Способ получения кобамидного кофермента

 

нн 438272

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 06.01.72 (21) 1736060, 23-4 с присоединением заявки че (32) Приоритет

Опубликовано 15.12.75. Бюллетень Ме 46

Дата опубликования описания 05.05.76. (51) М, Кл. С 07d 55/62

Государственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 577.15.013.07 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. П. Рудакова, T А, Поспелова и А. М. Юркевич

Всесоюзный научно-исследовательский витаминный институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОБАМИДНОГО КОФЕРМЕНТА

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения соединения, которое находит широкое применение в биохимических исследованиях.

Известен способ получения кобамидного кофермента взаимодействием между витамином B»„rroлученного восстановлением цианкобаламина цинковой пылью в 10%-ном растворе хлористого аммония, и алкилирующим агентом — 2,3 -изопропилиден 5 -тозиладенозином. При этом получают 2,3 -изопропилиденкобамидный кофермент. Выход 79 /о.

Однако при этом способе происходит частичное разрушение кобампдного кофермента в процессе снятия 2,3 -изопропилиденовой защиты, что влечет за собой снижение выхода целевого продукта.

С целью повышения выхода целевого продукта используют в качестве алкилирующего агента 2,3 -фенилборонат 5 -тозиладенозина, что исключает стадию снятия иис-гликольной защиты, тактакак в процессе реакции происходит одновременное отщепление, 2,3 -фенилборной защитной группировки.

Предлагаемый способ заключается в том, что Со (1)-кобаламин, полученный восстановлением цианкобаламина или оксикобаламина боргидридом натрия, подвергают взаимодействию с алкилирующим агентом — 2,3 -фенилборонатом 5 -тозиладенозина, 2

Обычно процесс восстановления циан- или оксикооаламина проводят в водно-спиртовом растворе в атмосфере водорода, после чего к реакционной массе, как правило, добавляют

5 спиртовой раствор 2,3 -,фенилбороната 5 -тозиладенозина.

Выделение целевого продукта проводят, например, экстракцией органическим растворителем (фенолом) и хроматографией на колон10 ке с карбоксиметилцеллюлозой, Выход до 72 /о.

П р и м ер. Растворяют 200 мг циан- или оксикобаламина в смеси этиловый спирт — вода (1: 1) и через систему пропускают ток во15 дорода. Затем к раствору прибавляют 140 мг спиртового раствора боргидрида натрия, перемешивают в токе водорода 30 мин и к реакционному раствору прибавляют раствор

150 мг 2,3 -фенилборонат 5 -тозиладенозина и

20 продолжают перемешивание в течение часа.

Далее реакционный раствор концентрируют в вакууме, добавляют воду и доводят рН до

5,0. Экстрагируют раствор смесью фенолхлороформ (1: 1), к полученному экстракту

25 добавляют 5 объемов смеси изопропиловый спирт — четыреххлористый углерод (3: 2) и извлекают кобамидный кофермент водой. Затем водный раствор наносят на колонку с КМцеллюлозой в Н+-форме. Водой элюируют

30 цнанкобаламин, после элюции всего цианко438272

Составитель В. Жестков

Техред Е. Подурушина

Редактор Н. Тимофеева

Корректор Л. Котова

Заказ 554/2 Изд. № 2106 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 баламина подключают 0,2% -ную уксусную кислоту и элюируют кобамидный кофермент и оксикобаламин. Из элюата выделяют ДБКкофермент лиофилизацией. Получат 0,124 r кобамидного кофермента (выход 72% на вступивший в реакцию циан- или оксикобаламин).

Предмет изобретения

Способ получения кобамидного кофермента восстановлением цианкобаламина или оксикобаламина с последущим алкилированием полученного при этом производного кобаламина и выделением продуктов известным способом, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве восстановителя используют боргидрид натрия, а в качестве алкилирующего агента — 2,3 -фенилборонат 5 -тозиладенозина.