Способ получения производных тирозина

 

<п1 450399

Оn иСАН ие изоьеитения

Союз Советскик

Социалистических

Республик (61) Зависимый от патента (22) Заявлено 20,07.72 (21) 1812967/23-4 (32) Приоритет 22.07.71 (31) P 2136675.6

03.01.72 P 2200041.5

01.04.72 P 2216097.0 (33) ФРГ

Опубликовано 15.11.74. Бюллетень ¹ 42

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 547.587.42.07 (088.8) по делам изобретений и открытий

Дата опубликования описания 29.05.75 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Эрнст-Отто Рент, Курт Шромм и Антон Ментруп (ФРГ) Иностранная фирма

«К. Х. Берингер Зон» (ФРГ) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВ

Ь-ТИРОЗИНА

8i

t ; > 11- . 1 Oг1

С вЂ” Ь Н вЂ” ll где R и R1 — имеют указанные значения, 10 подвергают взаимодействию с анилином или его производным в буферном растворе при рН 5 — 7, в присутствии протеаз с последующим гидролизом минеральной кислотой замешенных 1 -N-бензоил-м- (или пара) -тирозил15 анилидов и выделением целевого продукта известными методами.

В качестве протеаз применяют, преимущественно такие растительные протеазы как бромелин, фицин или папани, а также бактери20 альные или грибковые.

Получение апилида общей формулы 1 oc) ществляют при значении рН 5 — 7, предпочтительно при рН 5,6 — 6,2. Нужное значение рН устанавливают с помощью буферного раство25 ра, например цитратного или фосфатного.

Вместо анилина можно применять и его производные, содержащие низшие алкильныс, Изобретение относится к получению производных 1 -тирозина, обладающих физиологической активностью, которые могут найти применение в качестве лекарственных препаратов.

Получаемые по предлагаемому способу соединения имеют общую формулу 1 где R — водород, окси- или низшая алкоксигруппа и

Ri — окси- или низшая алкоксигруппа, причем по меньшей мере один из.радикалов R u

R< означает оксигруппу.

Известен способ получения соединений 1 выделением их из рацемата с помощью оптически активной кислоты.

Однако по известному способу целевой продукт имеет недостаточно высокую степень чистоты.

По предлагаемому способу соединения общей формулы (51) M. Кл. С 07с 101/04

450ÇÝ9 алкокси- или алкилмеркаптогруппы, галогенили сульфгидрильные группы у атомов углерода.

Гидролиз полученных анилид: в осуществляют преимущественно разбавленными кислотами при нагревании, например 10 /о-ной соляной кислотой при температуре обратного холодильника. Гидролиз можно проводить также сильными кислотами, например концентрированной бромистоводородной кислотой, особенно если одновременно должно быть осуществлено расщепление имеющихся эфирных связей.

П р и и е р 1. 1 -N-бензоил-3-метокситирозиланилид.

31,5 г (0,1 моля) D,1 -N-бензоил-3-метокситирозина при нагревании растворяют в 200 мл

0,05 н. раствора едкого патра. Добавляют

150 мл 2 М раствора ацетата натрия и затем фильтруют. К раствору добавляют сначала

300 мл 0,1 н, цитратного буфера (рН 5,0), затем 2 г хлорида цистеина и 18 мл дистиллированного анилина. Затем добавляют раствор примерно из 3 г папаина в 300 мл 0,05 н. цитратного буфера и добавлением ледяной уксусной кислоты или 1 н. раствора едкого патра устанавливают значение рН 5,80. По истечении короткого времени начинает осаждаться

1 -анилид. По истечении примерно 48 ч его отсасывают, промывают 300 мл иоды и сушат.

Анилид может быть перекристаллизован из метанола/воды.

Выход количественный.

Т. пл. 208,0 — 208,5 С.

Вычислено, /О. С 70,75; Н 5,68; N 7,18.

С Н К О4 (390,45) .

Найдено, /О. С 70,58; Н 5,70; N 7,00.

