Способ определения устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при снижении белка полосы-4.1 на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации



Способ определения устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при снижении белка полосы-4.1 на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации
Способ определения устойчивости мембран эритроцитов периферической крови при снижении белка полосы-4.1 на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2611360:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на структуру мембран эритроцитов. Способ заключается в определении в периферической крови титра антител IgG к цитомегаловирусу (ЦМВ), определении методом гель-электрофореза в мембранах эритроцитов периферической крови белка полосы-4.1, определении на мазках периферической крови цитофотометрически структуры мембран эритроцитов аппаратом «Mekos» с последующим анализом на установке «Pixera» по программе «BioVision». При титре антител IgG к ЦМВ до 1:1600, снижении белка полосы-4.1 до 4,11±0,08%, увеличении в периферической крови количества эхиноцитов до 8,80±0,09%, а дегенеративных форм эритроцитов до 21,0±1,30% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии. 2 ил.

 

1. Цель изобретения - разработать способ оценки снижение устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных на третьем триместре гестации при снижении белка полосы - 4.1 на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа, позволяющего выяснить причину снижения устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, что создает угрозу развития гемической анемии.

3. Раскрытие изобретения

Каждая клетка имеет внешнюю оболочку, отделяющую внутреннее ее содержание от внешней среды. Внутренний слой, непосредственно примыкающий к цитозолю клетки, называется цитоплазматической мембраной [1]. В таких клеточных элементах, как эритроцит- клеточная мембрана обеспечивается его эластичность, прочность, долговечность, способствуя к растяжению при прохождении через узкие отверстия капилляров. Белки мембраны эритроцитов делят на две группы, в зависимости от того, насколько легко их экстрагировать: на периферические и интегральные белки [2]. Особое внимание привлекают к себе в последнее время периферические белки, образующие цитоскелет эритроцита: спектрин α и β; анкирин белок полосы-4.1, белок полосы-4.2, белок полосы-3, белок полосы-4.9 [2].

В настоящее время проводится много исследований, направленных на изучение взаимодействия и роли этих белков, обеспечивающих строение и функциональные отправления эритроцитов [3]. Ведущую роль в образовании цитоскелета эритроцитов выполняют спектрин α и спектрин β. Молекулы спектрина α и β переплетаются между собой, составляя основу цитоскелета эритроцита [2, 3]. Однако в построении цитоскелета эритроцита принимают участие и другие периферические белки. Большое внимание уделяется изучению роли белка полосы-4.1 [4, 5, 6].

Целью нашего исследования было изучить содержание белка-4.1 в мембранах эритроцитов у беременных, перенесших в период гестации обострение цитомегаловирусной инфекции и показать, что снижение его содержания нарушает структуру мембраны эритроцита.

4. Новая техническая задача

Разрабатывается способ, позволяющий путем гель-электрофореза установить количественные изменения содержания белка полосы-4.1 в мембранах эритроцитов под влиянием цитомегаловируса, по которому можно судить о состоянии целостности скелета эритроцита и увеличению в крови дегенеративных форм, что может привести к формированию гемической анемии.

5. В доступной литературе не отмечено работ освещающих влияние цитомегаловирусной инфекции на белковый скелет эритроцита и, в частности, на изменение содержания белка полосы-4.1.

6. Осуществление изобретения

Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБНУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания». Обследовано 20 беременных на третьем триместре гестации с обострением цитомегаловирусной инфекции с титром антител IgG к ЦМВ 1:1600. Контролем служили 15 беременных, не болевших цитомегаловирусной инфекцией в период гестации. У беременных симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение цитомегаловирусной инфекции, устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также ДНК цитомегаловируса (ПЦР). Исследования проводили с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki, 2008) и Правил клинической практики в Российской Федерации, утвержденных приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266. Верификация цитомегаловируса, определение типоспецифических антител класса IgM и IgG, индекса авидности осуществлялись методами иммуноферментного анализа на микропланшетном ридере «Stat-Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), выявление ДНК цитомегаловируса методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва). Исследование белкового спектра мембран эритроцитов проводили с помощью вертикального одномерного диск-электрофореза в градиентном (7,5-10%) полиакриламидном геле в присутствии 0,1% раствора додецилсульфата натрия. Полипептидные зоны окрашивали в 0,1% растворе R-250, 50% растворе спирта и 7% растворе уксусной кислоты. Идентификацию электрофореграмм проводили при длине волны 590-600 нм с помощью установки «Bio-Doc-Analize» (Германия). Ориентировку белковых фрагментов оценивали в соответствии с рекомендациями Steck Т. [7]. Строение эритроцитов исследовали с помощью автоматизированной цитофотометрической установки «Mekos» (Россия). Регистрационное удостоверение МЗ РФ 29/10010198/1282-01. Плотность мембран эритроцитов исследовали с помощью цитофотометрической установки «Pixera» (США) по программе «Biovision». Все расчеты производились с использованием программного обеспечения «Statistica 6.0». Проверку нормальности распределения проводили по критерию Колмогорова-Смирнова. Проверку гипотезы по статистической значимости различий двух выборок проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Показатели считали значимыми при р<0,05.

