Способ прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ. При уровне экспрессии YKL-39 более 1 УЕ прогнозируют высокую, а при уровне экспрессии гена белка YKL-39 менее 1 УЕ - низкую вероятность длительного периода безметастатической выживаемости. 1 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости при раке молочной железы.

Одним из наиболее важных вопросов в онкологии на протяжении многих лет является проблема прогнозирования течения злокачественных новообразований с целью возможного предсказания развития разных форм прогрессии заболевания. В этой связи актуальным и на сегодняшний день остается поиск дополнительных маркеров, позволяющих оценить риск развития рецидива опухоли, а также разных форм метастазирования, в особенности гематогенной диссеминации [1, 2].

Установлено, что при раке молочной железы одним из факторов, влияющих на вероятность отдаленного метастазирования, является взаимодействие опухоли с компонентами микроокружения [3, 4, 5, 6, 8]. При этом одним из ключевых компонентов микроокружения выступают макрофаги, которые могут способствовать или препятствовать формированию гематогенных метастазов. Такая возможность определяется свойствами, которыми обладают данные клетки окружающего внеклеточного матрикса. Макрофаги подразделяются на субпопуляции, имеющие разные поверхностные и секретируемые белки. Особенности таких белков и определяют свойства и возможности макрофагальных клеток к созданию условий для формирования отдаленных гематогенных метастазов [7, 9, 10].

Одним из таких белков является YKL-39 - хитиназоподобный протеин макрофагов, относящийся к новому классу внеклеточных медиаторов, которые сочетают в себе свойства цитокинов и факторов роста. Уже известно, что большая часть YKL-39 локализуется не в цитоплазматических везикулах, а в ядерных гранулах, это обстоятельство позволяет предположить не только внеклеточную роль YKL-39 как белка, секретируемого макрофагами, но и его регуляторную функцию для «программирования» самих макрофагов. CD68 имеет важное значение в фагоцитарной активности тканевых макрофагов, участвует во внутриклеточном лизосомальном метаболизме и во внеклеточных взаимодействиях «клетка-клетка» и «клетка-патоген», также он может связываться с лектинами и селектинами, что позволяет макрофагу «заякориваться» в определенном участке ткани. Изменение уровня хитиназоподобных белков в тканях и в кровотоке является ценным диагностическим критерием для мониторинга разных типов активации иммунной системы при различных заболеваниях, в том числе при развитии злокачественных новообразований [11, 14].

Наиболее близким к настоящему способу является способ прогнозирования отдаленной безрецидивной выживаемости пациентов при раке молочной железы, предложенный Cobleigh M.A. с соав. [12]. Известный способ предназначен для пациенток, больных инвазивным раком молочной железы, у которых диагностирован эстроген-позитивный рецепторный статус (RE+). Способ включает в себя определение уровня экспрессии РНК-транскрипта CD68. CD68 (кластер дифференцировки 68, макросиалин) - это гликопротеин, являющийся интегральным трансмембранным белком, который экспрессируется на поверхности моноцитов и макрофагов. Данный белок широко используют как маркер макрофагов и опухолевых клеток макрофагального происхождения. Способ прогноза безрецидивной выживаемости Cobleigh M.A. заключается в следующем. Из биопсийных образцов ткани опухоли молочной железы выделяют РНК. Уровень РНК-транскриптов CD68 определяется с помощью количественной обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (RT-qPCR). Экспрессию указанного продукта оценивают иммуногистохимически или с использованием протеомных технологий. Далее производят сравнение нормализованного уровня экспрессии CD68 с нормализованным уровнем экспрессии CD68 в референсных образцах рака молочной железы. Увеличенный нормализованный уровень экспрессии CD68 является индикатором низкой вероятности длительного периода безрецидивной выживаемости.

Одним из недостатков указанного способа является то, что объектом исследования является поверхностный маркер макрофагов, ответственный за их связывание с лектинами и селектинами и фагоцитарную активность макрофагов, не способный оказывать дистантное регуляторное действие на опухолевые клетки. Другим недостатком этого способа является ограниченная область применения, обусловленная тем, что он предназначен только для тех больных раком молочной железы, у которых на клетках опухоли обнаружены рецепторы к эстрогенам (эстроген-позитивный рецепторный статус).