Удельное вращение: (а) о — — +40,0 +.0,15 (конц.=1,000 в метаноле). Оставшийся после отсасывания анилида маточный раствор нагревают до 80 С и после добавления 100 мл метанола, концентрированной соляной кислотой значение рН доводят до 2,0. Охлаждают, отсасывают и сушат. Полученный D-1 1-бензоил-3-метокситирозин можно затем рацемировать и снова применять как исходный продукт.

Омыление в L-З-окситирозин.

9,75 г (25 ммолей) 1 -N-бензоил-3-метокситирозиланилида с 50 мл 48 /о-ной бромистоводородной кислоты в течение 7 ч кипятят с обратным холодильником. Охлаждают и отсасывают выделившуюся бензойную кислоту.

Дополнительно промывают не очень холодной

49 /о-ной бромистоводородной кислотой. Слегка окрашенный в желто-коричневый цвет раствор в вакууме сгущают. После того как раствор упарен досуха, добавляют 50 мл дистиллированной воды и повторно упаривают досуха. Остаток растворяют в 500 мл метанола и концентрированным раствором аммиака устанавливают значение рН 6,0, причем осаждается 1 -З-окситирозин, который оставляют стоять в течение ночи в холодильном шкафу, отса5

65 сывают и сушат при температуре не выше

50 С. Выход 5,0 r, Соединение при температуре кипения рас. творяют в 180 мл воды, фильтруют над углем и под азотом охлаждают сначала до 20 С. До начинающейся кристаллизации оставляют стоять при этой температуре, затем ставят в течение ночи в холодильный шкаф. На следующий день отсасывают и сушат при температуре не выше 50 С. Выход 3,4 r (69,2О/о теории).

Маточный раствор содержит еще 0,9 г 1-3окситирозина. Общий выход 4,3 г (87,4 /о теории), т. пл. (290 С, разл.), удельное вращение (а) р = — 12,15+-0,13 (конц.=4,000 в 1 н. соляной KHcJloTe).

Соответствующий результат получают, если в качестве протеазы применяют бромелин или фицин.

Омыление в 1 -З-метокситирозин.

9,75 г (25 ммолей) L N-бензоил-3-метокситирозиланилида, размешивая с 100 мл 10 /Оной соляной кислоты, в течение 16 ч кипятят с обратным холодильником. Затем охлаждают и несколько раз извлекают эфиром. Водную фазу фильтруют над углем и в вакууме дистиллируют досуха. Остаток растворяют в ацетоне и диэтиламином устанавливают значение рН 6. До начинающейся кристаллизации оставляют стоять сначала при комнатной температуре, а затем в течение ночи в холоди и ном шкафу. Отсасывают и сушат. Затем перекристаллизовывают из воды. Выход 4,1 г (71,6 /о теории).

При высушивании при 40 С получают 1-3метокситирозин в виде моногидрата с т. пл.

241 †2 С. (а) и — 5,83 (конц.= 1,0 в 1 н.

НС1) .

Пример 2. 1 -N-бензоил-4-метокси-м-тирозиланилид.

31,5 г (0,1 моля) 1 -N-бензоил-4-метокситирозина, нагревая, растворяют в 200 мл 0,5 н. раствора едкого натра. Добавляют 150 мл

2 М раствора ацетата натрия и затем фильтруют. К прозрачному раствору, размешивая, добавляют сначала 300 мл 0,1 и. цитратного буфера (рН 5,0), затем 2 г цистеинхлорида и

18 мл дистиллированного анилина. Затем добавляют раствор примерно из 3 г папаина в

300 мл 0,05 н. цитратного буфера и добавлением ледяной уксусной кислоты или 1 н. раствора едкого патра устанавливают значение рН 5,80.

При размешивании при температуре 35 С реакция идет в течение 48 ч, причем после приблизительно 8,24 и 32 ч добавлением ледяной уксусной кислоты снова устанавливают значение рН 5,80. После 48 ч отсасывают, тщательно промывают водой и сушат. Анилид перекристаллизовывают из метанола/D ..äû.

Выход 90 — 95 теории.

Т. пл. 161 — 162 С.

