Способ диагностики сахарного диабета по уровню метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности с использованием моноклональных антител


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2612092:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский кардиологический научно-производственный комплекс" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "РКНПК" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для диагностики сахарного диабета. Способ включает биохимическое исследование крови у пациентов, где в плазме / сыворотке крови определяют уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности путем иммунометрического сэндвич-метода иммуноферментного анализа. Затем уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности в определяемом образце рассчитывают в условных единицах относительно контрольного образца (cut-off): OD450 образца/OD450 cut-off . При значении ≥1 судят о наличии сахарного диабета. Изобретение обеспечивает повышение эффективности и точности диагностики сахарного диабета и осуществление контроля за эффективностью проводимой терапии данного заболевания. 3 пр., 2 ил.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования.

В настоящее время в клинике широко используются способы диагностики и мониторинга сахарного диабета путем оценки содержания гликозилированного гемоглобина в образце, в частности один из запатентованных способов включает стадии: (а) гемолиза образца с целью высвобождения клеточного гемоглобина; (b) контактирования гемоглобина, выделенного из указанного образца согласно стадии (с), описанной ниже, с помощью сигналобразующих молекул, включающих конъюгат из одного или более дигидроксиборильных остатков или их солей, связанных с сигналобразующей меткой; (с) выделения гликозилированного и негликозилированного гемоглобина и любых связанных с ним молекул из образца и их определение электрофоретическим методом.

(Патент РФ №2111494, МПК G01N 33/66, опубл. 20.05.1998)

Недостатком данного способа является сложность проведения исследования и использование дорогостоящего оборудования, кроме того, образцы крови для исследования данным способом не могут храниться длительное время в замороженном виде.

Задачей изобретения является создание альтернативного и эффективного способа диагностики сахарного диабета, повышающего качество и достоверность иммунохимических анализов, точность определения, а также позволяющего осуществлять объективный контроль за эффективностью проводимой лекарственной терапии этого заболевания.

Технический результат изобретения заключается в повышении эффективности и точности диагностики сахарного диабета и осуществлении контроля за эффективностью проводимой терапии данного заболевания.

Это достигается тем, что в заявляемом способе диагностики сахарного диабета, включающем биохимическое исследование крови, согласно изобретению у пациентов в плазме (сыворотке) крови определяют уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности путем иммунометрического сэндвич-метода иммуноферментного анализа, затем уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности в определяемом образце рассчитывают в условных единицах относительно контрольного образца (cut-off): OD450 образца/OD450 cut-off и при значении ≥1 судят о наличии сахарного диабета.

Липопротеиды низкой плотности (ЛНП) представляют собой липид-транспортирующие наночастицы плазмы крови. Окислительные превращения глюкозы при диабетической гипергликемии сопровождается накоплением α-оксоальдегида метилглиоксаля. Дикарбонилы, подобные метилглиоксалю, способны вызывать химическую модификацию апопротеина В-100 частиц ЛНП, которая опознается скэвинджер-рецепторами клеток стенки сосуда, что сопровождается усиленным поглощением частиц ЛНП и развитием повреждений сосудистой стенки при сахарном диабете.

Осуществление способа:

У пациента берут кровь для проведения анализа. Для определения содержания метилглиоксаль-модифицированных ЛНП в плазме (сыворотке) крови используют иммунометрический сэндвич-метод иммуноферментного анализа. Лунки планшета для иммуноферментного анализа покрывают моноклональными антителами к апо-В100. При внесении в лунки образцов плазмы (сыворотки) крови или соответствующих контролей происходит связывание иммобилизованных антител с содержащимися в образцах частицами ЛНП, в том числе с метилглиоксаль-модифицированными ЛНП. Не связавшийся материал удаляют из лунок путем отмывки. На следующем этапе реакции моноклональные антитела 6D8 к метилглиоксаль-модифицированным ЛНП, меченые биотином (реагент для анализа), соединяют только с иммобилизованными метилглиоксаль-модифицированными ЛНП. После удаления не связавшегося материала из лунок путем отмывки образовавшийся комплекс выявляют с помощью конъюгата стрептавидина с пероксидазой. Ферментативная активность пероксидазы, определяемая в колориметрической реакции по изменению окраски субстратной смеси с хромогеном тетраметилбензидин, прямо пропорциональна количеству определяемых в образце метилглиоксаль-модифицированных ЛНП. Оптическую плотность OD450 субстратной смеси после остановки реакции регистрируют на планшетном спектрофотометре при 450 нм.