Новый технический результат – повышение точности способа за счет использования новых маркеров и их конкретных числовых показателей, а также расширение показаний для применения способа.

Для достижения нового технического результата в способ прогнозирования вероятности безметастатической выживаемости при раке молочной железы путем исследования биопсийных образцов ткани опухоли молочной железы, полученных перед проведением неоадъювантной терапии с последующим выделением РНК и определением уровня гена, экспрессируемого макрофагами с помощью количественной обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени RT-qPCR, определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 (1 УЕ), и при уровне экспрессии YKL-39 более 1 УЕ прогнозируют высокую, а при уровне экспрессии гена белка YKL-39 менее 1 УЕ - низкую вероятность длительного периода безметастатической выживаемости.

Способ осуществляют следующим образом.

Для молекулярно-генетических исследований используют биопсийные образцы опухолевой ткани в объеме ~10 мм3, которые берут у пациенток под контролем ультразвукового метода исследования до проведения неоадъювантной химиотерапии. Образцы ткани опухоли помещают в раствор RNALater (Ambion, USA) и после 24-часовой инкубации при температуре +4°С сохраняют при температуре 80°С.

На следующих этапах выделяют РНК и ДНК.

РНК из взятых биопсийных образцов опухолевой ткани выделяют с помощью набора RNeasy Plus mini Kit, содержащего ДНК-азу I (Qiagen, Germany, # 74134). На спектрофотометре NanoDrop-2000 (Thermo Scientific, USA) оценивают концентрацию и чистоту выделения РНК. Целостность РНК оценивают при помощи капиллярного электрофореза на приборе TapeStation (Agilent Technologies, USA) и набора R6K ScreenTape (Agilent Technologies, USA # 5067-5367). С полученной РНК осуществляют синтез ДНК. Уровень экспрессии гена белка YKL-39 оценивают при помощи количественной обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (RT-qPCR) по технологии TaqMan на амплификаторе RotorGene-6000 (Corbett Research, Australia) с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1. Далее с полученной ДНК проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39. Относительную экспрессию гена белка YKL-39 оценивают с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH. В качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1.

Уровень экспрессии YKL-39 в биопсийных образцах ткани опухоли у больных раком молочной железы более 1 УЕ (YKL-39>1) рассматривают как гиперэкспрессию и оценивают как благоприятный критерий, указывающий на низкий риск развития рецидива и гематогенных метастазов, а значит, на высокую вероятность длительного периода безрецидивной выживаемости. Наоборот, уровень экспрессии гена белка YKL-39 ниже 1 УЕ (YKL-39<1) рассматривают как гипоэкспрессию и оценивают как неблагоприятный показатель, указывающий на высокий риск развития рецидива и возникновения гематогенных метастазов и, соответственно, на низкую вероятность длительного периода безрецидивной выживаемости.

Сущность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больная Л., 40 лет, с инвазивной карциномой неспецифического типа молочной железы. Мультицентрический рост опухоли, трижды негативный молекулярно-генетический тип. Размер первичного опухолевого узла составляет 2,5 см. В 8 исследованных лимфатических узлах аксиллярной клетчатки лимфогенных метастазов обнаружено не было. Стадия заболевания Т2N0M0. Проведено 2 курса неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) по схеме монотерапией таксотером. Эффект НАХТ по шкале RECIST – прогрессирование (149%). При проведении молекулярно-генетического исследования образцов ткани опухоли молочной железы, взятых до проведения НАХТ, согласно предлагаемому способу, значение уровня экспрессии гена белка YKL-39 составило 19,84. Через 60 месяцев динамического наблюдения у пациентки не было зарегистрировано гематогенных метастазов.

Пример 2. Больная Н., 47 лет, с инвазивной карциномой неспецифического типа молочной железы. Уницентрический рост опухоли, люминальный В молекулярно-генетический тип. Размер первичного опухолевого узла составляет 2,5 см. В 10 исследованных лимфатических узлах аксиллярной клетчатки лимфогенных метастазов обнаружено не было. Стадия заболевания Т2N0M0. Проведено 2 курса (НАХТ) по схеме монотерапией таксотером. Эффект НАХТ по шкале RECIST – частичная регрессия (84%). При проведении молекулярно-генетического исследования образцов ткани опухоли молочной железы, взятых до проведения НАХТ, согласно предлагаемому способу, значение уровня экспрессии гена белка YKL-39 составило 0,05. Через 37 месяцев динамического наблюдения у пациентки были зарегистрированы гематогенные метастазы в кости и легких.