7. Полученные данные

Обострение ЦМВИ до титра антител IgG к ЦМВ 1:1600 отчетливо оказывало влияние на структуру мембран эритроцитов периферической крови беременных. Происходило снижение содержания белков полосы-4.1 до 4,11±0,08% (контроль - 6,86±0,07%). Исследуя структуру эритроцитов периферической крови при обострении ЦМВИ, было обнаружено увеличение в крови эхиноцитов 8,80±0,09% (контроль - 3,00±0,02%) и их дегенеративных форм 21,0±1,3% (контроль - 5,00±0,5%). Исследуя эти мазки крови по программе «Biovision» обнаружено, что дегенеративные формы при снижении содержания в эритроцитах белка полосы-4.1 приобретают резко уплотненную мембрану (фигура 1), в меньшей степени это выглядело у эхиноцитов (фигура 2). Увеличение процентного содержания в периферической крови эхиноцитов и дегенеративных форм эритроцитов создает угрозу формирования у беременной гемической анемии.

Литература

1. Mohandas N., Gallagher P. Red cell membrane past, present and future // Blood. - 2008. - Vol. 112. - P. 3939-3948.

2. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. - М.: «Ньюдиамед». - 2007. - 1275 с.

3. Dicas L., Rico F., Deforet M., Scheuring S. Structural and mechanical heterogeneity of the erythrocyte membrane reveals hallmarks of membrane stability // ACS Nano. - 2013. - Vol. 7, №2. - P. 1054-1063.

4. Baines A., Lu H., Bennett P. The protein 4.1 family: Hub proteins in animals for organizing membrane proteins // Biochim. Biophys. Acta. - 2014. - Vol. 1838, №2. - P. 605-619.

5. Salomao. M., Zhang X., Yang Y., Lee S., Hartwing J. Protein 4.1 R dependent multiprotein compex: new insights into the structural organization of the red blood cell membrane // Proc. Nate Acad Sci. USA. - 2008. - Vol. 105. - P. 8026-8031.

6. George A., Pushkaran S., Li L., An X., Zheng Y. Altered phosphorylation of cytoskeleton proteins in sickle red blood cells: the role of proteinkinase C, Rac GTPases, and reactive oxygen species // Blood cells Mol. Dis. - 2010. - Vol. 45. - P. 41-45.

7. Steck T. The organization of proteins in the human red blood cell membrane // J. Cell. Biol. - 1974. - Vol. 62. - P. 1-19.

8. Zhaofel L., Blissard G.W. Baculovirus Gp64 D: the intermolecular disulfide bond of Autographia californica multicapsid nucleopolyhedrovirus Gp64 is not essential for membrane fusion and virion Buudding // J. Virol. - 2010. - Vol. 84, №17. - P. 8584-8595.

Способ оценки угрозы формирования у беременной гемической анемии при индуцирующем действии цитомегаловирусной инфекции в период обострения на структуру мембран эритроцитов, заключающийся в определении в периферической крови титра антител IgG к цитомегаловирусу (ЦМВ), определении методом гель-электрофореза в мембранах эритроцитов периферической крови белка полосы-4.1, определении на мазках периферической крови цитофотометрически структуры мембран эритроцитов аппаратом «Mekos» с последующим анализом на установке «Pixera» по программе «BioVision», и при титре антител IgG к ЦМВ до 1:1600, снижении белка полосы-4.1 до 4,11±0,08%, увеличении в периферической крови количества эхиноцитов до 8,80±0,09%, а дегенеративных форм эритроцитов до 21,0±1,30% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и предназначено для прогнозирования высокого риска репродуктивных потерь в первом триместре беременности.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной онкологии, и предназначено для прогнозирования выживаемости больных раком тела матки на основании уровня экспрессии гена ESR1.
Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии и патологической анатомии, и касается способа диагностики псориатической эритродермии. Способ заключается в иммуногистохимическом исследовании.

