Способ определения вида эндометриоидных образований яичников



Владельцы патента RU 2625751:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии и касается способа определения вида эндометриоза яичника. Способ включает анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1, при превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73%, чувствительностью - 83%, AUC=0,82. 4 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии.

Известно, что эндометриоз яичников согласно современным представлениям является мультифакторным дисгормональным иммунозависимым и генетически детерминированным заболеванием, характеризующимся присутствием эктопического эндометрия с признаками клеточной активности и его разрастанием. Несмотря на многочисленные исследования, посвященные изучению этиологии и патогенеза эндометриоидных поражений, до настоящего времени не существует единой теории происхождения эндометриоза, точно также как и механизмы его развития до конца не ясны, что затрудняет поиск эффективных методов профилактики и лечения. Лечение больных эндометриозом представляет собой одну из важнейших проблем современной гинекологии, поскольку не существует единого подхода и универсального метода терапии, который был бы абсолютно эффективным в отношении симптомов заболевания и гарантировал бы отсутствие рецидивов.

В результате исследований [Савельева Г.М., Соломатина А.А., Михалева Л.М. и др. соавт. Еще раз о терминологии эндометриоидных образований яичника // Акуш. и гинекол. - 2005. - №6. - С. 33], [Пашкова А.В. Клинико-морфологические параметры эндометриоза яичников. Диагностика и терапия // Автореф. дисс. …канд. мед. наук. М., 2004], [Дурасова Е.Н., Клинико-морфологические варианты и молекулярные особенности эндометриоза яичников // Автореф. дисс. …канд. мед. наук. М., 2011] установлено, что терминами «эндометриома» и «эндометриоидная киста» целесообразно обозначать различные гистологические варианты эндометриоидных образований яичников - железисто-кистозный и кистозный.

Описаны различные лабораторные методы диагностики при эндометриозе.

Известен СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОМЕТРИОИДНЫХ КИСТ ЯИЧНИКОВ (RU 2480761 С1, Ширинг и др., 27.04.2013), который включает исследование сыворотки крови, где у пациенток при наличии кисты яичника колориметрическим методом определяют активность аргиназы и при ее величине 0,73 ммоль/ч/л и выше диагностируют эндометриоидные кисты яичников. Однако этот способ не предусматривает диагностику морфологических форм эндометриоидных образований яичников в зависимости от их типов: кистозного и железисто-кистозного. Описан СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ГИСТЕРЭКТОМИИ ПРИ ГИПЕРПЛАЗИИ ЭНДОМЕТРИЯ (RU 2310857 C1, ММА им. И.М. Сеченова, 20.11.2007). В эндометрии определяют уровень онкомаркеров сосудистого эндотелиального фактора роста и белка Р53. При величине первого более 1 балла и обнаружении второго делают вывод о необходимости гистерэктомии. Использование способа позволяет повысить точность определения показаний к гистерэктомии у женщин с гиперплазией эндометрия, что дает возможность своевременно и обоснованно выполнить гистерэктомию, однако этот способ не предусматривает диагностику морфологических форм эндометриоидных образований яичников в зависимости от кистозного и железисто-кистозного типа.

Наиболее близким к патентуемому является СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВА ЭНДОМЕТРИОИДНОЙ КИСТЫ ЯИЧНИКА (RU 2304782 С1, Сидорова и др., 20.08.2007 - прототип). Иммуногистохимически определяют показатели экспрессии матриксной металлпротеиназы-7 и ингибитора матриксной металлопротеиназы - TIMP-4, по величине которых при величине первого более 5 и второго менее 5 баллов прогнозируют рецидив эндометриоидной кисты.

Однако этот способ не предусматривает диагностику морфологических форм эндометриоидных образований яичников и характеризуется недостатками, к которым следует отнести: неспецифичность маркера - выявленная закономерность может быть характерна и для других гормон-зависимых заболеваний; сопутствующая патология может влиять на уровень экспрессии гена-мишени. Поскольку маркером является экспрессия гена, это может, в некоторых ситуациях, не отражать представленность рецепторов в цитозоле или мембране (если говорится о ММР-9 или другом белке, то не отражать его количество). В качестве контроля использовался биоптат неизмененного яичника, следовательно в дальнейшем необходима проверка маркера, так как не учитывался возможный полиморфизм или мутации генов, что может внести погрешность при проверке маркера.