Предлагаемый способ основан на анализе данных морфологического и молекулярно-генетического исследования биопсийного и операционного материала, анализе амбулаторных карт и медицинских карт стационарного больного. Изучался биопсийный материал от 91 пациентки больных раком молочной железы стадии IIA-IIIC (T1-4N0-3M0) в возрасте от 28 до 68 лет (средний возраст больных составил 47,4±0,8 лет). Все пациентки проходили лечение в отделении общей онкологии Томского НИИ онкологии в период с 2006 по 2010 г. Исследование проходило в соответствии с Хельсинской Декларацией 1964 г. (исправленной в 1975 и 1983 годах), а также с разрешения локального этического комитета института, все пациенты подписали информированное согласие на исследование. Гистологический тип опухоли молочной железы устанавливался согласно рекомендациям ВОЗ (Женева, 2012 г.).

В плане комбинированного лечения все пациентки на предоперационном этапе получили 2-4 курса полихимиотерапии по схеме FAC (5-фторурацил 500 мг/м2 в 1-й день, адриамицин 50 мг/м2 в 1-й день, циклофосфамид 500 мг/м2 в 1-й день, внутривенно; проведение курсов через 21 день), по схеме CAX (циклофосфан 100 мг/м2 внутримышечно в течение 14 дней, адриамицин 30 мг/м2 внутривенно в 1-й и 8-й дни, кселода 1000 мг/м2 2 раза в день, per os, в течение 14 дней; проведение курсов через 21 день) или монотерапию таксотером (100 мг/м2 внутривенно, часовая инфузия в день). Оценку эффективности неоадъювантной химиотерапии проводили по шкале RECIST (Response Evaluation Criteriain Solid Tumors от 2000 г.) спустя 14 дней после второго и четвертого курсов химиотерапии на основании результатов клинического осмотра, УЗИ молочных желез и маммографии. Оперативный этап осуществляли через 14-21 день после завершения курсов неоадъювантной химиотерапии. Операцию выполняли в объеме радикальной мастэктомии, радикальной или секторальной резекции молочной железы. В послеоперационном периоде пациенткам по показаниям проводили адъювантную химиотерапию, гормональную и/или лучевую терапию. Сроки наблюдения за больными составили 5 лет (60 месяцев), по истечении которых у 21 пациентки были диагностированы гематогенные метастазы. Наличие гематогенных метастазов у пациенток регистрировали на основании результатов анализа амбулаторных карт и медицинских карт стационарного больного.

Для морфологического исследования в течение первого часа после выполнения оперативного вмешательства в операционном материале осуществляли взятие образцов опухолевой ткани. Производили вырезку фрагментов ткани новообразования размером 1×0,5×0,5 см. Материал фиксировали в 10-12% растворе рН-нейтрального формалина. Проводку материала и изготовление гистологических препаратов осуществляли по стандартной методике. Препараты окрашивали гематоксилином и эозином. Проводили верификацию диагноза, гистологический тип опухоли молочной железы устанавливали согласно рекомендациям ВОЗ (Женева, 2012 г.). Среди гистологических типов рака молочной железы в исследование были включены инвазивная карцинома неспецифического типа, инвазивный дольковый рак, медуллярный рак, а также другие редкие типы опухоли.

Для молекулярно-генетических исследований были использованы биопсийные образцы опухолевой ткани (~10 мм3), которые были взяты у пациенток под контролем ультразвукового метода исследования до проведения неоадъювантной химиотерапии (НАХТ). Образцы ткани опухоли помещали в раствор RNALater (Ambion, USA) и сохраняли при температуре 80°С (после 24-часовой инкубации при температуре +4°С) для дальнейшего выделения РНК и ДНК.

