны в дыхательную цепь и обеспечивающим синтез 3 молей АТФ на 1 моль пирувата путем окислительного фосфорилирования [4]. Таким образом, пируват в нормальных условиях жизнедеятельности клеток можно рассматривать как основной источник восстановления начального этапа цикла Кребса, поскольку происходит восстановление ацетил-КоА и одновременно формируется основной источник энергии - АТФ. В случае нарушения этого цикла происходит подавление гликолиза и выработка продуктов энергетического обмена, что создает угрозу ферментативной системе в плаценте. Таким образом, оценка характера функционирования пируватной системы приобретает особое значение, поскольку это будет отражаться на функционировании плаценты в целом и создавать угрозу развития плода.

4. Новая техническая задача

Разрабатывается новый способ оценки функционирования плаценты с учетом работы пируватного комплекса в условиях обострения на третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции, что может отражаться на развитии плода.

5. Оценку работы пируватного комплекса проводили в плаценте при обострении во время гестации герпес-вирусной инфекции (Довжикова И.В.) [2]. В отличие от указанного прототипа в данной работе имеются существенные отличия.

1. Активность пируватного комплекса изучалась при обострении цитомегаловирусной инфекции.

2. Изменения активности пирувата изучались не на 5-6 неделях гестации, а на третьем триметре беременности.

3. Контролем, подтверждающим подавление активности пирувата, послужила оценка его Содержания в гомогенате плаценты.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследовано 22 беременных в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией (ХЦМВИ) в стадии обострения на 25-26 неделях гестации и 15 беременных не болевших ЦМВИ. Диагноз обострения ХЦМВИ устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM к ЦМВ или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также наличия ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекс авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (США) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.2. Статистический анализ и обработку данных проводили с использованием пакета прикладных программ «Statistica v. 6.0» (StatSoft Inc., США). Для определения достоверности различий использовали непарный параметрический критерий Стьюдента. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений - непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни. Критический уровень значимости был принят за 5% (0,05). Данные представлены как среднее арифметическое (M) ± стандартная ошибка среднего арифметического (m).

6.3. Гистохимическая реакция на выявление активности пирувата выполнялась согласно рекомендации Kuwahara, Cogan J. [3].

6.4. Определение содержания пирувата в гомогенате плаценты проводилось по методу Умбрайта [8].

7. Полученные данные

Исследования показали, что при обострении ХЦМВИ на третьем триместре гестации до титра антител к ЦМВ 1:1600 у беременной в гомогенате плаценты содержание пирувата снижалось до 0,015±0,002 ммоль/л (контроль - 0,1 ммоль/л). Одновременно на гистологических срезах после проведение гистохимической реакции, изученной под цифровым микроскопом (Япония), соединенным с компьютером по программе Scion (США) автоматически было отмечено, что содержание пируватдегидрогеназы в плаценте при обострении на третьем триместре гестации цитомегаловирусной инфекции до титра антител к ЦМВ 1:1600 снижалось до 35,0±0,95 усл. ед. (контроль - 85,0±1,2 усл. ед.) (фигура 1, 2). Снижение в синцитиотрофобласте и гомогенате плаценты пирувата при обострении цитомегаловирусной инфекции создается угроза нарушения ферментативной активности в плаценте и развития плода.

На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на пируватдегидрогеназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты роженицы. Отмечается снижение активности реакции на пируватдегидрогеназу до 35,0±0,95 усл. ед. Реакция выполнена по методу Kuwahara, Cogan. Увеличение 10×100.

На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция на пируватдегидрогеназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты роженицы не болевшей на всем протяжении гестации. Реакция выполнена по методу Kuwahara, Cogan. Увеличение 10×100.

Литература

1. Березов Т.Т., Коровин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина. 1998. 704 с.

2. Довжикова И.В. Активность пируватдегидрогеназы в плаценте при беременности, осложненной обострением герпетической инфекции // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2008. Вып. 28. С. 17-20.

3. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир. 1969. 624 с.

