Способ прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по массе cd4+лимфоцитов селезенки

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу. В гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания морфометрически подсчитывают количество CD4+ Т-лимфоцитов и вычисляют их массу по формуле: М=m×D/100%, где М - масса CD4+ Т-лимфоцитов (г), m - масса селезенки (г), D - количество CD4+ Т-клеток (%). При значениях массы CD4+ Т-лимфоцитов более и равной 5,4 г констатируют благоприятное течение апластической анемии, а при менее 5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания. Использование данного способа в практической гематологии позволяет прогнозировать течение апластической анемии после спленэктомии, независимо от тяжести заболевания, что дает возможность дифференцированно подходить при назначении терапии. 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано при прогнозировании течения апластической анемии (АА) после спленэктомии путем проведения иммуногистохимического (ИГХ) окрашивания лимфоцитов в гистологических срезах селезенки, морфометрического подсчета количества CD4+ клеток и вычисления их массы.

АА - тяжелое заболевание системы крови и характеризуется синдромом костномозговой недостаточности. Глубокая трехростковая панцитопения развивается в результате угнетения кроветворения вследствие иммунной агрессии, направленной на клетки-предшественники гемопоэза. Одним из важных звеньев патогенеза заболевания является дизрегуляция Т- и В-клеточной системы иммунитета. Так, в результате исследований было доказано повышение количества зрелых и активированных Т-лимфоцитов с фенотипом супрессоров-киллеров, инверсия хелперно-супрессорного соотношения, увеличение продукции цитокинов, обладающих ингибирующим действием на гемопоэтические клетки костного мозга. Однако оценка популяционного состава лимфоцитов при АА многими авторами проводились преимущественно в периферической крови и костном мозге (Solomou Е.Е., Rezvani S., Mielke S. [et al.] / Deficient CD4 CD25 FOXP3 T regulatory cells in acquired aplastic anemia // Blood. - 2007. - Vol. 110, No 5. - P. 1603-1606; Rizitano A.M. Kook H., Zeng W. [et al.] / Oligoclonal and polyclonal CD4 and CD8 lymphocytes in aplastic anemia and paroxysmal nocturnal hemoglobinuria measured by V-beta spectratyping and flow cytomenry // Blood. - 2002. - Vol. 100, No. 1. - P. 178-183).

Изучение иммунного механизма при АА в последние годы вызывает все большее внимание ученых в связи с эффективностью проводимой иммуносупрессивной терапии. Спленэктомия входит в программу комбинированного лечения пациентов; при этом одним из механизмов влияния операции на течение болезни считается удаление большой массы активированных лимфоидных клеток, участвующих в патогенезе патологического процесса. Тем не менее, роль CD4+ клеток в патогенезе АА до сих пор изучена недостаточно. Практически отсутствуют сведения о влиянии массы CD4+ лимфоцитов селезенки на течение заболевания.

Целью изобретения является разработка способа прогнозирования течения АА после спленэктомии по массе CD4+лимфоцитов селезенки.

Аналогами являются: 1. Известный способ «Функциональная характеристика CD4+ Т-клеток при апластической анемии» Kordasti S., Marsh J., AL-Khan S. [et al.] / Functional characterization of CD4+ T cells in aplastic anemia // Blood. - 2012. - Vol. 119, No 9. - P. 2033-2043 и 2. Сообщение «Возрастание CD4+ и CD8+ Т-клеток эффекторов памяти у больных апластической анемией». Hu X., Gu Y., Wang Y. [et al.] / Increased CD4+ and CD8+ effector memory T cells in patients with aplastic anemia // Haematologica - Vol. 94. - P. 428-429. В приведенных аналогах определяли содержание CD4+ Т-клеток в крови и костном мозге при оценке характера течения АА, спленэктомия не проводилась.

Отличия заявляемого способа от аналога включают:

1. ИГХ окрашивание и морфометрический метод подсчета количества CD4+ лимфоцитов проводят в гистологических срезах селезенки у больных АА после спленэктомии, а не в крови и костном мозге методом проточной цитометрии.

2. Течение АА после спленэктомии прогнозируют по массе CD4+ лимфоцитов селезенки.