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкостоматологии и лабораторной диагностике, и касается прогнозирования риска развития новообразований слизистой оболочки полости рта у лиц старше 40 лет.

Изобретение относится к экспериментальной медицине в области оториноларингологии и может быть использовано для оценки протективного действия фармакологического препарата при острой сенсоневральной тугоухости (ОСНТ) в эксперименте.

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине, и может быть использовано для определения давности смерти человека на поздних сроках посмертного периода по величине оптической плотности синовиальной жидкости коленного сустава трупа.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики острого бронхита и острой пневмонии. Сущность способа: у пациента с клинической картиной острой респираторной инфекции, сопровождающейся бронхо-легочным синдромом, определяют в слюне содержание уксусной, валериановой и изокапроновой кислот.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкоурологии. Определяют среднекубическую величину новообразования магнитно-резонансной томографией.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано при отборе проб биоматериала для получения достоверных данных по содержанию макро- и микроэлементов шерсти крупного рогатого скота.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, иммунологии, и касается способа прогнозирования невынашивания беременности в первой половине гестации у женщин с урогенитальной инфекцией.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки эффективности эндотелиопротекторной терапии у экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшном отделе аорты. Для этого через 1 месяц после операции в крови животных определяют уровень супероксиддисмутазы (СОД), малонового диальдегида (МДА), оксида азота(II) NO. На срезах из зоны пластики аорты определяют экспрессию актина (а-ГМА), CD34 и трансформирующий фактор роста (TGFβ) с помощью иммуногистохимических методов. При повышении секреции оксида азота(II) и уровня супероксиддисмутазы, снижении уровня малонового диальдегида, низкой экспрессии а-ГМА и TGFβ, повышении экспрессии CD34 делают вывод об отсутствии предпосылок для развития гиперплазии эндотелия и эффективности проведенной терапии. Изобретение позволяет проводить коррекцию эндотелиотропной терапии до развития гиперплазии неоинтимы. 3 табл., 6 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии и педиатрии, и предназначено для диагностики тимомегалии у детей. Проводят ПЦР в режиме реального времени с использованием соответствующих праймеров и флюоресцентно-меченого олигонуклеотида с последующим расчетом числа копий Т-рецепторных эксцизионных колец (ТРЭК) по стандартной кривой, построенной по разведениям плазмиды, представленной SEQ ID NO: 1 с известной концентрацией ДНК ТРЭК. Тимомегалию диагностируют при снижении уровня ТРЭК ниже 25,36 копий на 1 тыс. лимфоцитов у детей в возрасте до 2 лет, ниже 14,71 копий на 1 тыс. лимфоцитов у детей 3-6 лет и ниже 4,82 копий на 1 тыс. лимфоцитов у детей 7-10 лет. Изобретение обеспечивает эффективное определение тимомегалии у детей по уровню ТРЭК, что позволит своевременно назначить иммунокорригирующую терапию. 1 ил., 1 табл., 3 пр.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к диагностике. Способ идентификации и количественного определения специфической молекулы-мишени в образце, включающий: тестирование и выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; или выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; скрининг образца, содержащего специфическую молекулу-мишень, в высокопроизводительном скрининговом анализе, включающий добавление первого и второго лиганда, каждый из которых имеет первую и вторую детектируемую метку, связывание каждого из первого и второго лигандов с отдельными и специфическими сайтами на специфической молекуле-мишени, где скрининговый анализ не требует стадии промывания; обнаружение излучения света, когда первый и второй лиганды специфически связываются со специфической молекулой-мишенью; измерение интенсивности излучаемого света и по интенсивности света проводят идентификацию и количественное определение специфической молекулы-мишени в образце. Способ количественного определения специфического белка в образце. Способ скрининга потенциального терапевтического соединения. Способ скрининга потенциального терапевтического соединения. Способ диагностики заболевания или расстройства. Вышеописанная группа решений позволяет эффективно идентифицировать и определить количество специфической молекулы-мишени в образце. 6 н. и 26 з.п. ф-лы, 19 ил., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для диагностики сахарного диабета. Способ включает биохимическое исследование крови у пациентов, где в плазме / сыворотке крови определяют уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности путем иммунометрического сэндвич-метода иммуноферментного анализа. Затем уровень метилглиоксаль-модифицированных липопротеидов низкой плотности в определяемом образце рассчитывают в условных единицах относительно контрольного образца (cut-off): OD450 образца/OD450 cut-off . При значении ≥1 судят о наличии сахарного диабета. Изобретение обеспечивает повышение эффективности и точности диагностики сахарного диабета и осуществление контроля за эффективностью проводимой терапии данного заболевания. 3 пр., 2 ил.