Удельное вращение (а) р =+43,6 (KQHIJ,.=

=1,000 в СНЗОН). Оставшийся после отсасы4бОЗЭЭ вания анилида маточный раствор нагревают до 80 С и после добавления 200 мл метанола, концентрированной соляной кислотой устанавливают значение рН 2,0. Охлаждают, отсасывают и сушат. Полученный таким образом

D-мета-N-бензоил-4-метокситирозин может быть рацемирован обычным методом и снова применен в качестве исходного продукта.

Пример 3. 1 -N-бензоил-м-тирозиланилид.

28,5 r (0,1 моля) D, 1 -N-бензоил-м-тирозина при нагревании р".;твор.-. т в 2. ." "л 0,5 и. раствора едкого натра. Добавляют, 0 мл 2Ы раствора ацетата натрия и затем фильтруют, К прозрачному раствору, размешивая, добавляют сначала 300 мл 0,1 н. цитратного буфера (рН 5,0), затем 2 г хлорида цистеина и

18 мл дистиллированного анилина. Затем добавляют раствор примерно 3 г папаина в

300 мл 0,05 н. цитратного буфера и посредством до. авления ледяной уксусной кислоты или 1 н. раствора едкого натра устанавливаl0T зпачс| ию рН 5,80. При температуре 35 и, размсшивая, дают реагировать в течение 48ч, причем после 8, 24 и 32 ч посредством добавления ледяной уксусной кислоты снова устанавливают значение рН 5,80. После 48 ч отсасывают, тщательно промывают водой и сушат. Анилид может быть перекристаллизован из водного метанола.

Выход 80 — 90% теор ии.

Т. пл. 218 — 219 С.

Удельное вращение (а) o — — +44,0 (конц. =

20 о

=0,50 в СН20Н). Оставшийся после отсасывания анилида маточ,ый раствор нагревают до 80 С и после добавления 200 мл метанола, концентрированной соляной кислотой устанавливают значение рН 2,0. Охлаждают, отсасывают и сушат. Полученный таким образом D-N-бензоил-м-тирозин можно рацемировать обычным методом и снова применять как исходный продукт.

Пример 4. 1 -м-N-бензоил-О-метил-м-тиро3! IЛ "НИЛ ИД.

29,9 г (0,1 моля) 1., 1-N-бензоил-О-метил-мтирозина, нагревая, растворяют в 200 мл

0,5 н. раствора едкого натра. Добавляют

150 мл 2 М раствора ацетата натрия и затем фильтруют. К прозрачному раствору, размешивая, добавля ст сначала 300 мл 0,1 н. цитратногс буфера (рН 5,0), затем 2 г хлорида цистеина и 18 мл дистиллированного анилина.

Затем добавляют раствор примерно 3 г папаина в 300 мл 0,05 н. цитратного буфера и добавлением ледяной уксусной кислоты или J. н. раствором едкого натра устанавливают значение рН 5,80. При температуре 35 С и размешивапии реакция идет в течение 48 ч, причем после = 8,24 и 32 ч добавлением ледяной уксусной кислотf)1 cII, âà устанавливают значение рН 5,80. Псс. .е 48 ч отсасывают, хорошо промывают водой и сушат. Анилид может быть перекристаллизован из водного метанола.

Выход 90 — 95% теории.

Т. пл. 178 †1 С.

Удельное вращение (а) с =41,8 (конц

=0,5 в СНзОН)

Оставшийся после отсасывания анилида маточный раствор нагревают до 80 С и после добавления 200 мл метанола, вводят концентрированную соляную кислоту до установления значения рН 2,0. Охлаждают, отсасывают и сушат. Полученный таким образом D-N-бепзоил-О-метил-м-тирозин можно рацемировать обычным методом и снова применять как исходный продукт.

1 -4-окси-л -тирозин.

9,75 г (25 ммолей) 1 -N-бензоил-4-метоксил.-тпрозиланилида с 50 мл 48%-ной бромистовсдгродпой кислотой в течение 7 ч кипятят с обратным холодильником. Охлаждают и отсасывают выделившуюся бензойную кислоту.