В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.

Способа прогнозирования течения АА после спленэктомии по массе CD4+лимфоцитов селезенки не существует.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии крови ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России в соответствии с планом НИР.

Способ осуществляется следующим образом

После проведения спленэктомии у больных АА определяют массу удаленной селезенки. Проводку образцов послеоперационного материала выполняют на гистологических срезах, приготовленных из парафиновых блоков селезенок, толщиной 3-5 мкм по общепринятому способу. Для идентификации CD4+ лимфоцитов селезенки используют ИГХ метод. Иммунореактивность первичных антител («Dako») выявляют с помощью вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой, входящей в набор реактивов EnVISION+ («Dako»). Постановку ИГХ реакции осуществляют по стандартной методике в соответствии с протоколом систем визуализаций «Dako». Морфометрическую оценку количества CD4+ клеток выполняют на световом микроскопе фирмы «Leica» со встроенной фото- и видеокамерой с помощью программного обеспечения анализа изображений Image Scope Color, версии М с окуляром ×10, при объективе ×100. Исследования выполняют в 20 полях зрения для каждого образца, начиная от капсулы вглубь лимфоидного органа. Исходя из полученных результатов, вычисляют массу CD4+ Т-лимфоцитов селезенки по формуле:

М=m×D/100%,

где:

m - масса селезенки, г;

D - количество CD4+ Т-лимфоцитов, %;

М - масса CD4+ Т-лимфоцитов, г.

Исследования выполнены на гистологических срезах селезенок от 26 больных АА после спленэктомии в возрасте от 18 до 68 лет (12 - с нетяжелой формой заболевания и 14 - тяжелой). При оценке массы CD4+ лимфоцитов селезенки благоприятное течение заболевания установлено у 13 пациентов (9 - с нетяжелой формой и 4 - тяжелой). У остальных 13 больных определен неблагоприятный прогноз (3 - при нетяжелой форме и 10 - тяжелой).

Результаты исследований представлены в примерах, подтверждающих возможность заявляемого способа прогнозировать течение АА после спленэктомии по массе CD4+ лимфоцитов селезенки.

Пример 1.

Больной М., 24 года, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 02.11.20004 г. Диагноз: АА нетяжелая форма. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 64 г/л, гранулоциты 0,71×109/л, тромбоциты 55×109/л. Через три месяца (08.02.2005 г.) выполнена операция: срединная лапаротомия, спленэктомия без осложнений. Масса селезенки (m) составила 170 г. Проведено ИГХ окрашивание лимфоцитов в гистологических срезах селезенки по стандартной методике. С помощью морфометрического исследования определено количество CD4+ Т-лимфоцитов (D) - 3,2%. Вычислена масса (М) CD4+ Т-клеток по ранее приведенной формуле: 5,44 г. Установленная величина массы М получена в ходе следующего расчета: М=170 г × 3,2% / 100%.

Заключение: по результатам ИГХ и морфометрического анализа установлено, что у больного АА благоприятный прогноз течения заболевания.

Состояние клинико-гематологического улучшения наступило через 2 недели после операции (22.02.2005 г.): гемоглобин 107 г/л, гранулоциты 1,71×109/л, тромбоциты 150×109/л. Зависимость от гемотрансфузий компонентов крови уменьшена. Состояние ремиссии было достигнуто через 5 месяцев после спленэктомии (10.07.2005 г.): гемоглобин 109 г/л, гранулоциты 1,83×109/л, тромбоциты 180×109/л. Зависимости от гемотрансфузий нет.

Пример 2.

Больная Д., 39 лет, поступила в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 10.02.2006 г. Диагноз: апластическая анемия, тяжелая форма. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 102 г/л, гранулоциты 0,25×109/л, тромбоциты 15×109/л. Через две недели (22.02.2006 г.) выполнена операция: срединная лапаротомия, спленэктомия без осложнений. Масса селезенки (m) составила 120 г. Проведено ИГХ окрашивание лимфоцитов в гистологических срезах селезенки по стандартной методике. Морфометрически определено количество CD4+лимфоцитов селезенки (D): 9,0%. По ранее приведенной формуле вычислена их масса (М): 10,80 г. Установленное значение массы М было получено в ходе следующего расчета: М=120 г × 9,0% /100%.