В основе патентуемого изобретения лежит комплексная оценка молекулярных маркеров гистологических вариантов эндометриоза яичников: железисто-кистозного и кистозного.

Патентуемый способ определения вида эндометриоза яичника включает патоморфологическое и молекулярно-биологическое исследование ткани яичника.

Отличие способа состоит в том, что проводится молекулярно-биологическое исследование экспрессии генов ингибитора матриксной металлопротеиназы TIMP1 и TIMP2 в тканях очага эндометриоза, которое позволило выявить увеличение экспрессии гена TIMP1 в 1,5 раза в ткани железисто-кистозного эндометриоза по сравнению с кистозным. Выявленное различие является основанием для разделения пациенток на 2 группы по типу эндометриоза яичников.

Проведя ROC-анализ на чувствительность и специфичность выбранного нами маркера (а именно TIMP1), мы получили прогностическую ценность (эффективность), равную 0,82 (AUC), что характеризуют наш маркер как отличный классификатор. Выбранным значением экспрессии гена TIMP1 относительно гена сравнения GAPDH для разделения пациенток на группы по типу эндометриоидного образования стало значение 0,5 о.е. Если значение экспрессии больше 0,5 о.е. - имеет место железисто-кистозный тип эндометриоза яичников, если меньше - то кистозный.

Технический результат изобретения - обеспечение надежной дифференциальной диагностики вида эндометриоза яичников: железисто-кистозного или кистозного путем оценки уровня экспрессии гена ингибитора матриксной металлопротеиназы TIMP1 в эндометриоидной ткани яичников.

В основе изобретения лежат результаты клинико-лабораторного обследования пациенток репродуктивного возраста с эндометриоидными образованиями яичников. Обследование пациенток с эндометриоидными яичниковыми образованиями проведено в соответствии с дифференциально-диагностическим алгоритмом, который включает в себя детальный сбор анамнеза, физикальное и гинекологическое обследование, методы лабораторной диагностики, УЗИ брюшной полости и органов малого таза по стандартной методике в 2Д режиме с оценкой, дополнительно, степени выраженности спаечного процесса для определения возможности проведения оперативного лечения лапароскопическим доступом у больных с ранее перенесенными чревосечениями, а также обследование желудочно-кишечного тракта. На дооперационном этапе всем пациенткам выполнено клинико-лабораторное обследование, включающее, помимо общеклинических методов исследования, УЗИ органов малого таза с допплерометрией (ЦДК), в сыворотке крови пациенток проводилось исследование биохимических маркеров: фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), лютеинизирующего гормона (ЛГ), эстрадиола и прогестерона, антимюллерова гормона (АМГ) - методом твердофазного хемилюминесцентного иммуноанализа в плазме крови на анализаторе ACS-180 «Chiron-Diagnostics» (Англия) в ООО «Независимая лаборатория Инвитро». Забор сыворотки крови для определения содержания ФСГ, ЛГ, эстрадиола осуществляется на 4-7 день менструального цикла.

Всем 88 пациенткам выполнено хирургическое вмешательство с использованием лапароскопического доступа: кистэктомия или экономная резекция яичников в пределах здоровых тканей, удаление обнаруживаемых на брюшине или крестцово-маточных связках очагов эндометриоза, разделение спаек. Окончательный диагноз у всех обследованных верифицирован при патоморфологическом исследовании, которое выполняется в условиях патологоанатомического отделения по стандартной методике. В зависимости от гистологического исследования удаленного материала все наблюдаемые (88) были разделены на две группы варианта патологии: кистозного (66) и железисто-кистозного типа (22).