Уровень метилглиоксаль-модифицированных ЛНП в определяемом образце рассчитывают в условных единицах относительно контрольного образца (cut-off): OD450 образца/OD450 cut-off. При отношении ≥1 судят о наличии сахарного диабета.

Уровень нормальных значений содержания метилглиоксаль-модифицированных ЛНП (OD450 cut-off) определяли следующим образом.

В образцах плазмы клинически здоровых доноров вышеописанным способом определяли уровень OD450. Всего было проанализировано 370 образцов. После этого рассчитывали среднее значение OD450 (М) и стандартное отклонение (SD) для определяемой выборки. Значение D450 cutoff рассчитывали по формуле: OD450 cut-off=M2+SD.

Клинический пример 1.

Пробанд З., 58 лет, участвовала в эпидемиологическом обследовании в ЗАО г. Москвы, проводившемся в ФГБУ «РКНПК» Минздрава РФ. В процессе обследования на основании биохимических и клинических данных были исключены заболевания печени, почек, онкология и значимые заболевания сердечно-сосудистой системы (гипертония, сердечная недостаточность, перенесенный инфаркт миокарда). Гиперлипидемия не выявлена (уровень общего холестерина 4,39 ммоль/л). Провели исследование по заявляемому способу. Содержание метилглиоксаль-модифицированных ЛНП в плазме крови составило 0,56 (в пределах нормальных значений). Для подтверждения данных исследования был определен уровень гликированного гемоглобина, который составил 5,2%. На основании клинических, анамнестических и лабораторных методов исследования диагноз сахарного диабета был исключен.

Клинический пример 2.

Пробанд И., 46 лет, участвовал в эпидемиологическом обследовании в ЗАО г. Москвы, проводимом в ФГБУ «РКНПК» Минздрава РФ. В процессе обследования на основании биохимических и клинических данных были исключены заболевания печени, почек, онкология и значимые заболевания сердечно-сосудистой системы (гипертония, сердечная недостаточность, перенесенный инфаркт миокарда). Содержание метилглиоксаль-модифицированных ЛНП в плазме крови, определенное предлагаемым способом, составило 3,82 (превышение нормальных значений почти в 4 раза), что указывает на наличие сахарного диабета. Для подтверждения этих данных определили уровень гликированного гемоглобина, который составил 8,87%. На основании клинических, анамнестических и лабораторных методов исследования был поставлен диагноз: впервые выявленный сахарный диабет 2 типа.

Пример 3 на основе экспериментальных исследований.

Пример поясняется графическими материалами, где показана специфичность антител к нативным ЛНП, МДА- и метилглиоксаль-модифицированным ЛНП:

Фиг. 1 - специфичность антител по заявляемому способу.

Фиг. 2 - специфичность антител известного тест-набора.