4. Мари Р. Биохимия человека. М.: Мир. 1993. Т. 1. 384 с.

5. Пустовалова Л.М. Основы биохимии. Ростов-на-Дону: Феникс. 2004. 448 с.

6. Радзинский В.Е., Смалько П.Я. Биохимия плацентарной недостаточности. М.: РУДН. 2001. 273 с.

7. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. Основы биохимии. М.: Мир. 1981. Т. 1. 534 с.

8. Умбрайт Медицинские лабораторные технологии. Санкт-Петербург: Интермедика. 1999. С. 83.

Способ определения угрозы нарушения ферментативной активности в плаценте и развития плода при снижении содержания пирувата на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации, включающий измерение в периферической крови беременных титра антител к цитомегаловирусу, содержания пирувата в гомогенате плаценты, а также цитофотометрический анализ выполненных гистологических срезов плаценты после проведения гистохимической реакции с последующим определением содержания пируватдегидрогеназы, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания пирувата в гомогенате плаценты до 0,015±0,002 ммоль/л и пируватдегидрогеназы до 35,0±0,95 усл.ед. создается угроза нарушения ферментативной активности в плаценте и развития плода.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода в период гестации при снижении количества эстрадиола в связи со снижением содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре беременности.

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики тяжести течения бронхиальной астмы. Способ осуществляют путем выявления пероксидазной активности миоглобина гистохимическим методом после фиксации биоптатов слизистой бронхов в 10% растворе формалина в течение 5 дней, замораживания их и приготовления срезов толщиной 5 мк, которые помещают на 1 мин в бензол и окрашивают 5-8 мин при 80°C в растворе, состоящем из 100 мг бензидина в 0,85% NaCl, раствор охлаждают и фильтруют, добавляют к 9 мл раствора 1 мл 40% раствора хлористого аммония и 1 каплю 3% раствора перекиси водорода, после проведенной реакции срезы споласкивают в 0,85% NaCl и заключают в глицерин-желатину для последующего изучения пероксидазной активности миоглобина по программе «Scion».

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для внутрипортальной озонотерапии при распространенном перитоните. Озонирование проводят посредством медицинского озонатора с концентрацией озона в озонокислородной смеси не менее 1000 мкг/л.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для персонализированного назначения неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) больным люминальным В раком молочной железы.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики псориаза. Сущность способа состоит в том, что он включает исследование показателей системы свертывания крови и тромбообразования пациента: скорость роста сгустка крови, и/или задержку роста сгустка, и/или начальную скорость роста сгустка, и/или стационарную скорость роста сгустка, и/или размер сгустка.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки литогенности желчи, включающий определение в желчи у обследуемого (i) показателей холестерина (ХС, ммоль/л) в сравнении со средними значениями, принятыми за норму (k), отличающийся тем, что в желчи определяют комплекс общих липидов (ОЛ, г/л), суммарную антиокислительную активность (АОА) электрохимическим методом (в нА·с), максимум вспышки хемилюминесценции (МВХЛ, в усл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования чувствительности к химиотерапии у больных с лимфопролиферативными заболеваниями. Сущность способа состоит в том, что в сыворотке крови определяют количественные уровни маркеров тимидинкиназы-1 (TK-1) и β2-микроглобулина (β2-МГ), а также после первого курса химиотерапии активность TK-1.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и гепатологии во внутренних болезнях, и может быть использовано для оценки состояния печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки индивидуального генетического риска атеросклероза. Осуществляют взятие крови, выделение ДНК и генотипирование митохондриальной ДНК.