РНК из взятых биопсийных образцов опухолевой ткани выделяли с помощью набора RNeasy Plus mini Kit, содержащего ДНК-азу I (Qiagen, Germany, # 74134). На спектрофотометре NanoDrop-2000 (Thermo Scientific, USA) оценивали концентрацию и чистоту выделения РНК. Концентрация РНК составляла от 80 до 250 нг/мкл, А260280 = 1,95-2,05; А260230 = 1,90-2,31. Целостность РНК оценивали при помощи капиллярного электрофореза на приборе TapeStation (Agilent Technologies, USA) и набора R6K ScreenTape (Agilent Technologies, USA # 5067-5367). RIN составил 5,6-7,8. С полученной РНК осуществляли синтез ДНК. Уровень экспрессии гена белка YKL-39 оценивали при помощи количественной обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (RT-qPCR) по технологии TaqMan на амплификаторе RotorGene-6000 (Corbett Research, Australia) с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1. С полученной ДНК проводили ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39. Относительная экспрессия гена белка YKL-39 оценивалась с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH. В качестве калибратора использовали нормальную ткань молочной железы, взятую от 10 пациенток, у которых при морфологическом исследовании материала каких-либо патологических изменений обнаружено не было. Исследование уровня экспрессии гена белка YKL-39 в данных образцах нормальной ткани молочной железы было проведено аналогичным вышеописанному способом. При этом уровень экспрессии гена белка YKL-39 в образцах нормальной ткани молочной железы составил 1.

Статистическую обработку полученных результатов выполняли с помощью пакета программ «STATISTICA 8.0» (StatSoft Inc., США) с применением метода Каплан-Майера, критерия Фишера. Сравнение достоверности различий между группами производили с помощью log-rank теста.

Таким образом, при исследовании частоты встречаемости гематогенных метастазов у пациенток, больных раком молочной железы, в зависимости от уровня экспрессии гена белка YKL-39 в опухолевой ткани были получены следующие результаты. Исследование показало, что наибольшая частота развития, а соответственно, более высокий риск возникновения рецидива гематогенных метастазов (более короткий период безрецидивной выживаемости) у пациенток с раком молочной железы сопряжены с низким уровнем экспрессии гена белка YKL-39 (уровень экспрессии YKL-39<1) в ткани новообразования (р=0,0025) (табл. 1).

Таблица 1. Связь гематогенного метастазирования с уровнем экспрессии гена белка YKL-39 у пациенток, больных раком молочной железы

Для оценки значимости показателя экспрессии гена белка YKL-39 как прогностического маркера высокого риска рецидива и вероятности развития гематогенных метастазов определяли значение отношения шансов (ОR), доверительный интервал, отношения рисков (RR) [15].

Достоинством предлагаемого нами способа прогнозирования является использование маркера, секретируемого макрофагами (YKL-39), который способен осуществлять как внеклеточную регуляцию, в том числе в отношении опухолевых клеток, так и регулировать функции самих макрофагов. Кроме того, данный способ прогнозирования можно применять у пациенток, больных раком молочной железы, с любым гистологическим типом и рецепторным статусом).

Источники информации

1. Page D.L. Prognosis and breast cancer. Recognition of lethal and favourable prognostic types / D.L. Page // Am. J. Surg. Pathol. – 1991. – Vol. 15. – P. 334–349.

2. Телегина Н.С. Связь гематогенной диссеминации с лимфогенным метастазированием при различных молекулярно-генетических вариантах рака молочной железы / Н.С. Телегина, О.Д. Брагина, К.Ю. Христенко, М.В. Завьялова, С.В. Вторушин, В.М. Перельмутер, Е.М. Слонимская, Е.В. Денисов, Н.В. Чердынцева // Бюллетень сибирской медицины. – 2013. – Том 12, №6. – С. 62-66.

3. Осинский С.П. Микроокружение опухолевых клеток и опухолевая прогрессия. Факторы стромального микроокружения / С.П. Осинский // Онкология. Здоровье Украины. - Червень. - 2013. – Тематический номер. – С. 36-39.

4. Sleeman J.P. Concept of metastasis in flux: the stromal progression model / J.P. Sleeman, G. Christofori, R. Fodde [et al.] // Seminar in Cancer Biology. – 2012. – Vol. 22. – P. 174-186.

Smith5. H.A. The metastasis-promoting roles of tumor-associated immune cells / H. A. Smith, Y. Kang // J. Mol. Med. (Berl). – 2013. – Vol. 91(4). - P. 411–429.

6. Quail D.F. Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis / D.F. Quail, J.A. Joyce // Nat. Med. – 2013. – Vol. 19(11). – P. 1423-1437.