Для получения моноклональных антител к метилглиоксаль-модифицированным ЛНП мышей линии BALB/c иммунизировали внутрибрюшинно 4 раза с интервалом в 2 недели, используя в качестве антигена метилглиоксаль-модифицированные ЛНП плазмы крови здоровых доноров (по 100 мкг антигена/ мышь при каждом введении). Для первой инъекции использовали полный адъювант Фрейнда, с которым смешивали раствор антигена до получения устойчивой эмульсии, для второй - неполный адъювант Фрейнда (оба адъюванта - производства фирмы Calbiochem, США). Третья и четвертая иммунизации проводились в фосфатно-солевом буфере без адъюванта. Через неделю после последней иммунизации у мышей брали кровь из хвостовой вены и в сыворотках проверяли иммунный ответ. Для гибридизации была отобрана мышь с наилучшим иммунным ответом. За 3 дня до гибридизации проводили бустирование отобранной мыши путем введения раствора антигена в ФСБ в хвостовую вену (10 мкг). Слияние проводили с использованием миеломной линии X.63.Ag8.653 (субклон Р301) и клеток селезенки, выделенных из иммунизированной мыши. Отбор клеток - продуцентов моноклональных антител нужной специфичности вели с помощью твердофазного иммуноферментного анализа. Тестирование культуральных сред от выросших популяций проводилось одновременно на 3-х антигенах: ЛНП, МДА-модифицированные ЛНП и метилглиоксаль-модифицированные ЛНП для проверки специфичности связывания получаемых моноклональных антител исключительно с метилглиоксаль-модифицированными ЛНП. Из 700 выросших гибридных популяций при тестировании с метилглиоксаль-модифицированными ЛНП было выявлено 3 популяции с положительным ответом+, но после клонирования и реклонирования одна популяция перестала секретировать антитела. Два оставшихся клона 6D8 и 1D3 были выращены в культуре в количествах, достаточных для получения асцитной жидкости, после чего они были введены мышам линии BALB/c. Получение асцитной жидкости, содержащей моноклональные антитела, проводили с соответствии со стандартной производственной процедурой ООО фирмы «Мона». Моноклональные антитела были выделены из асцитной жидкости с помощью осаждения сульфатом аммония и ионообменной хроматографии на колонке с носителем DEAE-Toyopearl 650М производства фирмы TosoHaas, Япония.

Анализ качества полученных 2 препаратов моноклональных антител был проведен в сертифицированной лаборатории контроля качества ЗАО «Фрамон» - компании, производящей препарат Монафрам, разработанный на основе соответствующих моноклональных антител в ООО фирмы «Мона». Во всех препаратах содержание мышиных моноклональных антител было не менее 95%.

Исследование специфичности связывания полученных моноклональных антител к метилглиоксаль-модифицированным ЛНП проводили с использованием нативных ЛНП, МДА-модифицированных ЛНП и метилглиоксаль-модифицированных ЛНП. Было показано, что полученные моноклональные антитела активно связываются с метилглиоксаль-модифицированными ЛНП, тогда как их связывания с нативными ЛНП и МДА-модифицированными ЛНП не наблюдалось (Фиг. 1). При проведении аналогичного испытания тест-наборов для определения уровня окисленных ЛНП производства фирмы Mercodia (Швеция) было установлено, что наибольшее связывание содержащихся в этом тест-наборе антител происходит с МДА-модифицированными ЛНП, однако при сравнительно высоких уровнях антигенов (1,5-6,5 мкг/мл) было выявлено заметное связывание с нативными ЛНП и в меньшей степени с метилглиоксаль-модифицированными ЛНП (Фиг. 2).

Данные проведенного исследования показали, что полученные моноклональные антитела обладают значительно большей специфичностью, чем подобного рода антитела, входящие в состав широко распространенных коммерческих иммунохимических тест-наборов. Тест-наборы, созданные на основе полученных моноклональных антител, позволят снизить себестоимость и повысить качество иммунохимических анализов, способствующих уточнению диагноза и тяжести течения сахарного диабета, а также позволят осуществлять объективный контроль за эффективностью проводимой лекарственной терапии этого заболевания.

Таким образом, определение уровня метилглиоксаль-модифицированных ЛНП в плазме крови может быть альтернативным способом выявления сахарного диабета, при этом заявляемый способ отличается простотой при минимальных затратах времени проведения анализов, возможностью длительной сохранности образцов для исследования, а также возможностью автоматизации процесса.

