Способ прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Для этого с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли. При значении этого показателя выше 11,1% в ткани опухоли и 7,1% в ткани линии резекции прогнозируют развитие рецидива саркомы. Использование данного способа позволяет прогнозировать возникновение рецидива при лечении сарком мягких тканей путем определения процентного содержания лимфоцитарной субпопуляции T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim), поскольку данная популяция клеток влияет на развитие противоопухолевых иммунных реакций. 2 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива.

Из литературных источников известно, что иммунологическое микроокружение злокачественных опухолей неодинаково при различной локализации, гистологической характеристике (см. О.И. Кит, Е.Ю. Златник, Е.А. Никипелова, И.А. Новикова, Ю.А. Геворкян. Влияние гистологического строения и органного окружения на факторы локального иммунитета при раке желудка и толстой кишки // Международный журнал экспериментального образования. Медицинские науки. 2014. №1. С.76-79), стадии и плоидности опухоли при колоректальном раке (см. О.И. Кит, Е.Ю. Златник, Е.А. Никипелова, И.А. Новикова, А.В. Бахтин, О.Н. Селютина. Взаимоотношения плоидности и параметров локального иммунитета при опухолях толстой кишки. Молекулярная медицина. 2016. №1. С. 26-30; O.I. Kit, Е.А. Nikipelova, E. Yu. Zlatnik, A.V. Shaposhnikov, I.A. Novikova, R.E. Tolmakh. Local cell-mediated immunity in stage III and IV colon cancer // 2014 ASCO Annual Meeting May 30-June 3 2014 - published on Meeting Library (http://meetinglibrary.asco.org) e 22097), степени ее дифференцировки при раке пищевода (см. А.Ю. Максимов, Е.Ю. Златник, И.А. Новикова, Г.И. Закора, О.И. Кит, Е.Н., Колесников, B.C. Трифанов, О.Н. Селютина, А.Л. Базаев. Факторы локального иммунитета при раке пищевода разной степени дифференцировки. Современные проблемы науки и образования. - 2015. - №6; URL: http://www.science-education.ru/128-22552) и других факторах, определяющих прогноз заболевания, что позволяет рассматривать особенности тканевого субпопуляционного состава лимфоцитов в прогностическом аспекте.

Так, при прогностически наиболее благоприятном люминальном А подтипе рака молочной железы описано максимальное количество NK-клеток в ткани опухоли по сравнению с опухолями других подтипов (см. И.А. Новикова, Ю.С. Шатова, Е.Ю. Златник, Ю.В. Пржедецкий, Е.П. Ульянова, Е.Н. Черникова. Пролиферативные и иммунологические характеристики молекулярно-биологических подтипов рака молочной железы // Международн. журн. прикл. и фундам. исслед. (РАЕ). 2014. №11 (часть 1). С. 116-119). Показана связь степени распространенности опухолевого процесса при раке молочной железы с уровнем тканевых CD8+ лимфоцитов, повышение которого чаще наблюдается у пациенток, не имеющих метастазов в регионарные лимфатические узлы, а снижение характерно для поздних стадий опухоли (см. С.С. Чистяков, О.П. Гребенникова, Д.А. Буров, И.К. Воротников, Ф.А. Шамилов, Л.В. Скотаренко. Перспективы исследования интратуморальных лимфоцитов при раке молочной железы// Оригинальная статья опубликована на сайте РМЖ (Русский медицинский журнал): http://www.rmj.ru/articles/onkologiya/Perspektivy_issledovaniya_intratumoralynyh_limfocitov_pri_rake_molochnoy_ghelezy/#ixzz4EkaIuqmh С. 56).

Известны данные литературы о том, что у больных раком вульвы, у которых первый этап лечения был хирургическим, а в дальнейшем после проведения химиолучевой терапии развилась длительная (более 2-х лет) или кратковременная (менее 2-х лет) ремиссия, первоначальный уровень основных субпопуляций Т-лимфоцитов в опухоли, определяемый методом ИГХ, был неодинаков. В первом случае количество CD8+ клеток в опухолях оказалось выше (55±6%), а содержание CD4+ лимфоцитов - ниже (44,5±6%), чем у больных с кратковременной ремиссией (27±5,5% и 73±5,5% соответственно), что авторы объясняют возможным превалированием в последнем случае Tregs (CD4+CD25+FoxP3+), являющихся иммуносупрессивными и проонкогенными (см. Неродо Г.А., Новикова И.А., Златник Е.Ю., Закора Г.И., Ульянова Е.П., Иванова В.А., Неродо Е.А. Экспрессия лимфоцитарно-макрофагальных маркеров в ткани плоскоклеточной карциномы вульвы. Материалы IX съезда онкологов и радиологов стран СНГ и Евразии, 15-17.06.16, Минск, Республика Беларусь, 2016. С. 463).