Mao7. Y. Stromal cells in tumor microenvironment and breast cancer / Y. Mao, E.T. Keller, D.H. Garfield et al. // Cancer Metastasis Rev. – 2013. – Vol. 32(1-2). – P. 303-315.

8. Kerkar S. P. Cellular Constituents of Immune Escape within the Tumor Microenvironment / S.P. Kerkar, N.P. Restifo // Cancer Research Reviews. – 2012. – Vol. 72(13). – P. 3125-3130.

9. Finger E.C. Hypoxia, inflammation, and the tumor microenvironment in metastatic disease / E.C. Finger, A.J. Giaccia // Cancer metastasis reviews. – 2010. – Vol. 29. - P. 285–293.

10. Galli S.J. Phenotypic and functional plasticity of cells of innate immunity: macrophages, mast cells and neutrophils / S.J. Galli, N. Borregaard, T.A. Wynn // Nature immunology. – 2011. – Vol. 12. – P. 1035-1044.

11. Areshkov P.A., Kavsan V.M. Chitinase 3-like protein 2 (CHI3L2, YKL-39) activates phosphorylation of extracellular signal-regulated kinases ERK1/ERK2 in human embryonic kidney (hek293) and human glioblastoma (U87 MG) cells // Цитология и генетика. – 2010. – Vol. 44, No 1. – С. 3-9.

12. Cobleigh M.A. Gene expression markers for breast cancer prognosis / Cobleigh M.A., S. Shak, J.B. Baker, M.T. Cronin // Patent Application Publication. Pub. No: US 2011/0312532 A1. Pub. Date: Dec. 22, 2011.

13. Litviakov N.V. Changing the expression vector of multidrug resistance genes is related to neoadjuvant chemotherapy response / Litviakov N.V. et al. // Cancer Chemotherapy and Pharmacology. – 2013. – Vol.71, N. 1. – P. 153-163.

14. Holness C.L. Molecular cloning of CD68, a human macrophage marker related to lysosomal glycoproteins / Holness C.L., Simmons D.L. // Blood. – 1993. – Vol. 81, N. 6. – P.1607–13.

15. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica / О.Ю. Реброва // Медиа Сфера. – Москва. – 2006. – 312 с.

Способ прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы путем исследования биопсийных образцов ткани опухоли молочной железы, полученных перед проведением неоадъювантной терапии, с последующим выделением РНК и определением уровня гена, экспрессируемого макрофагами с помощью количественной обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени RT-qPCR, отличающийся тем, что определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии TaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1, и при уровне экспрессии YKL-39 более 1 УЕ прогнозируют высокую, а при уровне экспрессии гена белка YKL-39 менее 1 УЕ - низкую вероятность длительного периода безметастатической выживаемости.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использован для выявления предраковых изменений в молочной железе. Для этого определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА.

Изобретение относится к области биохимии. Описаны антиген-связывающие фрагменты (Fab), селективно связывающиеся с ботулиническим нейротоксином С, в частности гуманизированные Fab.

Изобретение относится к аналитической химии и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа. Предложенный способ проведения иммунохроматографического анализа отличается тем, что при изготовлении тест-полоски используют прозрачную подложку.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения онкологических заболеваний. В периферической крови больного определяют количество Т-лимфоцитов CD3+, 10*9/л, и их субпопуляций: лимфоцитов CD4+ и CD8+, 10*9/л, %, кроме того, вычисляют значение частного от деления количества субпопуляций лимфоцитов CD4+ на количество CD8+.

Изобретение относится к области медицины и касается способа ранней диагностики бронхиальной астмы у детей в возрасте 5 лет и младше. Сущность способа заключается в том, что проводят анализ данных анамнеза, оценку клинических симптомов, изучение аллергологического статуса, которое проводят с использованием общего анализа крови, в котором определяют уровень эозинофилов и уровень общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови, проведение цитологического исследования индуцированной мокроты, для определения в ней процентного содержания эозинофилов.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования развития тяжелого поражения центральной нервной системы при клещевом энцефалите с помощью анализа ликвора, отличающийся тем, что в ликворе больного определяют уровень серотонина, при его значении более 20 нг/мл прогнозируют среднетяжелое поражение центральной нервной системы с развитием непаралитической менингеальной формы, менее 20 нг/мл - прогнозируют тяжелое поражение центральной нервной системы с формированием паралитических очаговых форм.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунохимии, а именно к способу получения материала для биологического связывания с помощью сорбирующих колонок. Сущность изобретения заключается в том, что разработан способ получения селективного иммуносорбента для удаления антител - IgG к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови больных пузырчаткой с использованием твердофазного носителя, заключающийся в том, что для его получения рекомбинантый человеческий десмоглеин 3 типа (Dsg3) иммобилизируют путем ковалентного связывания с твердофазным носителем, в качестве которого применяют агарозный сорбент, несущий на своей поверхности N-гидроксисукцинимидные группы: NHS-активированную агарозу.