Способ диагностики сахарного диабета, включающий биохимическое исследование крови, отличающийся тем, что у пациентов в плазме (сыворотке) крови определяют уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности путем иммунометрического сэндвич-метода иммуноферментного анализа, затем уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности в определяемом образце рассчитывают в условных единицах относительно контрольного образца (cut-off): OD450 образца/OD450 cut-off и при значении ≥1 судят о наличии сахарного диабета.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к диагностике. Способ идентификации и количественного определения специфической молекулы-мишени в образце, включающий: тестирование и выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; или выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; скрининг образца, содержащего специфическую молекулу-мишень, в высокопроизводительном скрининговом анализе, включающий добавление первого и второго лиганда, каждый из которых имеет первую и вторую детектируемую метку, связывание каждого из первого и второго лигандов с отдельными и специфическими сайтами на специфической молекуле-мишени, где скрининговый анализ не требует стадии промывания; обнаружение излучения света, когда первый и второй лиганды специфически связываются со специфической молекулой-мишенью; измерение интенсивности излучаемого света и по интенсивности света проводят идентификацию и количественное определение специфической молекулы-мишени в образце.

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии и педиатрии, и предназначено для диагностики тимомегалии у детей. Проводят ПЦР в режиме реального времени с использованием соответствующих праймеров и флюоресцентно-меченого олигонуклеотида с последующим расчетом числа копий Т-рецепторных эксцизионных колец (ТРЭК) по стандартной кривой, построенной по разведениям плазмиды, представленной SEQ ID NO: 1 с известной концентрацией ДНК ТРЭК.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки эффективности эндотелиопротекторной терапии у экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшном отделе аорты.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на структуру мембран эритроцитов.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и предназначено для прогнозирования высокого риска репродуктивных потерь в первом триместре беременности.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной онкологии, и предназначено для прогнозирования выживаемости больных раком тела матки на основании уровня экспрессии гена ESR1.
Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии и патологической анатомии, и касается способа диагностики псориатической эритродермии. Способ заключается в иммуногистохимическом исследовании.

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкостоматологии и лабораторной диагностике, и касается прогнозирования риска развития новообразований слизистой оболочки полости рта у лиц старше 40 лет.

Изобретение относится к экспериментальной медицине в области оториноларингологии и может быть использовано для оценки протективного действия фармакологического препарата при острой сенсоневральной тугоухости (ОСНТ) в эксперименте.

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине, и может быть использовано для определения давности смерти человека на поздних сроках посмертного периода по величине оптической плотности синовиальной жидкости коленного сустава трупа.

Изобретение относится к области ветеринарии и молекулярной биотехнологии и предназначено для диагностики анаплазмоза рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Осуществляют выявление фрагмента гена MSP4, кодирующего ДНК анаплазм, с использованием 10 различных пар прямых и обратных олигонуклеотидных праймеров. Проводят электрофоретическое определение размера амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности. По наличию на электрофореграмме фрагментов соответствующей длины диагностируют в крови животного кровепаразитов Anaplasma marginale или Anaplasma ovis. Изобретение обеспечивает эффективный способ обнаружения фрагментов генома Anaplasma marginale и Anaplasma ovis методом ПЦР с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. 3 табл.