Заключение: по результатам ИГХ и морфометрического анализа установлено, что у больной АА благоприятный прогноз течения заболевания.

Состояние клинико-гематологического улучшения наступило через 2,5 недели после операции (13.03.2006 г.): гемоглобин 82 г/л, гранулоциты 1,08×109/л, тромбоциты 60×109/л. Зависимость от гемотрансфузий снижена. Состояние ремиссии было достигнуто через 7 месяцев после спленэктомии (11.09.2006 г.): гемоглобин 101 г/л, гранулоциты 4,0×109/л, тромбоциты 175×109/л. Зависимости от гемотрансфузий нет.

Пример 3.

Больной К., 26 лет, поступил в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России 12.09.1995 г. Диагноз: апластическая анемия, нетяжелая форма. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 82 г/л, гранулоциты 0,68×109/л, тромбоциты 15,0×109/л. Через неделю (19.09.1995 г.) выполнена операция: срединная лапаротомия, спленэктомия без осложнений. Масса селезенки (m) составила 70 г. Проведено ИГХ окрашивание лимфоцитов в гистологических срезах селезенки по стандартной методике. С помощью морфометрического исследования определено количество CD4+ Т-лимфоцитов (D) - 3,2%. По ранее приведенной формуле вычислена масса (М) CD4+ Т-клеток: 2,24 г. Установленная величина массы М получена в ходе следующего расчета: М=70 г ×3,2% / 100%.

Заключение: по результатам ИГХ и морфометрического анализа установлено, что у больного АА неблагоприятный прогноз течения заболевания.

В ходе динамического наблюдения за пациентом выявленные данные были подтверждены проведенной оценкой результатов лечения. Так, состояние клинико-гематологического улучшения не наступило. Спустя 6 месяцев после операции (13.03.1996) больной умер.

Заявляемое изобретение обладает новизной, существенными отличиями, дает при использовании положительный результат, заключающийся в возможности по массе CD4+ Т-лимфоцитов селезенки прогнозировать течение АА после спленэктомии. При величинах массы CD4+ Т-лимфоцитов селезенки ≥5,4 г констатируют благоприятное течение АА, а при <5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания.

Предлагаемый способ информативен, может быть использован в гематологических отделениях, морфологических и гистологических лабораториях в качестве дополнительного критерия при прогнозировании течения АА после спленэктомии.

Способ прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по массе CD4+ Т-лимфоцитов селезенки, характеризующийся тем, что после удаления селезенки определяют ее массу, в гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания морфометрически подсчитывают количество CD4+ Т-лимфоцитов и вычисляют их массу по формуле: М=m×D/100%, где М - масса CD4+ Т-лимфоцитов (г), m - масса селезенки (г), D - количество CD4+ Т-клеток (%); при значениях массы CD4+ Т-лимфоцитов более и равной 5,4 г констатируют благоприятное течение апластической анемии, а при менее 5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Для этого с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных, вызываемой бактериями Clostridium perfringens (Cl.

Изобретение относится к области медицины, а именно к авиакосмической медицине, и может быть использовано для оценки оптимального уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов в условиях космического полета.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологи, и представляет собой способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут.

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП).

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использован для выявления предраковых изменений в молочной железе. Для этого определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА.
Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии и касается способа определения вида эндометриоза яичника. Способ включает анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1, при превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73%, чувствительностью - 83%, AUC=0,82. 4 пр.