Однако приведенные известные исследования факторов локального иммунитета, имеющих прогностическое значение при ряде злокачественных опухолей, не исследованы при саркомах мягких тканей (СМТ). Между тем, эти опухоли отличаются тяжелым течением, ранним и нередко многократным рецидивированием, слабой чувствительностью к принятым методам лечения, морфологической гетерогенностью. Инвалидизирующие операции, быстрая генерализация и в целом неблагоприятное течение СМТ делают особенно значимой разработку различных лабораторных тестов, направленных на улучшение диагностики, прогнозирования и возможной коррекции лечения. Развитие рецидива СМТ отягощает прогноз заболевания.

Известен способ прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей, включающий ИГХ-исследование ткани удаленной саркомы, отличающийся тем, что определяют наличие опухолевых клеток, экспрессирующих белки EGFR, CD34, bcl 6, bcl 2, при выявлении клеток с их гиперэкспрессией прогнозируют появление рецидива в короткие сроки, а при выявлении клеток со слабой экспрессией этих маркеров прогнозируют благоприятный исход (см. патент RU 2532332 C1, опубл. 10.11.2014, Бюл. №31). Однако предлагаемый авторами способ не учитывает состояние локальных иммунологических механизмов, что может представлять важность при применении как химио- так и иммунотерапии СМТ.

Задачей предложенного изобретения является разработка простого эффективного способа прогнозирования сарком мягких тканей.

Техническим результатом предлагаемого нами изобретения является улучшение прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей.

Технический результат достигается тем, что с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания Т-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+ клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли и при значении этого показателя выше 11,1% в ткани опухоли и 7,1% в ткани линии резекции прогнозируют развитие рецидива саркомы.

Выбор данной лимфоцитарной субпопуляции обусловлен ее влиянием на развитие противоопухолевых иммунных реакций.

Известно, что Т-регуляторные клетки (Tregs), фенотипически являясь частью Т-хелперной субпопуляции (CD3+CD4+), обладают супрессорным действием, угнетая все звенья иммунной системы (антиген-презентирующее, антиген-распознающее, эффекторное (см. Chen W. Dendritic cells and (CD4+) CD25+ T regulatory cells: crosstalk between two professionals in immunity versus tolerance. Front. Biosci. 2006; 11: 1360-1370; Azuma Т., Takahashi Т., Kunisato A. et al. Human CD4+ CD25+ regulatory T cells suppress NKT cell functions. Cancer Res 2003; 63: 4516-4520; Lim H.W., Hillsamer P., Banham A.H. et al. Cutting edge: direct suppression of В cells by CD4+ CD25+ regulatory T cells. J Immunol 2005;175:4180-3; Trzonkowski P., Szmit E., Mysliwska J. et al. CD4+ CD25+ T regulatory cells inhibit cytotoxic activity of T CD8+ and NK lymphocytes in the direct cell-to-cell interaction. Clin Immunol 2004; 112: 258-267).

Предлагаемый способ прогнозирования осуществляют следующим образом:

1. После хирургического удаления опухоли фрагмент нативной ткани опухоли и линии резекции гомогенизируют с помощью дезагрегирующего устройства BD Medimachine.

2. В гомогенатах определяют количественное содержание Т-регуляторных (T-regs) лимфоцитов (CD4+CD25+CD127dim) на проточном цитометре FACSCantoII (BD) по стандартной методике.

3. Результаты выражают в процентах от CD3+CD4+ клеток.

В табл. 1 представлены результаты исследования клеточных факторов локального иммунитета в образцах тканей опухоли и линии резекции у 10 больных СМТ наиболее часто встречающейся III стадии с благоприятным эффектом проведенного послеоперационного лечения и 7 больных с неэффективным результатом в виде развития рецидива.