Изобретение относится к области медицинской диагностики. Предложен способ прогнозирования характера поражения желчного пузыря у женщин, больных хроническим калькулезным холециститом, русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способу определения малонового диальдегида в вегетативных органах черешни, винограда, ореха грецкого и проростках озимой пшеницы. Для этого проводят экстракцию биологического материала 96% спиртом и с последующим центрифугированием. Далее супернатант обрабатывают 0,5%-ным водным раствором тиобарбитуровой кислоты и инкубируют 30 мин при 50°C. После охлаждения реакционную смесь центрифугируют. Содержание малонового диальдегида определяют методом капиллярного электрофореза в кварцевом капилляре с внутренним диаметром 75 мкм и эффективной длиной 0,5 м. Анализ проводят при длине волны 254 нм в токе электролита, содержащего 0,33% масс. борной кислоты и 0,05% масс. тетрабората натрия при положительной полярности напряжения. Расчет проводят с учетом того, что на одну молекулу малонового альдегида расходуется две молекулы тиобарбитуровой кислоты. Изобретение позволяет проводить количественное определение концентрации малонового диальдегида, который служит маркером оксидативного стресса растений. 1 табл., 4 ил., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки появления признаков позднего токсикоза. Способ включает определение содержания магния в эритроцитах периферической крови и при снижении его до 0,402±0,002 ммоль/л появляются на 7 месяце гестации признаки позднего токсикоза.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ определения обсемененности полости рта уреазопозитивной микробиотой, отличающийся тем, что проводят определение уреазной активности следующим образом: в одну из лунок микропланшета вносят водный раствор мочевины с фосфатным буфером, в две другие вносят водные растворы мочевины с фосфатным буфером, содержащие уреазу с известной концентрацией 5 и 10 Ед/л соответственно, а в остальные лунки вносят водный раствор мочевины с фосфатным буфером и образцами ротовой жидкости, затем во все лунки вносят фенол/нитропруссидный реагент и гипохлорит, после чего измеряют оптическую плотность на микропланшетном ридере при длине волны 546 нм и рассчитывают концентрацию уреазы в образцах ротовой жидкости в Ед/л, при значении уреазной активности выше 15,85±2,11 Ед/л регистрируют обсемененность полости рта уреазопозитивной микробиотой. Осуществление изобретения позволяет выявить необходимость противомикробной терапии для профилактики образования твердых зубных отложений и воспалительных заболеваний пародонта. 2 пр.

Группа изобретений относится к области медицины и иммунологии. В частности, группа изобретений относится к способам иммунологической диагностики, включающим применение как нативной молекулы, так и пептидных последовательностей фрагментов плазминогена, которые могут быть использованы в качестве универсальной системы детекции продуктов протеолиза с образованием на COOH-концах пептидной цепи лизина при проведении анализа для выявления у человека заболеваний, ассоциированных с повышенной активностью протеолитических ферментов. Группа изобретений касается также тест-системы, содержащей в качестве детектора как нативную молекулу, так и указанные пептидные последовательности. Технический результат заключается в достижении необходимой степени диссоциации комплекса антиген-антитело, присутствующего в образце, взятом у субъекта, а также в изменении конформации белков, что, в свою очередь, позволяет существенно повысить чувствительность метода определения уровня протеолитических фрагментов с C-концевым лизином, способных связываться с плазминогеном или его фрагментами. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). У индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, из периферической венозной крови выделяют ДНК, после чего проводят анализ полиморфизмов генов TNFα, Ltα, TNFR1 и TNFR2. Среди индивидуумов без сопутствующей патологии глаз в случае выявления комбинации -308G TNFα и +1663G TNFR2 либо комбинации +36G TNFR1 и +1663G TNFR2 или при наличии сопутствующей патологии глаз как миопия, катаракта или возрастная макулярная дегенерация сетчатки в случае выявления +36A TNFR1 либо комбинации +36AA TNFR1 и +1663A TNFR2 либо +250G Ltα и +36AA TNFR1 прогнозируют повышенный риск развития ПОУГ. У индивидуумов с сопутствующей патологией глаз при выявлении +250A Ltα и +36G TNFR1 либо -308G TNFα и +36G TNFR1 прогнозируют низкий риск развития ПОУГ. Изобретение обеспечивает раннее выявление больных с ПОУГ, что позволит предупредить прогрессирование заболевания. 6 ил., 2 табл., 7 пр.
Наверх