Настоящее изобретение касается способа предварительной оценки, будет ли терапевтическое средство, выбранное из группы полипептид, антитело или иммуноадгезин, иметь необходимую скорость выведения у яванского макака, человека. Сущность способа заключается в том, что наносят покрытие с баскуловирусными частицами (BV) на микротитрационный планшет. Далее проводят контактирование терапевтического средства с BV и проводят измерение уровня связывания терапевтического средства с BV. Также проводят измерение связывания терапевтического средства с микротитрационным планшетом без BV. Показатель BV рассчитывают из среднего значения, полученного в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства с BV, деленного на среднее значение, полученное в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства без BV. Показатель BV выше 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь быструю скорость выведения, при этом быстрая скорость выведения выше 12 мл/кг/день, а показатель BV ниже 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь необходимую скорость выведения. Использование способа позволяет выявлять антитела, у которых наблюдается быстрое выведение из организма. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и патоморфологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей аногенитальных маммароподобных желез. Для этого определяют принадлежность опухоли к группе опухолей АМПЖ, локализацию опухоли в коже и её расположение в коже. При её расположении в дерме или в эпидермисе или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом определяют её доброкачественность или злокачественность. После этого определяют гистологический рисунок и архитектонику опухоли и их сходство с опухолями молочной железы. При расположении опухоли в эпидермисе, ее злокачественности и при наличии педжетоидного гистологического рисунка исследуемой опухоли и ее архитектонике, сходной с маммарной болезнью Педжета, дополнительно определяют наличие или отсутствие злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис и при отсутствии экспрессии Uroplakin-III, PSA, S100, р63, а также отсутствии злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис, диагностируют первичную экстраммамарную болезнь Педжета. При расположении опухоли в дерме или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой итрадуктальной папилломы молочной железы, диагностируют папиллярную гидраденому. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой фиброаденомы молочной железы, диагностируют фиброаденому маммароподобных желез (МПЖ). При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой аденозной опухоли молочной железы, диагностируют аденозную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой лактирующей аденомы молочной железы, диагностируют лактирующую аденому МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой доброкачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют доброкачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой злокачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют злокачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой дуктальной карциномы in situ молочной железы, диагностируют дуктальную аденокарциному in situ аногенитальных МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой неспецифицированной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие неспецифицированной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют дуктальную аденокарциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой тубуло-лобулярной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие тубуло-лобулярной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют тубуло-лобулярную карциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей, с архитектоникой аденокистозной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие аденокистозной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют аденокистозную карциному МПЖ.. При расположении опухоли в эпидермисе и дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке в дерме и педжетоидном гистологическом рисунке в эпидермисе и архитектонике, схожей с архитектоникой инвазивной карциномы молочной железы и маммарной болезни Педжета, дополнительно оценивают отсутствие или наличие инвазивной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют экстрамаммарную болезнь Педжета, вторичную к инвазивной карциноме АМПЖ. Способ обеспечивает диагностически значимые клинико-морфологические критерии и их комбинации для дифференциальной диагностики опухолей АМПЖ при повышении чувствительности, специфичности и точности проводимой дифференциальной диагностики. 