Как видно из табл. 1, процентное содержание Tregs в тканевых образцах больных рецидивными СМТ статистически достоверно выше, чем при первичных опухолях; различия относятся как к опухолевой, так и к немалигнизированной ткани и свидетельствует о накоплении этих клеток в рецидивных опухолях, что, учитывая их вышеописанные свойства, отражает неблагоприятное течение СМТ. При обнаружении в ткани первичной опухоли и линии резекции показателей содержания Tregs, сходных с наблюдаемыми при рецидивной саркоме, прогнозируется развитие рецидива СМТ.

Подобных исследований при изучении прогнозирования сарком мягких тканей в доступной нам научно-медицинской и патентной литературе не встречалось, хотя методы иммунотерапии этой патологии активно разрабатываются (см. Балдуева И.А., Данилова А.Б., Новик А.В., Комаров Ю.И., Нехаева Т.Л., Проценко С.А., Семенова А.И., Пипиа Н.П., Воробейников Е.В., Карицкий А.П., Климашевский В.Ф., Имянитов Е.Н., Беляев A.M. Дендритные клетки, активированные раково-тестикулярными антигенами (РТА+), в лечении метастатических сарком мягких тканей // Вопросы онкологии, 2014. - N 6. - С. 700-706).

Сравнительный анализ известных способов прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей и предлагаемого нами способа позволяет выявить его новизну и отличия от известных. Новизна способа прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей заключается в определении процентного содержания Tregs (CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от CD3+CD4+ клеток в образцах опухолевой ткани и линии резекции после хирургического удаления опухоли.

Приводим клинические примеры использования способа.

Пример №1. Больной Д.

Анамнез заболевания. В декабре 2014 года обратился в РНИОИ с жалобами на наличие изъязвленной, кровоточащей опухоли мягких тканей области правого плеча, размерами 6,0×4,0×3,0 см, подвижной относительно костных структур. Регионарные лимфоузлы не увеличены. Со слов больного опухоль заметил в июне 2014 года. Отмечает быстрый рост опухоли. На основании результатов клинического обследования (МРТ, УЗИ, СРКТ) поставлен предварительный диагноз: Саркома мягких тканей области правого плечевого сустава. По данным пункционной биопсии опухоли от 04.12.2014 - миксофибросаркома.

Проведенное лечение: 10.12.2014 выполнена операция - удаление опухоли мягких тканей области правого плеча с пластикой ротационным кожно-жировым лоскутом.

Гистологический анализ: №94011-15/14 - G3 Лейомиосаркома с некрозом и миксоматозом. Диагноз: Лейомиосаркома мягких тканей области правого плечевого сустава, G3pT2bNoMo, St III, состояние после хирургического лечения, клиническая группа 2.

10.12.2014: Результаты исследования показателей локального уровня CD3+CD4+CD25+CD127dim: первичная опухоль 15,3%; линия резекции 7,5%. На основании полученных результатов прогнозируется раннее рецидивирование и неблагоприятное течение заболевания.

По месту жительства проведен курс ПХТ: ИФОСФОМИД 2,5 г/м2 1-3 день + МЕСНА 100% с 1-4 день; ДАКАРБАЗИН 250 мг/м2 1-3 день; ДОКСОРУБИЦИН 20 мг/м2 1-3 день. На фоне химиотерапии развился рецидив опухоли. Провести второй курс АПХТ не удалось из-за тромбоцитопении и лейкопении.

В марте 2015 года обратился с жалобами на наличие опухоли мягких тканей в области послеоперационного рубца области правого плечевого сустава, прежних размеров, но плотно фиксирована с акромиальным отростком. Поставлен предварительный диагноз: Лейомиосаркома мягких тканей области правого плечевого сустава, G3pT2bNoMo, St III, состояние после комбинированного лечения, рецидив №1, клиническая группа 2. Проведенное лечение: 24.03.2015 - удаление рецидива опухоли мягких тканей области правого плечевого сустава с резекцией акромиального отростка и с пластикой аутодермотрансплантатом.

Гистологический анализ: №21239-42/15; 21243-46/15 - Недифференцированная опухоль мягких тканей с обширными очагами некроза, инфильтративным ростом, G3. В поперечно-полосатых мышцах крупные петрификаты. Диагноз: Лейомиосаркома мягких тканей области правого плечевого сустава, G3pT2bNoMo, St III, состояние после комбинированного лечения, рецидив №1, состояние после хирургического лечения, клиническая группа 2. В РНИОИ с 10.04 по 2.06.2015 проведены 3 курса XT 2-й линии (йонделис 2,5 мг на 500 мл NaCl 0,9% внутривенно капельно).