Способ осуществляют следующим образом. Ткань эндометриоидного образования и ткань неизмененного яичника (0,2 см3), полученную интраоперационно, помещается в пробирку типа «эппендорф» с раствором RNA-later (QIAGEN) и хранится при температуре t=-20°С, не более 30 суток. Из биоптата выделяется мРНК с помощью комплекта реагентов «РИБО-преп» («AmpliSens», Россия) согласно инструкции производителя. Получение кДНК на матрице мРНК проводится с помощью реакции обратной транскрипции с использованием комплекта реагентов «PEBEPTA-L» («AmpliSens», Россия).

Для полимеразной цепной реакции в реальном времени может быть использован набор готовых реактивов для ПНР "Реакционная смесь 2,5х для проведения ПЦР-РВ в присутствии SYBR Green I" на приборе iCycler iQ5 real-time PCR (BioRad, Германия). В качестве контрольного гена используется ген GAPDH. Последовательность праймеров рецепторов эстрадиола, прогестерона и GAPDH для ПЦР известны и описаны [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/].

Количественное определение уровней экспрессии генов осуществляется с помощью формулы 0,5-ΔCt (о.е., для выявления достоверных различий между группами данных) и 2 -ΔΔCt (для выяснения кратности различий), где ΔCt = Ct (искомого гена) - Ct (GAPDH) и ΔΔCt = ΔCt (при 1 патологии) - ΔCt (при 2 патологии).

Все первичные экспериментальные данные обрабатываются с использованием программы GraphPadPrism 5.0. Анализ соответствия признака закону нормального распределения проводится с применением критерия Колмогорова-Смирнова. Описательная статистика количественных признаков при нормальном распределении представлена в виде М±SE, где М - среднее значение, a SE - стандартная ошибка. Сравнение независимых переменных в двух группах осуществляется непараметрическим методом с применением критерия Манна-Уитни. Уровнем значимости при статистических расчетах в данной работе будет принято значение показателя вероятности ошибки (р) не более 5%, то есть р≤0,05.

Клинические примеры

Пример 1. Пациентка И.Е.Ю., 28 лет. Поступила в гинекологическое отделение 24.09.13 в плановом порядке на оперативное лечение лапароскопическим доступом по поводу эндометриоидного образования правого яичника. У пациентки жалобы на тянущие боли в нижних отделах живота, на обильные и болезненные менструации. По данным УЗИ малого таза: тело матки расположено в срединном положении, размерами 38-42-45 мм, структура миометрия однородная. М-эхо 8 мм, однородное. В области правых придатков лоцируется у ворот образование диаметром 35 мм с мелкодисперстной трудно смещаемой взвесью при тракции вагинальным датчиком, толщина стенки образования 2 мм, кровоток в ней не регистрируется. Левый яичник 30-28-27 мм, с мелкими фолликулами. Свободная жидкость в малом тазу четко не визуализируется. Концентрация опухолеассоциированного биохимического онкомаркера СА-125 - 40 Ед/мл. 25.09.13 - произведена оперативная лапароскопия, выполнен лизис спаек, кистэктомия справа с использованием биполярной энергии, коагуляция очагов эндометриоза, санация брюшной полости. Результат гистологического заключения №108007-11 Эндометриоз яичника (железисто-кистозный вариант). TIMP1 = 0,61 о.е.

Пример 2. Пациентка А.А.А., 27 лет. Поступила в гинекологическое отделение для оперативного лечения в плановом порядке. У пациентки жалобы на тянущие боли в нижних отделах живота, усиливающиеся накануне и во время менструации, на диспареунию. По данным УЗИ малого таза: тело матки размерами 39-41-44 мм, структура миометрия ячеистая. М-эхо - 9 мм, однородное. В левом яичнике визуализируется образование диаметром 70 мм, с тонкой стенкой, содержимое мелкодисперстная взвесь, аваскулярное. Правый яичник 28-31-29 мм, с фолликулами. Концентрация онкомаркера СА-125 - 8 мЕД/мл. Концентрация АМГ - 7.08 нг/мл. 13.03.2013 г была произведена оперативная лапароскопия, кистэктомия слева (капсула кисты отделена от стромы яичника с использованием аквадиссекции). По данным гистологического заключения №2239-44 - фрагменты яичниковой ткани в виде тонких узких полосок-эндометриоз яичника, железисто-кистозный вариант эндометриоза, соединительнотканная стенка кисты выстланная цилиндрическим эпителием. При АЦР-РТ исследовании экспрессии генов стероидных гормонов в ткани эндометриоидной кисты получены данные: TIMP1 = 0,95 о.е.