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для оценки гиперчувствительности по высвобождению гистамина из лейкоцитов цельной крови.

Изобретение относится к области методов клинико-лабораторной диагностики и касается способа прогнозирования рецидивирующего вульвовогинального кандидоза (ВВК). Сущность способа: проводят генотипирование пациентки по полиморфным локусам генов IL4:-33 С>Т [rs2070874]; CCL2:2493(-2578) A>G [rs1024611]; IL1B:-598(-1552) A>G [rs16944] с применением ПЦР в режиме реального времени и определяют долю лактобацилл в составе вагинальной микрофлоры при помощи комплекта реагентов "Фемофлор 16", после чего полученные данные включают в функцию Z=1,063*IL1B+1,112*IL4+1,483*CCL2-0,044*Lact+1,326, где 1,326 - некоторая константа, IL1B - количество аллелей G в локусе IL1B:-598(-1552) A>G [rs16944] гена IL1B, IL4 - количество аллелей С в локусе IL4:-33 С>Т [rs2070874] гена IL4, CCL2 - количество аллелей G в локусе CCL2:2493(-2578) A>G [rs1024611] гена CCL2, Lact - доля лактобацилл (%) в составе вагинальной микрофлоры.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и предназначено для прогнозирования течения иммунной тромбоцитопении после спленэктомии. Для осуществления изобретения определяют массу удаленной селезенки, выполняют гистологическую проводку образцов послеоперационного материала общепринятым способом с приготовлением парафиновых блоков.