Изобретение относится к способу определения пола эмбриона, при котором пол эмбриона определяется при помощи, по меньшей мере, одного неинвазивного (неразрушающего), по меньшей мере, по отношению к яйцу способа определения. Причем при помощи неинвазивного способа определения устанавливается, по меньшей мере, одно характеризующее концентрацию эстрадиола в яйце значение эстрадиола. В зависимости от значения эстрадиола определяется пол. При помощи неинвазивного способа определения устанавливается химический сдвиг атомов водорода и/или углерода в яйце, и в зависимости от установленного сдвига определяется значение эстрадиола. Использование изобретения позволит просто и точно на раннем этапе определить пол эмбриона. 5 з.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии. Для прогнозирования абсцесса при остром тонзиллите проводят определение балльного индекса по результатам суммирования баллов. Боли в горле при глотании присваивают 1 балл, инфильтрации передней и (или) задней дужки миндалин - 1 балл, отеку околоминдальной клетчатки - 1 балл, смещению небной миндалины к средней линии - 1 балл, нормальному значению ΡΟΗ - 0 баллов, компенсации эндогенной интоксикации - 1 балл, субкомпенсации эндогенной интоксикации - 2 балла, декомпенсации эндогенной интоксикации - 4 балла. При сумме 4-5 баллов вероятность возникновения абсцесса составляет 0-15%, при сумме 6 баллов вероятность возникновения абсцесса составляет 50-60%, при сумме 8 баллов вероятность возникновения абсцесса составляет 80-90%. Способ позволяет в ранние сроки прогнозировать абсцесс при остром тонзиллите без больших материальных затрат. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и представляет собой способ прогнозирования задержки роста и макросомии плода у беременных с сахарным диабетом, отличающийся тем, что у беременных на сроке гестации, начиная с 24 недель, определяют содержание глюкозы венозной крови путем проведения трехчасового теста толерантности к глюкозе, объем плаценты методом УЗИ, индекс резистентности маточной артерии методом УЗДГ, рассчитывают коэффициент фетопатии F по формуле: , где V - объем плаценты, определенный методом ультразвуковой плацентометрии (см3), IR - индекс резистентности маточной артерии, определенный методом ультразвуковой допплерографии, TGTT - уровень глюкозы, определенный при проведении трехчасового глюкозотолерантного теста (ммоль/л), GA - срок гестации (недели), при коэффициенте фетопатии F более 2,0 прогнозируют развитие макросомии плода, при коэффициенте фетопатии F менее 0,5 прогнозируют развитие задержки роста плода. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики раннего неонатального сепсиса (РНС) у новорожденных первых суток жизни. В клетках буккального соскоба измеряют уровни экспрессии генов IL12A и CD68 относительно представленности мРНК референсных генов В2М, GUS, ТВР или HPRT. На основании полученных уровней экспрессии вычисляют значение канонической линейной дискриминантной функции (КЛДФ) по формуле. Если значение КЛДФ<0,45, делают заключение об отсутствии инфекционно-воспалительных заболеваний. Если значения КЛДФ>0,45, определяют РНС. Изобретение обеспечивает эффективную неинвазивную диагностику РНС. 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и кардиологии, и касается прогнозирования эффективности терапии у пациентов с ИБС через 12 месяцев после острого коронарного синдрома (ОКС). Для этого через 12 месяцев после ОКС у пациентов, приверженных к медикаментозной терапии, в крови исследуют уровень фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF-A) и эндостатина. В том случае, если уровень VEGF-A превышает 155,13 пг/мл, а уровень эндостатина превышает 266,39 нг/мл, прогнозируют низкую эффективность медикаментозной терапии. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования, что в свою очередь позволяет своевременно скорректировать медикаментозную терапию. 2 табл., 1пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к патологической анатомии и онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики низкодифференцированного нейроэндокринного рака желудка и низкодифференцированных аденокарцином. Сущность изобретения: вырезают пластину опухоли с зоной максимальной инвазии и границами с неизмененной слизистой желудка, проводят гистологическое исследование, в случае выявления в гистологических препаратах преобладания трабекулярных, альвеолярных и солидных структур осуществляют иммуногистохимические исследования с антителами к хромогранину А, синаптофизину и нейронспецифической энолазе всех гистологических блоков. При выявлении положительной реакции с антителами хотя бы к одному из маркеров (хромогранин А/синаптофизин/нейронспецифическая энолаза) оценивают процент клеток с положительной реакцией каждого антитела в каждом блоке при увеличении 200, полученные проценты суммируют и делят на общее количество блоков, если полученное число более 70%, то опухоль расценивают как низкодифференцированный нейроэндокринный рак. Способ обеспечивает повышение точности и объективизации дифференциальной диагностики указанных состояний. 2 пр., 4 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для определения продолжительности безрецидивного периода при серозном раке яичников. Для этого во время проведения больным раком яичников операции полного объема в гомогенате ткани опухоли определяют уровень НЕ4, и при его значении от 4768 пМ/г до 5674 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода 6 и более месяцев, а при его значении от 7995 пМ/г до 9339 пМ/г сырой ткани прогнозируют продолжительность безрецидивного периода менее 6 месяцев. Способ позволяет оценить биологическую активность первичной опухоли яичника, индивидуальный прогноз заболевания и тактику дальнейшего ведения пациенток при возможности многократного воспроизведения в лечебных учреждениях онкологического профиля, располагающих биохимическими лабораториями. 2 пр.