Пример 3. Пациентка Л.О.И., 28 лет поступила в гинекологическое отделение. Больная предъявляла жалобы на тянущие боли в нижних отделах живота периодического характера, усиливающиеся во время менструации. По данным УЗИ малого таза: тело матки расположено кзади, размерами 41-42-45 мм, миометрий однородной структуры. М-эхо 10 мм, однородное. В правом яичнике определяется образование с толстой стенкой, диаметром 60 мм, содержимое мелкодисперстная трудносмещаемая взвесь, аваскулярное. Левый яичник 26-29-30 мм, в структуре единичные фолликулы в поле зрения. Свободная жидкость в малом тазу четко не визуализируется. Онкомаркер СА-125-16.5 Ед/мл. Произведена лапароскопия, кистэктомия справа, лизис спаек с использованием аргоноплазменной энергии. По данным гистологического исследования - эндометриоз яичников, кистозный вариант.TIMP 1=0,22 о.е.

Пример 4. Пациентка О.И.М., 30 лет. Жалобы на периодические тянущие боли в нижних отделах живота, больше справа. По данным УЗИ м/т: тело матки расположено срединно, нормальных размеров и структуры. В правом яичнике имеется образование до 40 мм, содержимое трудносмещаемая взвесь, с единичным кровотоком в капсуле при ЦДК. Левый яичник 30-28-32 мм, с мелкими фолликулами. Концентрация онкомаркера СА-125 - 12.3 Ед/мл. Произведена лапароскопия, кистэктомия справа. По данным гистологического исследования - кистозный вариант эндометриоза яичников. TIMP1 = 0,17 о.е.

Таким образом представленные данные свидетельствуют о достижении технического результата: возможности молекулярнобиологической оценки типа эндометриоидной ткани (железисто-кистозного и кистозного) путем анализа транскриптома ткани, что обеспечит повышение эффективности диагностики и позволит осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников.

Способ определения вида эндометриоза яичника, включающий молекулярно-биологическое исследование ткани биоптата,

отличающийся тем, что проводят анализ транскриптома ткани очага эндометриоза яичников,

определяют уровень экспрессии гена ингибитора матриксной металлопротеиназы 1 (TIMP1) и при превышении экспрессии гена TIMP1 выше 0,5 о.е. Следует отнести пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Для этого с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных, вызываемой бактериями Clostridium perfringens (Cl.

Изобретение относится к области медицины, а именно к авиакосмической медицине, и может быть использовано для оценки оптимального уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов в условиях космического полета.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологи, и представляет собой способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут.

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП).

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ.