Изобретение относится к области ветеринарии и молекулярной биотехнологии и предназначено для диагностики анаплазмоза рогатого скота методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Осуществляют выявление фрагмента гена MSP4, кодирующего ДНК анаплазм, с использованием 10 различных пар прямых и обратных олигонуклеотидных праймеров. Проводят электрофоретическое определение размера амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности. По наличию на электрофореграмме фрагментов соответствующей длины диагностируют в крови животного кровепаразитов Anaplasma marginale или Anaplasma ovis. Изобретение обеспечивает эффективный способ обнаружения фрагментов генома Anaplasma marginale и Anaplasma ovis методом ПЦР с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. 3 табл.

Изобретение относится к способу определения пола эмбриона, при котором пол эмбриона определяется при помощи, по меньшей мере, одного неинвазивного (неразрушающего), по меньшей мере, по отношению к яйцу способа определения. Причем при помощи неинвазивного способа определения устанавливается, по меньшей мере, одно характеризующее концентрацию эстрадиола в яйце значение эстрадиола. В зависимости от значения эстрадиола определяется пол. При помощи неинвазивного способа определения устанавливается химический сдвиг атомов водорода и/или углерода в яйце, и в зависимости от установленного сдвига определяется значение эстрадиола. Использование изобретения позволит просто и точно на раннем этапе определить пол эмбриона. 5 з.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии. Для прогнозирования абсцесса при остром тонзиллите проводят определение балльного индекса по результатам суммирования баллов. Боли в горле при глотании присваивают 1 балл, инфильтрации передней и (или) задней дужки миндалин - 1 балл, отеку околоминдальной клетчатки - 1 балл, смещению небной миндалины к средней линии - 1 балл, нормальному значению ΡΟΗ - 0 баллов, компенсации эндогенной интоксикации - 1 балл, субкомпенсации эндогенной интоксикации - 2 балла, декомпенсации эндогенной интоксикации - 4 балла. При сумме 4-5 баллов вероятность возникновения абсцесса составляет 0-15%, при сумме 6 баллов вероятность возникновения абсцесса составляет 50-60%, при сумме 8 баллов вероятность возникновения абсцесса составляет 80-90%. Способ позволяет в ранние сроки прогнозировать абсцесс при остром тонзиллите без больших материальных затрат. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и представляет собой способ прогнозирования задержки роста и макросомии плода у беременных с сахарным диабетом, отличающийся тем, что у беременных на сроке гестации, начиная с 24 недель, определяют содержание глюкозы венозной крови путем проведения трехчасового теста толерантности к глюкозе, объем плаценты методом УЗИ, индекс резистентности маточной артерии методом УЗДГ, рассчитывают коэффициент фетопатии F по формуле: , где V - объем плаценты, определенный методом ультразвуковой плацентометрии (см3), IR - индекс резистентности маточной артерии, определенный методом ультразвуковой допплерографии, TGTT - уровень глюкозы, определенный при проведении трехчасового глюкозотолерантного теста (ммоль/л), GA - срок гестации (недели), при коэффициенте фетопатии F более 2,0 прогнозируют развитие макросомии плода, при коэффициенте фетопатии F менее 0,5 прогнозируют развитие задержки роста плода. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики раннего неонатального сепсиса (РНС) у новорожденных первых суток жизни. В клетках буккального соскоба измеряют уровни экспрессии генов IL12A и CD68 относительно представленности мРНК референсных генов В2М, GUS, ТВР или HPRT. На основании полученных уровней экспрессии вычисляют значение канонической линейной дискриминантной функции (КЛДФ) по формуле. Если значение КЛДФ<0,45, делают заключение об отсутствии инфекционно-воспалительных заболеваний. Если значения КЛДФ>0,45, определяют РНС. Изобретение обеспечивает эффективную неинвазивную диагностику РНС. 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и кардиологии, и касается прогнозирования эффективности терапии у пациентов с ИБС через 12 месяцев после острого коронарного синдрома (ОКС). Для этого через 12 месяцев после ОКС у пациентов, приверженных к медикаментозной терапии, в крови исследуют уровень фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF-A) и эндостатина. В том случае, если уровень VEGF-A превышает 155,13 пг/мл, а уровень эндостатина превышает 266,39 нг/мл, прогнозируют низкую эффективность медикаментозной терапии. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования, что в свою очередь позволяет своевременно скорректировать медикаментозную терапию. 2 табл., 1пр.
Наверх