6 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к исследованиям таких канцерогенных веществ, как нитрозамины, модифицирующие апоптоз у детей, проживающих в неблагоприятных условиях среды обитания. Сущность изобретения: производят отбор пробы крови у ребенка и определяют в пробе наличие нитрозамина - нитрозодиметиламина (НДМА), в тех пробах крови пациентов, где установлено наличие НДМА, извлекают мононуклеарные клетки и с использованием метода проточной цитометрии определяют количество белка р53. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Затем на детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР проводят генотипирование полиморфизма, используя в качестве праймера участок ДНК Arg72Pro (rs1042522) гена ТР53, путем исследования его аллельного состояния, устанавливая при этом для гена ТР53 одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или патологическое гомозиготное. И если одновременно установлено наличие патологического гомозиготного или гетерозиготного генотипов Arg72Pro гена ТР53, снижение в крови содержания р53 в 1,5 и более раз, по отношению к нижней границе физиологической нормы для детей. При наличии в крови НДМА оценивают процесс апоптоза у ребенка под влиянием нитрозаминов как замедленный. Изобретение обеспечивает точность оценки влияния нитрозаминов на апоптоз с возможностью в последующем судить о развитии иммунодефицитных и иммунопролиферативных состояний населения уже на ранних стадиях. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития быстрорастущей миомы матки, заключающийся в том, что исследуют ультразвуковые параметры матки с подсчетом количества миоматозных узлов, методом краевой дегидратации менструальных выделений (МВ) определяют наличие параллельных и волокнистых структур и рассчитывают коэффициент Р: где z рассчитывают по формуле:z=b1×x1+b2×x2+b3×х3+а,где b1 - коэффициент, равный 2,172; x1 - волокнистые структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b2 - коэффициент, равный 2,238; x2 - параллельные структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b3 - коэффициент, равный 1,568; x3 - количество узлов; а - константа, равная –10,915; и при значении Р>0,5 дополнительно методом иммуноферментного анализа исследуют уровни лигандов APRIL и TRAIL, и при значении APRIL более 11,1 нг/мл, TRAIL менее 22,5 пг/мл прогнозируют риск развития быстрорастущей миомы матки. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения нейтрализующих антител (HAT) в сыворотке крови больных рассеянным склерозом, леченных препаратами интерферона-бета (ИФНβ). Для этого применяют цитопатический тест с использованием чувствительной к вирусу энцсфаломиокардита мышей (ЕМС) культуры клеток фибробластов легкого эмбриона человека (ФЛЭЧ). Определение HAT к препарату ИФНβ проводят при помощи реакции нейтрализации антивирусной активности методом титрования сыворотки рефрактерного к лечению соответствующим препаратом пациента, определением HAT к препарату ИФНβ. Проводят культивирование клеток ФЛЭЧ в условиях 37±2°С в атмосфере CO2 5,0±0,5% и 90±5% влажности в среде DMEM с 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) в течение 1 суток в ячейках плоскодонного 96-луночного планшета в количестве 20-50 тыс.кл./яч. В день постановки теста разводят контрольную ЭТС и испытуемую сыворотку пациента в 10 или в 20 раз. Затем в ячейках круглодонного планшета готовят по 100 мкл разведений препарата ИНФβ в нсобогащенной сывороткой среде RPMI-1640: 2000; 1000; 500; 250; 125; 63; 31; 16; 8; 4; 2; 1; 0,5; 0,25; 0 МЕ/мл; в ячейки с двумя приготовленными разведениями препарата ИФНβ параллельно вносят по 100 мкл разведенные в 10 или 20 раз сыворотки пациента и контрольной ЭТС. Инкубируют планшет 1 час в условиях CO2-инкубатора. Далее удаляют среду из культуральных планшетов с преинкубированными клетками ФЛЭЧ и в ячейки вносят по 100 мкл приготовленных разведений препарата с сывороткой пациента. Проводят инкубацию планшетов с клетками в течение 22-24 часов, далее в необогащенную сывороткой основу среды DMEM вносят вирус-индикатор ЕМС или VSV (вирус энцефаломиокардита мышей/вирус везикулярного стоматита, штамм «Индиана») в дозе составляющей 102±0,25 ТЦД50 в 0,1 мл. Проводят инкубирование в термостате 22-24 часа. Через сутки оценивают цитопатическое действие вируса в зависимости от наличия нейтрализующей ИНФβ активности сыворотки пациента по формуле: HAT (НЕ/мл)=А (МЕ/мл)×Z, где А (МЕ/мл) - максимальная нейтрализуемая активность препарата ИНФ-бета, при которой наблюдается цитодеструктивное действие вируса на монослой чувствительной культуры ФЛЭЧ, выраженная в международных единицах на 1 мл; Z - разведение сыворотки пациента. Использование данного способа позволяет оценку эффективности лечения препаратами у пациентов, в течение длительного времени подвергавшихся лечению препаратами ИФНβ путем количественного определения ИНФβ нейтрализующих антител. 1 з.п. ф-лы, 3 пр., 2 табл.