В июле 2015 года обратился в РНИОИ с жалобами на рецидив опухоли мягких тканей правого плеча. По данным МРТ от 21.07.2015 - Рецидив опухоли мягких тканей правой плечелопаточной области, локализующейся в подкожно-жировой клетчатке, тесно прилегающей к дельтовидной мышце, смешанной структуры, размерами 5,3х2,4 см в аксиальной плоскости, 4,2 см в коронарной плоскости. Костные структуры без признаков деструкции. По данным цитологического исследования - Саркома; обилие ангиоматозного компонента. Предварительный диагноз: Лейомиосаркома мягких тканей области правого плечевого сустава, G3pT2bNoMo, St III, состояние после комбинированного лечения, рецидив №2, клиническая группа 2.

Проведенное лечение: 28.07.2015 - удаление опухоли области правого плечевого сустава с пластикой ротационным лоскутом. Гистологический анализ: №60975-8/15 от 5.08.2015: G3 лейомиосаркома с некрозом и кровоизлияниями. По месту жительства проведено 4 курса АПХТ.

Диагноз: Лейомиосаркома мягких тканей области правого плечевого сустава, G3pT2bNoMo, St III, состояние после комбинированного лечения, рецидив №2, состояние после хирургического лечения, кл. гр. 2.

В декабре 2015 года обратился с жалобами на рецидив опухоли. При обследовании выявлены метастазы в легкие.

Пример №2. Больной Б.

Анамнез: Больной жалуется на опухоль, которая появилась в 2008 году после тупой травмы. Вначале опухоль была небольших размеров, затем прогрессивно увеличилась, по поводу чего больной и обратился в РНИОИ в апреле 2014 г.

На основании результатов клинического обследования (МРТ, УЗИ, СРКТ) поставлен предварительный диагноз: Саркома мягких тканей правой голени (без признаков вовлечения в процесс магистральных сосудов и костных структур, размеры 9.8×5.1×13.2 см) T2bN0M0, St II, клиническая группа 2. Проведенное лечение: 17.04.14 фасциально-футлярное удаление опухоли мягких тканей правой голени.

Гистологический анализ: №31355-362 - G3 полиморфная липосаркома. №31363-366- по линии резекции опухоли нет. Диагноз: Саркома мягких тканей правой голени T2bN0M0 (pG3T2bN0M0) st III, состояние после хирургического лечения, клиническая группа 2.

17.04.2014 Результаты исследования показателей локального уровня CD3+CD4+CD25+CD127dim: первичная опухоль 2,3%; линия резекции 1,2%. Прогнозируется отсутствие рецидивирования. В послеоперационном периоде (в мае 2014 г. ) проведены сеансы лучевой терапии СОД=50 Гр.

Диагноз: Саркома мягких тканей правой голени T2bN0M0 (pG3T2bN0M0) st III, состояние после комбинированного лечения, клиническая группа 3. На последнем обследовании в феврале 2016 г. рецидивов не выявлено.

Таким способом был рассчитан прогноз рецидива у 17 больных СМТ. Разработанный способ прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей является промышленно применимым. С помощью данных прогностических факторов можно прогнозировать исход заболевания и планировать лечебные мероприятия.

Способ прогнозирования рецидивирования сарком мягких тканей, включающий иммунофенотипирование клеток удаленной ткани, отличающийся тем, что с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs(CD3+CD4+CD25+CD127dim) лимфоцитов от количества CD3+CD4+ клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли и при значении этого показателя выше 11,1% в ткани опухоли и 7,1% в ткани линии резекции прогнозируют развитие рецидива саркомы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и касается иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных, вызываемой бактериями Clostridium perfringens (Cl.

