Способ оценки снижения количества эстрадиола в связи со снижением содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре беременности



Способ оценки снижения количества эстрадиола в связи со снижением содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре беременности
Способ оценки снижения количества эстрадиола в связи со снижением содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре беременности

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2596487:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода в период гестации при снижении количества эстрадиола в связи со снижением содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре беременности. Для этого в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, выполняют гистохимическую реакцию на андростендиондегидрогеназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты роженицы, измеряют количество эстрадиола в гомогенате плаценты, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности реакции на андростендиондегидрогеназу до 32,1±2,88 усл. ед., уменьшении содержания эстрадиола в плаценте до 18443,2±117,53 пмоль/л определяют угрозу нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода в период гестации. Способ позволяет оценить угрозу нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода при простоте его исполнения. 2 ил.

 

1. Цель изобретения - оценить характер влияния цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации на содержание андростендиона в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, влияющего на количество эстрадиола в гомогенате плаценты роженицы, приводящей к нарушению формирования фетоплацентарной системы и развития плода в период гестации.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа определения снижения содержания андростендиона в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, влияющего на снижение количества эстрадиола в гомогенате плаценты роженицы при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности.

3. Раскрытие изобретения

Во время беременности образуется большое количество эстрогенов, необходимых для функционального созревания плаценты и плода. Эстрадиол влияет на эндотелий сосудов плаценты через увеличение продукции вазодилататоров, параллельно препятствуя действию традиционных вазоконстрикторов [5]. Он также регулируют развитие надпочечников, легких, почек, печени, костной ткани и яичника плода в конце беременности [2, 6]. Снижение количества эстрадиола окажет влияние на развитие плода.

Биосинтез эстрадиола проходит в фетоплацентарном комплексе через образование ряда промежуточных веществ, включая андрогены - одним из которых является андростендион. В плаценте основное количество андростендиона превращается в эстрон и далее в эстрадиол [8]. Поэтому уменьшение количества андростендиона приведет к нарушению формирования эстрадиола в фетоплацентарной системе, оказывающее влияние на развитие плода.

4. Новая техническая задача

Определить количество эстрадиола в зависимости от уровня содержания андростендиона в синцитиотрофобласте ворсинок при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации с целью оценки характера состояния фетоплацентарного барьера во время беременности, от чего зависит нормальное развитие плода.

5. В доступной литературе имеются упоминания об изучении содержания в плаценте либо эстрадиола [4], либо андростендиона [3, 7] с использованием радиоактивных веществ. Существуют совместные исследования андростендиона и эстрадиола при физиологической беременности, выполняемые биохимическими методами в плазме периферической крови [9]. Недостатком вышеупомянутых методов является необходимость дорогостоящей регистрирующей аппаратуры и реактивов: радиоактивных веществ, имеющих короткий срок хранения; соблюдение усиленных мер по технике безопасности, связанных с радиационным риском для персонала и окружающей среды. Биохимические методы не дают представления о месте локализации вещества.

В отличие от вышеприведенных прототипов в данной работе имеются существенные отличия: 1. Изменения содержания эстрадиола и андростендиона происходят под влиянием обострения цитомегаловирусной инфекции во время беременности. 2. Анализ содержания андростендиона проводится с помощью гистохимической реакции в синцитиотрофобласте плаценты роженицы, в качестве субстрата используется андростендион.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследованы 38 беременных женщин 18-25 лет с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, контрольную группу составили 30 беременных женщин с хронической цитомегаловирусной инфекцией в латентной стадии. У беременных женщин симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз (обострение хронической цитомегаловирусной инфекции) устанавливается по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), JgM или увеличение титра антител JgG в парных сыворотках (в 4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводят с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

6.2. Верификацию ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществляют методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), ДНК ЦМВ выявляют методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.3. Активность андростендиондегидрогеназы гистохимически определяют на криостатных срезах свежезамороженной нефиксированной ткани плаценты следующим методом. Метод основан на восстановлении соли тетразолия в формазан электронами, акцептируемыми от субстрата через кофермент НАДФ [1]. Субстратом служит 2 мМ раствор андростендиона «Sigma» (США). Для его приготовления 6 мг 4-андростен-3,17-диона растворяют в 10 мл N,N-диметилформамида. Инкубационный раствор готовится на основе 0,1 М фосфатного буфера рН 7,2-7,4 с добавлением нитросинего тетразолия фирмы «ICN Biomedicals)) (США) в конечной концентрации 5 мМоль, НАДФ+ фирмы «Applichem» (Германия) - 1 мМоль.