Дополнительно промывают не очень холодной

- 8 „--ной бромистовсдорсдной кислотой. Слегка окрашенный в желтый цв г раствор в вакууме сгущают досуха. Остаток растворяют в

50:,;л метанола и смешивают - 5 мл окиси пропилена. Выдерживают гримерно в течение одного часа при 50 С, пока не будет достигнуто зH Iчение рН 6,0. Затем ос;:а зляют стоять в течение ночи в холодильном шкафу, отсасывают и пере:. гпсталлизовывают I:", воды без доступа воздуха. Охлаждают и до начала криста.:.,-:изации оставляют стоять сначала при

I с,кцатной температуре, а затем в течение ночи в холодильном шкафу. На следующий день стсасывают и сушат при температуре не выше 50 С.

Выход 3,4 r, 69,0% теории.

Т. пл. 290 С (разл.), Удельное вращение (а) D = — 12,15 (конц.=4,000 в 1 н. НС1 (Вещество идентично полученному по примеру 2 L-3-окситирозину).

1 -4-метокси-м-тирозин.

9,75 г 1 -Х-бензоил-4-метокси-л -тирозиланилида и 100 мл 2 н. соляной кислоты в течение

24 ч кипятят с обратным холодильником. Охлаждают, 3 раза экстрагируют метиленхлоридом и отфильтрованную над углем водную ф;зу упаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в 50 мл спирта. Добавляют 5 мл окиси пропилена и выдерживают 1 ч при температуре 50 С, пока не будет достигнуто значение рН 6,0.

Оставляют стоять в течение ночи в холодильном шкафу, отсасывают и перекристаллизовывают из воды. Водный раствор на ночь ставят в холодильный шкаф, отсасывают и сушат при 70 С в камерной сушилке с циркуляцией воздуха.. Получают 61%-ный выход

1-4-метокси-м-тиро"-;II:..à в виде мопсгидрата с т. пл. =251 — 253 С.

Удельное вращение (ж) с = — 8,5 (коцц==-2,000 в 1 н. НС1).

1.-М-ТН003НН.

9,0 r 1 - N - бензсил - м- тирозиланилида !J

100 мл соляной кислоты 1: 1 или 9,35 г 1.-Nбензоил-О-метил-м-тирозиланилида и 50 м"

450399

Предмет изобретения г1

Составитель П. Сидякин

Техред О. Гуменюк

Редактор Л. Емельянова

Корректор И. Учзк:-гиа

Заказ 829/10 Изд. № 1116 Тираж 506 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 7Ê-35, Раушская наб., д, 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

48%-ной бромистоводородной кислоты в течение 7 ч кипятят с обратным холодильником, Охлаждают, разбавляют водой и три раза экстрагируют метиленхлоридом. Затем отфильтрованную над углем водную фазу упарившот в вакууме досуха. Остаток растворяют в 50 мл метанола. Добавляют 5 мл окиси пропилена и выдерживают 1 ч при 50 С до установления значения рН 6,0. Оставляют стоять в течение ночи в холодильном шкафу, отсасывают и перекристаллизовывают из воды. Получают

1 -м-тирозин (т. пл. 296 — 298 С) с 80% -ным выходом.

20 о

Удельное вращение (а1о = — 9,2 (конц=

= 2,000 в 1 н. H C 1) .

1. Способ получения производных 1 -тирозина общей формулы 1 где R — водород, окси- или низшая алкоксигруппа, Ri — окси- или низшая алкоксигруппа, причем, по меньшей мере один из радикалов

R и R означает оксигруппу, от л и ч а ю щи йся тем, что, с целью повышения степени чистоты целевого продукта, соединение общей формулы

Б1. где R и R1 — имеют указанные значения, 15 подвергают взаимодействию с анилином или его производным в буферном растворе при рН 5 — 7 в присутствии протеаз и полученный при этом замещенный анилид подвергают гидролизу минеральной кислотой с последующим

20 выделением целевого продукта в свободном виде известным способом.

2. Способ по II. 1, отличающийся тем, что в качестве протеаз используют бромелин, фицин или папани.

25 Приоритет по признакам:

22.07.71 при R — водород;

R< — низшая алкоксигруппа.

03.01.72 при R — оксигруппа, R< — оксигруппа.

30 01.04.72 при R — низшая алкоксигруппа.