Изобретение относится к области медицины, а именно к авиакосмической медицине, и может быть использовано для оценки оптимального уровня компенсаторно-приспособительных и адаптационных возможностей организма космонавтов в условиях космического полета.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для прогноза возникновения рецидива у больных раком вульвы. Для этого в ткани больных раком вульвы иммуногистохимическим методом полуколичественно оценивают экспрессию маркеров ангиогенеза - CD34, апоптоза - р53, пролиферативной активности - Ki-67.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования вероятности развития метастазов в лимфоузлы у пациентов с диагнозом рак желудка. Осуществляют амплификацию фрагментов генетических локусов В2М, HV2 и CFLAR методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет относительной копийности генов по формуле rC=2-(Ct(ген мишень)-Ct(B2M)), где rС - относительная копийность гена в опухолевой ткани, Ct - среднее значение сигналов флюоресценции, сравнивают полученные значения относительной копийности генов с прогностическими, и при значениях rСHV2<870 и rСCFLAR>0,40 прогнозируют отсутствие метастазов, а при значениях rСHV2>870 и rСCFLAR<0,40 прогнозируют развитие метастазов.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологи, и представляет собой способ подготовки пробы для проведения иммунофлюоресцентного исследования при диагностике болезни Хейли-Хейли, включающий размещение на предметном стекле криостатных срезов кожи лабораторного животного, нанесение на них типированной сыворотки больного, инкубацию при температуре 37,2°C во влажной камере в течение 45 мин, промывку срезов, отличающийся тем, что криостатные срезы кожи лабораторного животного предварительно обрабатывают 100% охлажденным ацетоном с температурой 4,0-6,0°C в течение 3-5 мин, затем высушивают в течение 2-3 мин при комнатной температуре, причем промывку срезов осуществляют в течение 3-5 минут.

Изобретение относится к медицине и к клинической биохимии и может быть использовано для оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности (цмЛПНП).

Изобретение относится к области анализа биологических проб. Способ анализа проб включает в себя анализ клинико-химических и иммунологических параметров, а также включает установку картриджей для реагентов в приемное устройство, установку сосуда для пробы в пробоприемник, определение клинико-химических и иммунологических параметров с применением измерительной кюветы, промывку или извлечение использованных измерительных кювет, извлечение использованных картриджей для реагентов и сосуда для проб.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования безрецидивной выживаемости у больных раком молочной железы. Сущность способа: определяют уровень экспрессии YKL-39 по технологии ТaqMan с помощью специфичных праймеров и пробы Sense 5’-aacaacaaggttatcatcaaggac-3’, AntiSense 5’-tttgggattcttggttttgag-3’, Probe FAM-5’-agtgaagtgatgctctaccagaccat-3’-BHQ1, далее проводят ПЦР-анализ экспрессии гена белка YKL-39, оценивают относительную экспрессию гена белка YKL-39 с помощью метода Pfaffl в условных единицах (УЕ) относительно гена рефери GAPDH, причем в качестве калибратора используют нормальную ткань молочной железы, в которой при проведении исследования аналогичным вышеописанному способом уровень экспрессии гена белка YKL-39 составляет 1 УЕ.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использован для выявления предраковых изменений в молочной железе. Для этого определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА.

Изобретение относится к области биохимии. Описаны антиген-связывающие фрагменты (Fab), селективно связывающиеся с ботулиническим нейротоксином С, в частности гуманизированные Fab.
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу. В гистологических срезах лимфоидного органа после иммуногистохимического окрашивания морфометрически подсчитывают количество CD4+ Т-лимфоцитов и вычисляют их массу по формуле: М=m×D/100%, где М - масса CD4+ Т-лимфоцитов (г), m - масса селезенки (г), D - количество CD4+ Т-клеток (%). При значениях массы CD4+ Т-лимфоцитов более и равной 5,4 г констатируют благоприятное течение апластической анемии, а при менее 5,4 г устанавливают неблагоприятное течение заболевания. Использование данного способа в практической гематологии позволяет прогнозировать течение апластической анемии после спленэктомии, независимо от тяжести заболевания, что дает возможность дифференцированно подходить при назначении терапии. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, к лабораторной диагностике в гинекологии и касается способа определения вида эндометриоза яичника. Способ включает анализ транскриптома эндометриоидной ткани очага эндометриоза яичника путем проведения исследования экспрессии гена TIMP1, при превышении экспрессии гена TIMP1 относительно гена выше 0,5 о.е. относят пациенток к группе с железисто-кистозным типом эндометриоза яичников, если меньше или равно 0,5 о.е. - к группе с кистозным вариантом эндометриоза яичников. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики и позволяет осуществить персонализированный подход к лечению пациенток с эндометриозом яичников. Предлагаемый маркер обладает специфичностью - 73%, чувствительностью - 83%, AUC=0,82. 4 пр.