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлено антитело, специфически связывающееся с PTK7 (протеинтирозинкиназа 7) человека, а также конъюгат указанного антитела с цитотоксическим агентом. Также предложены нуклеиновые кислоты, кодирующие указанное антитело, и включающие их экспрессионные векторы и клетки-хозяева. Кроме того, предложены способы применения указанного антитела, в том числе в составе конъюгата, для диагностики и лечения рака у субъекта. Изобретение обеспечивает эффективное нацеливание на опухолевые стволовые клетки, что может быть использовано для лечения пациентов, страдающих от широкого спектра злокачественных образований. 16 н. и 36 з.п. ф-лы, 42 ил., 5 табл., 16 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и найдет широкое применение в лечении пациенток с аменореей, обусловленной нервной анорексией. Сущность способа: пациенток на этапе редукции нервной анорексии с продолжающейся аменореей в сыворотке крови методом ИФА определяют уровень дофамина и ЛГ, и если уровень дофамина составляет 67,25 пг/мл и более, но менее 280 пг/мл, а показатели ЛГ 0,95 мМЕ/л и более, прогнозируют нормализацию менструальной функции. Применение данного способа прогнозирования восстановления менструальной функции позволит своевременно выбрать адекватную терапию для лечения данного заболевания, что поможет предотвратить развитие вторичного гипогонадизма, приводящего к гипоплазии матки и бесплодию в репродуктивном периоде. Способ позволяет объективизировать оценку эффективности лечения и своевременно прогнозировать дальнейшее течение заболевания. Способ имеет чувствительность – 93,9%, специфичность 93,9%, точность 88,2%. 3 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для иммуногистохимического выявления антигенов в препаратах органов продуктивных и непродуктивных животных длительного хранения в фиксаторах. Для этого проводят обработку поверхности предметного стекла для наклеивания срезов адгезивом на основе яичного белка и глицерина в соотношении 2:1. Затем проводят депарафинирование и регидратацию срезов. При этом после депарафинизации и регидратации срезы опускают на 5 мин в чистую емкость с дистиллированной водой. После чего срезы помещают в Н2О2 на 10-12 мин, после работы пароварки, содержащей цитратный буфер в течение 40-45 мин. При этом стекла из пароварки не вынимают в течение 20 мин после прекращения ее работы. Промывают срезы дистиллированной водой, затем помещают в буфер Твин 20х. Для образования сухого поля срезы промакивают одноразовыми бумажными полотенцами и делают вокруг срезов гидрофобный слой маркером. Далее наносят блокировочный раствор, в качестве которого используют 5% бычий сывороточный альбумин, на 10-12 мин. Наносят первичные антитела и ставят в термостат при 27°С на 24-26 ч во «влажной камере», через 14-15 ч смывают первичные антитела буфером Твин 20х в течение 5-7 мин. При этом срезы промакивают и наносят на них вторичные антитела. Ставят в термостат на 1-2 ч во «влажной камере» при температуре 27°С. Смывают вторичные антитела, при этом используют хромоген на безбиотиновой системе детекции. Окрашивают в течение 3 мин, смывают хромоген в трех порциях дистиллированной воды по 5-7 мин. Докрашивают срезы гематоксилином Майера 5-7 мин. Затем ополаскивают стекла в дистиллированной воде и опускают в щелочную воду на 10-15 с. Изобретение позволяет выявлять антигены в гистологических препаратах, после их длительного хранения в фиксаторах. 8 ил., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для получения антигена для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных. Для этого проводят экстракцию липополисахаридов бруцелл вида Brucella abortus и Brucella melitensis, для чего их берут в равном соотношении. Обрабатывают 2%-ным раствором уксусной кислоты в присутствии 10% NaCl при автоклавировании, затем отделяют экстракт центрифугированием, фракционируют супернатант спиртом с последующим диализом и выделяют О-полисахарид центрифугированием. Использование данного способа позволяет получить комплексный антиген, содержащий О-полисахаридный М- и А-антигены, при этом включение в комплекс М-компонента значительно повышает чувствительность реакции иммунодиффузии при диагностике бруцеллеза, вызываемого B. Melitensis. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу. В гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания морфометрически подсчитывают количество CD4+ Т-лимфоцитов и вычисляют их массу по формуле: Мm×D100, где М - масса CD4+ Т-лимфоцитов, m - масса селезенки, D - количество CD4+ Т-клеток. При значениях массы CD4+ Т-лимфоцитов более и равной 5,4 г констатируют благоприятное течение апластической анемии, а при менее 5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания. Использование данного способа в практической гематологии позволяет прогнозировать течение апластической анемии после спленэктомии, независимо от тяжести заболевания, что дает возможность дифференцированно подходить при назначении терапии. 3 пр.

Наверх