Состав инкубационной среды:

0,1 М фосфатный буфер рН 7,2-7,4 - 1 мл;

нитросиний тетразолий - 1 мг;

НАДФ+ - 1 мг;

2 мМ раствор андростендиона - 0,1 мл.

6.4. В 1 мл инкубационного раствора помещают свежеприготовленные срезы ткани. Инкубацию проводят при 37°С в течение 30 минут. По окончании инкубации срезы промывают дистиллированной водой, фиксируют в 10%-м нейтральном формалине при комнатной температуре, вновь промывают дистиллированной водой, подсушивают и заключают в глицерин-желатин. Контрольные срезы инкубировали в среде, содержащей вместо раствора андростендиона адекватное количество фосфатного буфера. Полученные гистологические препараты изучают цитофотометрическим компьютерным методом с помощью программы Scion (США) на цифровом микроскопе MEIJI (Япония).

6.5. Содержание эстрадиола в плацентарном гомогенате исследовали методом иммуноферментного анализа, используя наборы фирмы «DRG» (США) на спектрофотометре «StatFax 2100» (США).

6.6. Статистический анализ и обработка данных проводится с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений М±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном уровне 95% и числе степеней свободы F=n1+n2-2. Для определения достоверности различий используется непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимаются во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений - непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни.

7. Полученные данные

В процессе исследования получены следующие результаты. На гистохимических препаратах плаценты беременных, перенесших обострение хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, при регистрации роста титра антител класса G к цитомегаловирусу до 1:1600 отмечается снижение активности реакции, отражающей содержание андростендиона до 32,1±2,88 усл. ед. (контроль - 54,2±4,31 усл. ед.) (фигура 1, 2). Одновременно, в гомогенате плаценты роженицы содержание эстрадиола составляет 18443,2±117,53 пмоль/л (контроль - 28977,7±158,13 пмоль/л). Таким образом, снижение содержания андростендиона в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при нарастании титра антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600 приводит к (указывает на) уменьшению содержания эстрадиола в гомогенате плаценты, что создает угрозу нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода в период гестации.

На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на андростендиондегидрогеназу в плаценте роженицы, перенесшей на третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции с титром антител класса G 1:1600. Отмечается снижение активности гистохимической реакции до 32,1±2,88 усл. ед. Увеличение - 10×40.

На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция на андростендиондегидрогеназу в плаценте роженицы, не болевшей на всем протяжении гестации. Интенсивность гистохимической реакции - 54,2±4,31 усл. ед. Увеличение - 10×40.

8. Литература

1. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы: пер. с англ. М.: Мир, 1982. 272 с.

2. Albrecht E.D., Рере G.J. Central integrative role of oestrogen in modulating the communication between the placenta and fetus that results in primate fetal-placental development // Placenta. 1999. Vol. 20, Is. 2. P. 129-139.

3. Hähnel M.E., Martin J.D., Michael C.A., Hähnel R. Metabolism of androstenedione by placental microsomes in pregnancy hypertension // Clin. Chim. Acta. 1989. Vol. 81, №1. P. 103-108.

4. Lenz Т., Sealey J.E., August P., James G.D., Laragh J.H. Tissue levels of active and total renin, angiotensinogen, human chorionic gonadotropin, estradiol, and progesterone in human placentas from different methods of delivery // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1989. Vol. 69, №1. p. 31-37.

5. Miller V.M., Duckles S.P. Vascular Actions of Estrogens: Functional Implications // Pharmacol. Rev. 2008. Vol. 60, №2. P. 210-241.

6. Pepe G.J., Albrecht E.D. Central integrative role of oestrogen in the regulation of placental steroidogenic maturation and the development of the fetal pituitary-adrenocortical axis in the baboon // Hum. Reprod. Update. 1998. Vol. 4, №4. P. 406-419.

7. Rahman S.A., Hingorani V., Laumas K.R. Biosynthesis of oestrogens and their inter-conversion in human placentae from normal and toxaemic pregnancies // Clin. Endocrinol. (Oxf). 1975. Vol. 4, №4. P. 333-341.