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб. При этом для каждого определяемого клинико-химического или иммунологического параметра в приемное устройство вставляют отдельный картридж для реагентов, который содержит ячейки с необходимыми для анализа реагентами-индикаторами, причем в картриджи для реагентов для анализа клинико-химических параметров помещают по меньшей мере один реагент-индикатор, а в картриджах для анализа иммунологических параметров, предусматривают первую ячейку с конъюгатом, вторую ячейку с субстратным раствором и твердую фазу. Изобретение обеспечивает возможность одновременного определения клинико-химических и иммунологических параметров пробы. 10 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП). Сущность способа: используют твердофазный лектин-иммуноферментный метод, основанный на связывании цмЛПНП с 100 мкл раствора агглютинина RCA120 в изотоническом фосфатном буфере (ИБФ) в концентрации 30 мкг/мл, иммобилизованного в лунках планшета, промывке лунок буферным раствором с бычьим сывороточным альбумином (БСА), содержащим 2 г/л БСА, внесении по 100 мкл меченных пероксидазой поликлональных антител 1 мкг/мл к белку аполипопротеину В, инкубировании 1 ч при комнатной температуре, внесении 100 мкл исследуемого образца крови в ИФБ, инкубировании в течение 2 ч при 20°С, промывке, проявлении цитратным буфером рН 4,5, содержащим ортофенилендиамин и перекись водорода, инкубировании 30 мин при 37°С, остановке реакции добавлением серной кислоты и количественной оценке цмЛПНП за счет измерения оптической плотности при длине волны 492 нм, что позволяет определять содержание цмЛПНП без их предварительного выделения. Изобретение обладает более высокой чувствительностью и воспроизводимостью и позволяет избирательно анализировать цмЛПНП, таким образом дает возможность точно и надежно измерять концентрацию цмЛПНП без предварительного выделения фракции ЛПНП. Способ является простым, доступным и быстрым в осуществлении, позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и при диспансеризации населения. 3 ил., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологи, и представляет собой способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут. Осуществление изобретения позволяет повысить достоверность результатов диагностики. 3 пр., 4 ил.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов. Способ позволяет осуществить раннее прогнозирование развития метастазов у больных раком желудка. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67. При значении Ki-67 в пределах 80-90%, р53 в пределах 66,3-76,5%, CD34 в пределах 5,16-5,78% прогнозируют короткую ремиссию. При значении Ki-67 в пределах 7,6-9,8%, р53 в пределах 11,4-17%, CD34 в пределах 2,82-3,68% прогнозируют длительную ремиссию. Использование данного изобретения позволяет прогнозировать наступления короткой или длительной ремиссии у больных раком вульвы и позволяет на основе прогностических факторов оценивать эффективность лечения рака вульвы. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к авиакосмической медицине, и может быть использовано для оценки оптимального уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов в условиях космического полета. Способ включает получение препарата хромосом, его окрашивание и определение цитогенетических показателей, при значении в пределах 18,0-20,6 условных единиц показателя (дозы) активных рибосомных генов оценивают уровень компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавта как оптимальный. Изобретение обеспечивает возможность использовать для оценки один универсальный показатель в условиях космического полета при повышении достоверности оценки, в том числе непосредственно на борту пилотируемого космического аппарата, а также для прогноза необходимости проведения дополнительных реабилитационных процедур в период реадаптации космонавтов к земной гравитации после окончания космических полетов. Оно также может найти широкое применение при первичном отборе кандидатов в космонавты, а также на этапах предварительной диагностики профпригодности лиц опасных профессий, для прогнозирования их профессионального долголетия, оценки рисков развития заболеваний, вызванных вредными условиями профессиональной деятельности, прогноза их течения и исхода. 3 пр., 4 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных, вызываемой бактериями Clostridium perfringens (Cl. perfringens), а также контроля напряженности поствакцинального иммунитета. Представленная иммуноферментная тест-система содержит специфические антигены штаммов Cl. perfringens №28 (тип А), №1 (тип В), №392 (тип С), №213 (тип D), полученные озвучиванием бактериальных клеток на ультразвуковом дезинтеграторе, последующим осаждаем эндотоксина сульфатом аммония и диализом против водопроводной воды. Антигены представляют собой специфический белок в концентрации 8-10 мкг/см3, адсорбированный на поверхности полистироловых лунок в карбонатно-бикарбонатном буфере. Также набор содержит контрольную положительную сыворотку, полученную к антигенам Clostridium perfringens типов А, В, С, D с активностью в ИФА 1:6400-1:12800, контрольную отрицательную сыворотку, конъюгат антивидовой, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двухзамещенный, натрий хлористый, хромоген (ортофенилендиамин), перекись водорода, стоп-реагент и панели для постановки реакции иммуноферментного анализа. Тест-система позволяет проводить диагностику анаэробной энтеротоксемии у животных и определить напряженность поствакцинального иммунитета. 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Для этого с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли. При значении этого показателя выше 11,1% в ткани опухоли и 7,1% в ткани линии резекции прогнозируют развитие рецидива саркомы. Использование данного способа позволяет прогнозировать возникновение рецидива при лечении сарком мягких тканей путем определения процентного содержания лимфоцитарной субпопуляции T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim), поскольку данная популяция клеток влияет на развитие противоопухолевых иммунных реакций. 2 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу. В гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания морфометрически подсчитывают количество CD4+ Т-лимфоцитов и вычисляют их массу по формуле: М=m×D/100%, где М - масса CD4+ Т-лимфоцитов (г), m - масса селезенки (г), D - количество CD4+ Т-клеток (%). При значениях массы CD4+ Т-лимфоцитов более и равной 5,4 г констатируют благоприятное течение апластической анемии, а при менее 5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания. Использование данного способа в практической гематологии позволяет прогнозировать течение апластической анемии после спленэктомии, независимо от тяжести заболевания, что дает возможность дифференцированно подходить при назначении терапии. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии и касается способа определения вида эндометриоза яичника. Способ включает анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1, при превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73%, чувствительностью - 83%, AUC=0,82. 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ. При уровне экспрессии YKL-39 более 1 УЕ прогнозируют высокую, а при уровне экспрессии гена белка YKL-39 менее 1 УЕ - низкую вероятность длительного периода безметастатической выживаемости. 1 табл.

Наверх