Настоящее изобретение касается способа предварительной оценки, будет ли терапевтическое средство, выбранное из группы полипептид, антитело или иммуноадгезин, иметь необходимую скорость выведения у яванского макака, человека. Сущность способа заключается в том, что наносят покрытие с баскуловирусными частицами (BV) на микротитрационный планшет. Далее проводят контактирование терапевтического средства с BV и проводят измерение уровня связывания терапевтического средства с BV. Также проводят измерение связывания терапевтического средства с микротитрационным планшетом без BV. Показатель BV рассчитывают из среднего значения, полученного в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства с BV, деленного на среднее значение, полученное в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства без BV. Показатель BV выше 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь быструю скорость выведения, при этом быстрая скорость выведения выше 12 мл/кг/день, а показатель BV ниже 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь необходимую скорость выведения. Использование способа позволяет выявлять антитела, у которых наблюдается быстрое выведение из организма. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и патоморфологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей аногенитальных маммароподобных желез. Для этого определяют принадлежность опухоли к группе опухолей АМПЖ, локализацию опухоли в коже и её расположение в коже. При её расположении в дерме или в эпидермисе или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом определяют её доброкачественность или злокачественность. После этого определяют гистологический рисунок и архитектонику опухоли и их сходство с опухолями молочной железы. При расположении опухоли в эпидермисе, ее злокачественности и при наличии педжетоидного гистологического рисунка исследуемой опухоли и ее архитектонике, сходной с маммарной болезнью Педжета, дополнительно определяют наличие или отсутствие злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис и при отсутствии экспрессии Uroplakin-III, PSA, S100, р63, а также отсутствии злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис, диагностируют первичную экстраммамарную болезнь Педжета. При расположении опухоли в дерме или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой итрадуктальной папилломы молочной железы, диагностируют папиллярную гидраденому. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой фиброаденомы молочной железы, диагностируют фиброаденому маммароподобных желез (МПЖ). При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой аденозной опухоли молочной железы, диагностируют аденозную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой лактирующей аденомы молочной железы, диагностируют лактирующую аденому МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой доброкачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют доброкачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой злокачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют злокачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой дуктальной карциномы in situ молочной железы, диагностируют дуктальную аденокарциному in situ аногенитальных МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой неспецифицированной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие неспецифицированной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют дуктальную аденокарциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой тубуло-лобулярной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие тубуло-лобулярной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют тубуло-лобулярную карциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей, с архитектоникой аденокистозной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие аденокистозной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют аденокистозную карциному МПЖ.. При расположении опухоли в эпидермисе и дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке в дерме и педжетоидном гистологическом рисунке в эпидермисе и архитектонике, схожей с архитектоникой инвазивной карциномы молочной железы и маммарной болезни Педжета, дополнительно оценивают отсутствие или наличие инвазивной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют экстрамаммарную болезнь Педжета, вторичную к инвазивной карциноме АМПЖ. Способ обеспечивает диагностически значимые клинико-морфологические критерии и их комбинации для дифференциальной диагностики опухолей АМПЖ при повышении чувствительности, специфичности и точности проводимой дифференциальной диагностики. 6 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к исследованиям таких канцерогенных веществ, как нитрозамины, модифицирующие апоптоз у детей, проживающих в неблагоприятных условиях среды обитания. Сущность изобретения: производят отбор пробы крови у ребенка и определяют в пробе наличие нитрозамина - нитрозодиметиламина (НДМА), в тех пробах крови пациентов, где установлено наличие НДМА, извлекают мононуклеарные клетки и с использованием метода проточной цитометрии определяют количество белка р53. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Затем на детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР проводят генотипирование полиморфизма, используя в качестве праймера участок ДНК Arg72Pro (rs1042522) гена ТР53, путем исследования его аллельного состояния, устанавливая при этом для гена ТР53 одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или патологическое гомозиготное. И если одновременно установлено наличие патологического гомозиготного или гетерозиготного генотипов Arg72Pro гена ТР53, снижение в крови содержания р53 в 1,5 и более раз, по отношению к нижней границе физиологической нормы для детей. При наличии в крови НДМА оценивают процесс апоптоза у ребенка под влиянием нитрозаминов как замедленный. Изобретение обеспечивает точность оценки влияния нитрозаминов на апоптоз с возможностью в последующем судить о развитии иммунодефицитных и иммунопролиферативных состояний населения уже на ранних стадиях. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития быстрорастущей миомы матки, заключающийся в том, что исследуют ультразвуковые параметры матки с подсчетом количества миоматозных узлов, методом краевой дегидратации менструальных выделений (МВ) определяют наличие параллельных и волокнистых структур и рассчитывают коэффициент Р: где z рассчитывают по формуле:z=b1×x1+b2×x2+b3×х3+а,где b1 - коэффициент, равный 2,172; x1 - волокнистые структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b2 - коэффициент, равный 2,238; x2 - параллельные структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b3 - коэффициент, равный 1,568; x3 - количество узлов; а - константа, равная –10,915; и при значении Р>0,5 дополнительно методом иммуноферментного анализа исследуют уровни лигандов APRIL и TRAIL, и при значении APRIL более 11,1 нг/мл, TRAIL менее 22,5 пг/мл прогнозируют риск развития быстрорастущей миомы матки. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения нейтрализующих антител (HAT) в сыворотке крови больных рассеянным склерозом, леченных препаратами интерферона-бета (ИФНβ). Для этого применяют цитопатический тест с использованием чувствительной к вирусу энцсфаломиокардита мышей (ЕМС) культуры клеток фибробластов легкого эмбриона человека (ФЛЭЧ). Определение HAT к препарату ИФНβ проводят при помощи реакции нейтрализации антивирусной активности методом титрования сыворотки рефрактерного к лечению соответствующим препаратом пациента, определением HAT к препарату ИФНβ. Проводят культивирование клеток ФЛЭЧ в условиях 37±2°С в атмосфере CO2 5,0±0,5% и 90±5% влажности в среде DMEM с 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) в течение 1 суток в ячейках плоскодонного 96-луночного планшета в количестве 20-50 тыс.кл./яч. В день постановки теста разводят контрольную ЭТС и испытуемую сыворотку пациента в 10 или в 20 раз. Затем в ячейках круглодонного планшета готовят по 100 мкл разведений препарата ИНФβ в нсобогащенной сывороткой среде RPMI-1640: 2000; 1000; 500; 250; 125; 63; 31; 16; 8; 4; 2; 1; 0,5; 0,25; 0 МЕ/мл; в ячейки с двумя приготовленными разведениями препарата ИФНβ параллельно вносят по 100 мкл разведенные в 10 или 20 раз сыворотки пациента и контрольной ЭТС. Инкубируют планшет 1 час в условиях CO2-инкубатора. Далее удаляют среду из культуральных планшетов с преинкубированными клетками ФЛЭЧ и в ячейки вносят по 100 мкл приготовленных разведений препарата с сывороткой пациента. Проводят инкубацию планшетов с клетками в течение 22-24 часов, далее в необогащенную сывороткой основу среды DMEM вносят вирус-индикатор ЕМС или VSV (вирус энцефаломиокардита мышей/вирус везикулярного стоматита, штамм «Индиана») в дозе составляющей 102±0,25 ТЦД50 в 0,1 мл. Проводят инкубирование в термостате 22-24 часа. Через сутки оценивают цитопатическое действие вируса в зависимости от наличия нейтрализующей ИНФβ активности сыворотки пациента по формуле: HAT (НЕ/мл)=А (МЕ/мл)×Z, где А (МЕ/мл) - максимальная нейтрализуемая активность препарата ИНФ-бета, при которой наблюдается цитодеструктивное действие вируса на монослой чувствительной культуры ФЛЭЧ, выраженная в международных единицах на 1 мл; Z - разведение сыворотки пациента. Использование данного способа позволяет оценку эффективности лечения препаратами у пациентов, в течение длительного времени подвергавшихся лечению препаратами ИФНβ путем количественного определения ИНФβ нейтрализующих антител. 1 з.п. ф-лы, 3 пр., 2 табл.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлено антитело, специфически связывающееся с PTK7 (протеинтирозинкиназа 7) человека, а также конъюгат указанного антитела с цитотоксическим агентом. Также предложены нуклеиновые кислоты, кодирующие указанное антитело, и включающие их экспрессионные векторы и клетки-хозяева. Кроме того, предложены способы применения указанного антитела, в том числе в составе конъюгата, для диагностики и лечения рака у субъекта. Изобретение обеспечивает эффективное нацеливание на опухолевые стволовые клетки, что может быть использовано для лечения пациентов, страдающих от широкого спектра злокачественных образований. 