Настоящее изобретение касается способа предварительной оценки, будет ли терапевтическое средство, выбранное из группы полипептид, антитело или иммуноадгезин, иметь необходимую скорость выведения у яванского макака, человека. Сущность способа заключается в том, что наносят покрытие с баскуловирусными частицами (BV) на микротитрационный планшет. Далее проводят контактирование терапевтического средства с BV и проводят измерение уровня связывания терапевтического средства с BV. Также проводят измерение связывания терапевтического средства с микротитрационным планшетом без BV. Показатель BV рассчитывают из среднего значения, полученного в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства с BV, деленного на среднее значение, полученное в анализах связывания, в которых измеряют уровень связывания терапевтического средства без BV. Показатель BV выше 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь быструю скорость выведения, при этом быстрая скорость выведения выше 12 мл/кг/день, а показатель BV ниже 5 указывает на повышенную вероятность того, что терапевтическое средство будет иметь необходимую скорость выведения. Использование способа позволяет выявлять антитела, у которых наблюдается быстрое выведение из организма. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и патоморфологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики опухолей аногенитальных маммароподобных желез. Для этого определяют принадлежность опухоли к группе опухолей АМПЖ, локализацию опухоли в коже и её расположение в коже. При её расположении в дерме или в эпидермисе или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом определяют её доброкачественность или злокачественность. После этого определяют гистологический рисунок и архитектонику опухоли и их сходство с опухолями молочной железы. При расположении опухоли в эпидермисе, ее злокачественности и при наличии педжетоидного гистологического рисунка исследуемой опухоли и ее архитектонике, сходной с маммарной болезнью Педжета, дополнительно определяют наличие или отсутствие злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис и при отсутствии экспрессии Uroplakin-III, PSA, S100, р63, а также отсутствии злокачественных опухолей других органов, распространяющихся на эпидермис, диагностируют первичную экстраммамарную болезнь Педжета. При расположении опухоли в дерме или при наличии связи опухоли дермы с эпидермисом, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой итрадуктальной папилломы молочной железы, диагностируют папиллярную гидраденому. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой фиброаденомы молочной железы, диагностируют фиброаденому маммароподобных желез (МПЖ). При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой аденозной опухоли молочной железы, диагностируют аденозную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой лактирующей аденомы молочной железы, диагностируют лактирующую аденому МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее доброкачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой доброкачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют доброкачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой злокачественной филоидной опухоли молочной железы, диагностируют злокачественную филоидную опухоль МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, гистологическом рисунке и архитектонике, схожими с гистологическим рисунком и архитектоникой дуктальной карциномы in situ молочной железы, диагностируют дуктальную аденокарциному in situ аногенитальных МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой неспецифицированной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие неспецифицированной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют дуктальную аденокарциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей с архитектоникой тубуло-лобулярной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие тубуло-лобулярной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют тубуло-лобулярную карциному МПЖ. При расположении опухоли в дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке и архитектонике, схожей, с архитектоникой аденокистозной карциномы молочной железы, дополнительно оценивают отсутствие или наличие аденокистозной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют аденокистозную карциному МПЖ.. При расположении опухоли в эпидермисе и дерме, ее злокачественности, инвазивном гистологическом рисунке в дерме и педжетоидном гистологическом рисунке в эпидермисе и архитектонике, схожей с архитектоникой инвазивной карциномы молочной железы и маммарной болезни Педжета, дополнительно оценивают отсутствие или наличие инвазивной карциномы молочной железы и при ее отсутствии диагностируют экстрамаммарную болезнь Педжета, вторичную к инвазивной карциноме АМПЖ. Способ обеспечивает диагностически значимые клинико-морфологические критерии и их комбинации для дифференциальной диагностики опухолей АМПЖ при повышении чувствительности, специфичности и точности проводимой дифференциальной диагностики. 