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии. Сущность: производят отбор пробы крови, экстракцию экстрагентом из указанной пробы ГХБ и определение его количества методом газохроматографического анализа с использованием градуировочного графика. При этом после отбора пробы крови ее подкисляют до рН 6-7 водным раствором серной кислоты, например, 1%-ной концентрации. В качестве экстрагента используют толуол, взятый в объемном соотношении к пробе крови как 0,6 к 1,0 соответственно. Экстракцию ведут дважды последовательно по 5 мин каждую. Полученный экстракт центрифугируют в течение 15 мин при 7000 об/мин и далее определяют количество ГХБ методом газохроматографического анализа с использованием детектора электронного захвата на капиллярной колонке НР-1 35 м * 0,32 мм * 0,25 мкм при температурном режиме: капиллярная колонка - 70°С-230°С; испаритель - 270°С; детектор - 270°С; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин. Достигается повышение степени извлечения ГХБ из пробы крови, а также точности и селективности анализа. 1 з.п. ф-лы; 10 табл., 1 пр.

Изобретение относится к токсикологии, а именно к способу определения 3-метоксигидроксибензола в биологических материалах. Для этого образцы, содержащие 3-метоксигидроксибензол, трижды экстрагируют метилацетатом в течение 45 мин. Объединенные экстракты обрабатывают раствором KOH в этаноле, а затем удаляют растворитель испарением при 18-22°С. Остаток неоднократно обрабатывают ацетоном, содержащим НСl в избытке по отношению к щелочи в остатке. Подкисленные ацетоновые экстракты объединяют, обрабатывают водным раствором NaOH для создания избытка щелочной среды и удаляют ацетон в токе воздуха при температуре 18-22°С. Водно-щелочной раствор разбавляют водой, подкисляют до рН 2-3 24% НСl, экстрагируют диэтиловым эфиром и насыщают Na2SO4 для удаления остатков воды. Экстракт упаривают в токе воздуха при температуре 18-22°С и хроматографируют на макроколонке с силикагелем КСС 3 80/120 мкм. Смесь элюируют смесью гексан-диоксан-пропанол-2 в соотношении 20:5:1 по объему. Фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют и концентрируют до 10 мл. Полученный остаток защелачивают раствором NaOH с рН 12-13, а затем подкисляют 24% НСl до рН 2-3, а затем экстрагируют дихлорметаном и насыщают Na2SO4 для удаления остатков воды. Дихлорметановый экстракт обрабатывают N-метил-N-триметилсилил-трифторацетамидом, 20 минут, 60°С для получения триметилсилильного производного 3-метоксигидроксибензола. Определение проводят методом хромато-масс-спектрометрии. Для разделения используют капиллярную колонку (L=25 м d= 0,2 мм), неподвижной фазой 5%-фенил-метилполисилоксан в токе гелия 0,6 мл/мин. Начальная температура термостата колонки составляет 70°С и выдерживается в течение 3 мин, в дальнейшем температура программируется от 70°С до 290°С со скоростью изменения 20°С в мин, конечная температура колонки выдерживается 10 мин. Температура инжектора составляет 250°С, температура интерфейса детектора - 300°С. Для регистрации сигнала используют масс-селективный детектор в режиме электронного удара ионизирующим пучком электронов 70 эВ. Количество триметилсилильного производного 3-метоксигидроксибензола вычисляют, используя предварительно построенный калибровочный график при сравнении площадей пиков. Изобретение обеспечивает повышение чувствительности метода и может быть использовано на санэпидстанциях, в химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабораториях. 3 табл., 2 пр.
Наверх