16 н. и 36 з.п. ф-лы, 42 ил., 5 табл., 16 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и найдет широкое применение в лечении пациенток с аменореей, обусловленной нервной анорексией. Сущность способа: пациенток на этапе редукции нервной анорексии с продолжающейся аменореей в сыворотке крови методом ИФА определяют уровень дофамина и ЛГ, и если уровень дофамина составляет 67,25 пг/мл и более, но менее 280 пг/мл, а показатели ЛГ 0,95 мМЕ/л и более, прогнозируют нормализацию менструальной функции. Применение данного способа прогнозирования восстановления менструальной функции позволит своевременно выбрать адекватную терапию для лечения данного заболевания, что поможет предотвратить развитие вторичного гипогонадизма, приводящего к гипоплазии матки и бесплодию в репродуктивном периоде. Способ позволяет объективизировать оценку эффективности лечения и своевременно прогнозировать дальнейшее течение заболевания. Способ имеет чувствительность – 93,9%, специфичность 93,9%, точность 88,2%. 3 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для иммуногистохимического выявления антигенов в препаратах органов продуктивных и непродуктивных животных длительного хранения в фиксаторах. Для этого проводят обработку поверхности предметного стекла для наклеивания срезов адгезивом на основе яичного белка и глицерина в соотношении 2:1. Затем проводят депарафинирование и регидратацию срезов. При этом после депарафинизации и регидратации срезы опускают на 5 мин в чистую емкость с дистиллированной водой. После чего срезы помещают в Н2О2 на 10-12 мин, после работы пароварки, содержащей цитратный буфер в течение 40-45 мин. При этом стекла из пароварки не вынимают в течение 20 мин после прекращения ее работы. Промывают срезы дистиллированной водой, затем помещают в буфер Твин 20х. Для образования сухого поля срезы промакивают одноразовыми бумажными полотенцами и делают вокруг срезов гидрофобный слой маркером. Далее наносят блокировочный раствор, в качестве которого используют 5% бычий сывороточный альбумин, на 10-12 мин. Наносят первичные антитела и ставят в термостат при 27°С на 24-26 ч во «влажной камере», через 14-15 ч смывают первичные антитела буфером Твин 20х в течение 5-7 мин. При этом срезы промакивают и наносят на них вторичные антитела. Ставят в термостат на 1-2 ч во «влажной камере» при температуре 27°С. Смывают вторичные антитела, при этом используют хромоген на безбиотиновой системе детекции. Окрашивают в течение 3 мин, смывают хромоген в трех порциях дистиллированной воды по 5-7 мин. Докрашивают срезы гематоксилином Майера 5-7 мин. Затем ополаскивают стекла в дистиллированной воде и опускают в щелочную воду на 10-15 с. Изобретение позволяет выявлять антигены в гистологических препаратах, после их длительного хранения в фиксаторах. 8 ил., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для получения антигена для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных. Для этого проводят экстракцию липополисахаридов бруцелл вида Brucella abortus и Brucella melitensis, для чего их берут в равном соотношении. Обрабатывают 2%-ным раствором уксусной кислоты в присутствии 10% NaCl при автоклавировании, затем отделяют экстракт центрифугированием, фракционируют супернатант спиртом с последующим диализом и выделяют О-полисахарид центрифугированием. Использование данного способа позволяет получить комплексный антиген, содержащий О-полисахаридный М- и А-антигены, при этом включение в комплекс М-компонента значительно повышает чувствительность реакции иммунодиффузии при диагностике бруцеллеза, вызываемого B. Melitensis. 1 пр.

Настоящее изобретение относится к акушерству и касается прогнозирования угрозы невынашивания инфекционного генеза на ранних сроках гестации. Сущность способа: в сыворотке крови беременных со сроком 6-11 недель гестации с помощью иммуноферментного анализа определяют уровень интерфероноподобного цитокина IL-28B. При концентрации IL-28B выше 261,4 пг/мл по сравнению с концентрацией, установленной для физиологически протекающей беременности, прогнозируют угрозу выкидыша в первом триместре гестации. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования угрозы невынашивания за счет использования в качестве количественного показателя увеличение концентрации цитокина IL-28B. Способ малоинвазивен, удобен и прост в применении, достаточно информативен и имеет высокую достоверность прогноза. Использование данного способа будет способствовать более быстрой и безопасной диагностике угрозы прерывания беременности инфекционного генеза в I триместре. 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии и касается способа определения вида эндометриоза яичника. Способ включает анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1, при превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73, чувствительностью - 83, AUC0,82. 4 пр.

Наверх