8. Strauss J.F., Martinez F., Kiriakidou M. Placental steroid hormone synthesis: unique features and unanswered questions // Biol. Reprod. 1996 Vol. 54, №2. P. 303-311.

9. Yu H.K., Cabalum Т., Jansen C.A., Buster J.E., Nathanielsz P.W. Androstenedione, testosterone, and estradiol concentrations in fetal and maternal plasma in late pregnancy in the sheep // Endocrinology. 1983. Vol. 113, №6. P. 2216-2220.

Способ оценки угрозы нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода в период гестации при снижении количества эстрадиола в связи со снижением содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре беременности, включающий определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, выполнение гистохимической реакции на андростендиондегидрогеназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты роженицы, измерение количества эстрадиола в гомогенате плаценты, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности реакции на андростендиондегидрогеназу до 32,1±2,88 усл. ед., уменьшении содержания эстрадиола в плаценте до 18443,2±117,53 пмоль/л определяют угрозу нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода в период гестации.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики тяжести течения бронхиальной астмы. Способ осуществляют путем выявления пероксидазной активности миоглобина гистохимическим методом после фиксации биоптатов слизистой бронхов в 10% растворе формалина в течение 5 дней, замораживания их и приготовления срезов толщиной 5 мк, которые помещают на 1 мин в бензол и окрашивают 5-8 мин при 80°C в растворе, состоящем из 100 мг бензидина в 0,85% NaCl, раствор охлаждают и фильтруют, добавляют к 9 мл раствора 1 мл 40% раствора хлористого аммония и 1 каплю 3% раствора перекиси водорода, после проведенной реакции срезы споласкивают в 0,85% NaCl и заключают в глицерин-желатину для последующего изучения пероксидазной активности миоглобина по программе «Scion».

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для внутрипортальной озонотерапии при распространенном перитоните. Озонирование проводят посредством медицинского озонатора с концентрацией озона в озонокислородной смеси не менее 1000 мкг/л.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для персонализированного назначения неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) больным люминальным В раком молочной железы.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики псориаза. Сущность способа состоит в том, что он включает исследование показателей системы свертывания крови и тромбообразования пациента: скорость роста сгустка крови, и/или задержку роста сгустка, и/или начальную скорость роста сгустка, и/или стационарную скорость роста сгустка, и/или размер сгустка.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки литогенности желчи, включающий определение в желчи у обследуемого (i) показателей холестерина (ХС, ммоль/л) в сравнении со средними значениями, принятыми за норму (k), отличающийся тем, что в желчи определяют комплекс общих липидов (ОЛ, г/л), суммарную антиокислительную активность (АОА) электрохимическим методом (в нА·с), максимум вспышки хемилюминесценции (МВХЛ, в усл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования чувствительности к химиотерапии у больных с лимфопролиферативными заболеваниями. Сущность способа состоит в том, что в сыворотке крови определяют количественные уровни маркеров тимидинкиназы-1 (TK-1) и β2-микроглобулина (β2-МГ), а также после первого курса химиотерапии активность TK-1.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и гепатологии во внутренних болезнях, и может быть использовано для оценки состояния печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки индивидуального генетического риска атеросклероза. Осуществляют взятие крови, выделение ДНК и генотипирование митохондриальной ДНК.