6 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к исследованиям таких канцерогенных веществ, как нитрозамины, модифицирующие апоптоз у детей, проживающих в неблагоприятных условиях среды обитания. Сущность изобретения: производят отбор пробы крови у ребенка и определяют в пробе наличие нитрозамина - нитрозодиметиламина (НДМА), в тех пробах крови пациентов, где установлено наличие НДМА, извлекают мононуклеарные клетки и с использованием метода проточной цитометрии определяют количество белка р53. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Затем на детектирующем амплификаторе с использованием ПЦР проводят генотипирование полиморфизма, используя в качестве праймера участок ДНК Arg72Pro (rs1042522) гена ТР53, путем исследования его аллельного состояния, устанавливая при этом для гена ТР53 одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или патологическое гомозиготное. И если одновременно установлено наличие патологического гомозиготного или гетерозиготного генотипов Arg72Pro гена ТР53, снижение в крови содержания р53 в 1,5 и более раз, по отношению к нижней границе физиологической нормы для детей. При наличии в крови НДМА оценивают процесс апоптоза у ребенка под влиянием нитрозаминов как замедленный. Изобретение обеспечивает точность оценки влияния нитрозаминов на апоптоз с возможностью в последующем судить о развитии иммунодефицитных и иммунопролиферативных состояний населения уже на ранних стадиях. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития быстрорастущей миомы матки, заключающийся в том, что исследуют ультразвуковые параметры матки с подсчетом количества миоматозных узлов, методом краевой дегидратации менструальных выделений (МВ) определяют наличие параллельных и волокнистых структур и рассчитывают коэффициент Р: где z рассчитывают по формуле:z=b1×x1+b2×x2+b3×х3+а,где b1 - коэффициент, равный 2,172; x1 - волокнистые структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b2 - коэффициент, равный 2,238; x2 - параллельные структуры в MB: наличие «2»; отсутствие «1»; b3 - коэффициент, равный 1,568; x3 - количество узлов; а - константа, равная –10,915; и при значении Р>0,5 дополнительно методом иммуноферментного анализа исследуют уровни лигандов APRIL и TRAIL, и при значении APRIL более 11,1 нг/мл, TRAIL менее 22,5 пг/мл прогнозируют риск развития быстрорастущей миомы матки. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения нейтрализующих антител (HAT) в сыворотке крови больных рассеянным склерозом, леченных препаратами интерферона-бета (ИФНβ). Для этого применяют цитопатический тест с использованием чувствительной к вирусу энцсфаломиокардита мышей (ЕМС) культуры клеток фибробластов легкого эмбриона человека (ФЛЭЧ). Определение HAT к препарату ИФНβ проводят при помощи реакции нейтрализации антивирусной активности методом титрования сыворотки рефрактерного к лечению соответствующим препаратом пациента, определением HAT к препарату ИФНβ. Проводят культивирование клеток ФЛЭЧ в условиях 37±2°С в атмосфере CO2 5,0±0,5% и 90±5% влажности в среде DMEM с 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) в течение 1 суток в ячейках плоскодонного 96-луночного планшета в количестве 20-50 тыс.кл./яч. В день постановки теста разводят контрольную ЭТС и испытуемую сыворотку пациента в 10 или в 20 раз. Затем в ячейках круглодонного планшета готовят по 100 мкл разведений препарата ИНФβ в нсобогащенной сывороткой среде RPMI-1640: 2000; 1000; 500; 250; 125; 63; 31; 16; 8; 4; 2; 1; 0,5; 0,25; 0 МЕ/мл; в ячейки с двумя приготовленными разведениями препарата ИФНβ параллельно вносят по 100 мкл разведенные в 10 или 20 раз сыворотки пациента и контрольной ЭТС. Инкубируют планшет 1 час в условиях CO2-инкубатора. Далее удаляют среду из культуральных планшетов с преинкубированными клетками ФЛЭЧ и в ячейки вносят по 100 мкл приготовленных разведений препарата с сывороткой пациента. Проводят инкубацию планшетов с клетками в течение 22-24 часов, далее в необогащенную сывороткой основу среды DMEM вносят вирус-индикатор ЕМС или VSV (вирус энцефаломиокардита мышей/вирус везикулярного стоматита, штамм «Индиана») в дозе составляющей 102±0,25 ТЦД50 в 0,1 мл. Проводят инкубирование в термостате 22-24 часа. Через сутки оценивают цитопатическое действие вируса в зависимости от наличия нейтрализующей ИНФβ активности сыворотки пациента по формуле: HAT (НЕ/мл)=А (МЕ/мл)×Z, где А (МЕ/мл) - максимальная нейтрализуемая активность препарата ИНФ-бета, при которой наблюдается цитодеструктивное действие вируса на монослой чувствительной культуры ФЛЭЧ, выраженная в международных единицах на 1 мл; Z - разведение сыворотки пациента. Использование данного способа позволяет оценку эффективности лечения препаратами у пациентов, в течение длительного времени подвергавшихся лечению препаратами ИФНβ путем количественного определения ИНФβ нейтрализующих антител. 