Изобретение относится к области медицинской диагностики. Предложен способ прогнозирования характера поражения желчного пузыря у женщин, больных хроническим калькулезным холециститом, русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита (ХКХ). У женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России, осуществляют забор крови, выделение ДНК и анализ полиморфизмов генов интерлейкинов.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для определения угрозы нарушения ферментативной активности в плаценте и развития плода при снижении содержания пирувата на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови беременных измеряют титр антител к цитомегаловирусу, содержание пирувата в гомогенате плаценты, после чего выполняют цитофотометрический анализ выполненных гистологических срезов плаценты после проведения гистохимической реакции с последующим определением содержания пируватдегидрогеназы, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания пирувата в гомогенате плаценты до 0,015±0,002 ммоль/л и пируватдегидрогеназы до 35,0±0,95 усл. ед. создается угроза нарушения ферментативной активности в плаценте и развития плода. Способ позволяет оценить угрозу нарушения функционирования плаценты в целом и развития плода. 2 ил.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способу определения малонового диальдегида в вегетативных органах черешни, винограда, ореха грецкого и проростках озимой пшеницы. Для этого проводят экстракцию биологического материала 96% спиртом и с последующим центрифугированием. Далее супернатант обрабатывают 0,5%-ным водным раствором тиобарбитуровой кислоты и инкубируют 30 мин при 50°C. После охлаждения реакционную смесь центрифугируют. Содержание малонового диальдегида определяют методом капиллярного электрофореза в кварцевом капилляре с внутренним диаметром 75 мкм и эффективной длиной 0,5 м. Анализ проводят при длине волны 254 нм в токе электролита, содержащего 0,33% масс. борной кислоты и 0,05% масс. тетрабората натрия при положительной полярности напряжения. Расчет проводят с учетом того, что на одну молекулу малонового альдегида расходуется две молекулы тиобарбитуровой кислоты. Изобретение позволяет проводить количественное определение концентрации малонового диальдегида, который служит маркером оксидативного стресса растений. 1 табл., 4 ил., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки появления признаков позднего токсикоза. Способ включает определение содержания магния в эритроцитах периферической крови и при снижении его до 0,402±0,002 ммоль/л появляются на 7 месяце гестации признаки позднего токсикоза.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ определения обсемененности полости рта уреазопозитивной микробиотой, отличающийся тем, что проводят определение уреазной активности следующим образом: в одну из лунок микропланшета вносят водный раствор мочевины с фосфатным буфером, в две другие вносят водные растворы мочевины с фосфатным буфером, содержащие уреазу с известной концентрацией 5 и 10 Ед/л соответственно, а в остальные лунки вносят водный раствор мочевины с фосфатным буфером и образцами ротовой жидкости, затем во все лунки вносят фенол/нитропруссидный реагент и гипохлорит, после чего измеряют оптическую плотность на микропланшетном ридере при длине волны 546 нм и рассчитывают концентрацию уреазы в образцах ротовой жидкости в Ед/л, при значении уреазной активности выше 15,85±2,11 Ед/л регистрируют обсемененность полости рта уреазопозитивной микробиотой. Осуществление изобретения позволяет выявить необходимость противомикробной терапии для профилактики образования твердых зубных отложений и воспалительных заболеваний пародонта. 2 пр.

Группа изобретений относится к области медицины и иммунологии. В частности, группа изобретений относится к способам иммунологической диагностики, включающим применение как нативной молекулы, так и пептидных последовательностей фрагментов плазминогена, которые могут быть использованы в качестве универсальной системы детекции продуктов протеолиза с образованием на COOH-концах пептидной цепи лизина при проведении анализа для выявления у человека заболеваний, ассоциированных с повышенной активностью протеолитических ферментов. Группа изобретений касается также тест-системы, содержащей в качестве детектора как нативную молекулу, так и указанные пептидные последовательности. Технический результат заключается в достижении необходимой степени диссоциации комплекса антиген-антитело, присутствующего в образце, взятом у субъекта, а также в изменении конформации белков, что, в свою очередь, позволяет существенно повысить чувствительность метода определения уровня протеолитических фрагментов с C-концевым лизином, способных связываться с плазминогеном или его фрагментами. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). У индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, из периферической венозной крови выделяют ДНК, после чего проводят анализ полиморфизмов генов TNFα, Ltα, TNFR1 и TNFR2. Среди индивидуумов без сопутствующей патологии глаз в случае выявления комбинации -308G TNFα и +1663G TNFR2 либо комбинации +36G TNFR1 и +1663G TNFR2 или при наличии сопутствующей патологии глаз как миопия, катаракта или возрастная макулярная дегенерация сетчатки в случае выявления +36A TNFR1 либо комбинации +36AA TNFR1 и +1663A TNFR2 либо +250G Ltα и +36AA TNFR1 прогнозируют повышенный риск развития ПОУГ. У индивидуумов с сопутствующей патологией глаз при выявлении +250A Ltα и +36G TNFR1 либо -308G TNFα и +36G TNFR1 прогнозируют низкий риск развития ПОУГ. Изобретение обеспечивает раннее выявление больных с ПОУГ, что позволит предупредить прогрессирование заболевания. 6 ил., 2 табл., 7 пр.
Наверх