1 з.п. ф-лы, 3 пр., 2 табл.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлено антитело, специфически связывающееся с PTK7 (протеинтирозинкиназа 7) человека, а также конъюгат указанного антитела с цитотоксическим агентом. Также предложены нуклеиновые кислоты, кодирующие указанное антитело, и включающие их экспрессионные векторы и клетки-хозяева. Кроме того, предложены способы применения указанного антитела, в том числе в составе конъюгата, для диагностики и лечения рака у субъекта. Изобретение обеспечивает эффективное нацеливание на опухолевые стволовые клетки, что может быть использовано для лечения пациентов, страдающих от широкого спектра злокачественных образований. 16 н. и 36 з.п. ф-лы, 42 ил., 5 табл., 16 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и найдет широкое применение в лечении пациенток с аменореей, обусловленной нервной анорексией. Сущность способа: пациенток на этапе редукции нервной анорексии с продолжающейся аменореей в сыворотке крови методом ИФА определяют уровень дофамина и ЛГ, и если уровень дофамина составляет 67,25 пг/мл и более, но менее 280 пг/мл, а показатели ЛГ 0,95 мМЕ/л и более, прогнозируют нормализацию менструальной функции. Применение данного способа прогнозирования восстановления менструальной функции позволит своевременно выбрать адекватную терапию для лечения данного заболевания, что поможет предотвратить развитие вторичного гипогонадизма, приводящего к гипоплазии матки и бесплодию в репродуктивном периоде. Способ позволяет объективизировать оценку эффективности лечения и своевременно прогнозировать дальнейшее течение заболевания. Способ имеет чувствительность – 93,9%, специфичность 93,9%, точность 88,2%. 3 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для иммуногистохимического выявления антигенов в препаратах органов продуктивных и непродуктивных животных длительного хранения в фиксаторах. Для этого проводят обработку поверхности предметного стекла для наклеивания срезов адгезивом на основе яичного белка и глицерина в соотношении 2:1. Затем проводят депарафинирование и регидратацию срезов. При этом после депарафинизации и регидратации срезы опускают на 5 мин в чистую емкость с дистиллированной водой. После чего срезы помещают в Н2О2 на 10-12 мин, после работы пароварки, содержащей цитратный буфер в течение 40-45 мин. При этом стекла из пароварки не вынимают в течение 20 мин после прекращения ее работы. Промывают срезы дистиллированной водой, затем помещают в буфер Твин 20х. Для образования сухого поля срезы промакивают одноразовыми бумажными полотенцами и делают вокруг срезов гидрофобный слой маркером. Далее наносят блокировочный раствор, в качестве которого используют 5% бычий сывороточный альбумин, на 10-12 мин. Наносят первичные антитела и ставят в термостат при 27°С на 24-26 ч во «влажной камере», через 14-15 ч смывают первичные антитела буфером Твин 20х в течение 5-7 мин. При этом срезы промакивают и наносят на них вторичные антитела. Ставят в термостат на 1-2 ч во «влажной камере» при температуре 27°С. Смывают вторичные антитела, при этом используют хромоген на безбиотиновой системе детекции. Окрашивают в течение 3 мин, смывают хромоген в трех порциях дистиллированной воды по 5-7 мин. Докрашивают срезы гематоксилином Майера 5-7 мин. Затем ополаскивают стекла в дистиллированной воде и опускают в щелочную воду на 10-15 с. Изобретение позволяет выявлять антигены в гистологических препаратах, после их длительного хранения в фиксаторах. 8 ил., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении сарком мягких тканей для прогнозирования возникновения рецидива. Для этого с помощью проточной цитофлюориметрии проводят определение процентного содержания T-regs лимфоцитов от количества CD3+CD4+клеток в гомогенатах образцов опухолевой ткани и в ткани линии резекции после хирургического удаления опухоли. При значении этого показателя выше 11,1 в ткани опухоли и 7,1 в ткани линии резекции прогнозируют развитие рецидива саркомы. Использование данного способа позволяет прогнозировать возникновение рецидива при лечении сарком мягких тканей путем определения процентного содержания лимфоцитарной субпопуляции T-regs, поскольку данная популяция клеток влияет на развитие противоопухолевых иммунных реакций. 2 пр., 1 табл.

Наверх