Способ получения свободных пептидов

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А9709.СКОМУ СВИ Й ТЕЛЬ СНУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 513O26 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено2 2.07.74 (21)2047811 /23»4 (51) М. Кл.

С 07 С 103/52 с присоединением заявки №

Гасударатаанный камнтет

Сааата Мнннатраа СССР па делам нзааратаннй н аткрытнй (23) Приоритет (43) Опублнковано05.05.76.Бюллетень №17 (5Ç) УДК 547.964.4.07 (088.8) (45) Дата опубликования описания 11,05..76 (72) АвтоРы М. И. Титов, В. Н, Калихевнч и Ж, Д. Беспалова изобретения

Ленинградский ордена Ленина и. ордена Трудового Красного Знамени государственный университет нм. А. А. Жданова (?1) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СВОБОДНЫХ ПЕПТИДОВ

Изобретение относятся к способу полу- чення свободных пептидов путем кислотного расшеплення метнловых нлн этнловых эфиров аминокислот и пептидов.

Известен способ получения свободных пептидов взаимодействием метнловых нлн этиловых эфиров карбобензоксн-пептидов с бромистым водородом в уксусной кислоте.

Однако известный способ сложен, длителен и приводит к получению ннзкомолекулярных пептндов с довольно низким выходом.

С целью увеличения выхода целевых продуктов, упрошення процесса и расширения сырьевой базы предлагается проводить реакцию в растворе бромнстого водорода с добавлением Ф-8 об,% воды.

Строение продуктов кислотного расщепления доказано аналитическими данными, методом хроматография (электрофореза) н встречным синтезом. Все использованные амннокислоты имеют T- -конфигурацию.

Пример 1, Гнсгнднл-лейцин.

3,7 г метилового эфира карбобензокси-гистнднл лейцина растворяют в 25 мл 4н.

2 раствора бромнстого водорода в уксусной кислоте, добавляют 1,5 мл воды, выдерживают два дня прн комнатной темперагуре, разбавляю1 эфиром, отфильтровывают осадок, обрабатывают его нонообменной смолой в ОН-форме и получают 2,0 г (83%2 прсщукта.

Найдено, %: М 53,3; Н 7,7; и 20,7, С!.Р30 4 3

Вычислено,%: С 53,7; Н 7,5; N20,9.

Амннокнслотный состав: гистндин 0,95 (12 лейцнн 1,00 (1), П р н м е р 2. Сернл лейцнн.

Из 1,8 г метилового эфира карбобензокснсерилпейцнна, 18 мл 4 н, раствора бромнстого водорода в уксусной кислоте и

1,4 мл воды, как в примере 1, получают

0,85 г (92%) продукта.

Найдено,%: С 49,3; Н 8,+; Ь 12,5.

С,Н1ам, о4.

Вычислено,Ъ; С 49,5; Н 8,3; И 12,8.

Аминокнслотный состав: серии 0,92(1), 25 лейцин 1,00 (1).

513026

ЗЬ

t бО, 3

П р и и е р 3, Гироэил пейцил-аалилЙ -ацетамидометил-аистеинилглицин.

1,7 г метялового эфире карбобензокси-Обенэилтироэил-лейцил-валил- 5 -ацетамидометил-цистеииил-глицина растворяют в 4,7 мл 4 и. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте, добавляют 0,31 мл воды, выдерживают два дня при комнатной температуре, разбавляют эфиром, отфильт ровывают осадок, растворяют в воде, нейтрализуют 25%ным аммиаком, отфильтровывают осадок, сушат и получают 0,98 г (81%) продукта.

Найдено, %: С 53,8; Н 7,3; N 13,4.

C

Вычислено,%: С 54,0; H 7,05; М 13,5, Аминокислотный состав: тироэин 0,93 (1), лейцин 1,00 (1), валин 1,01 (1), цистеин 0,80 (l), глицин 0,98. (1).

Пример 4. Бис-(тирозил-лейцнл-валил)-цистинил-бис-глицин, К раствору 5,0 r метилового афира бис-(карбобенэокси-0-бензил-тироэил-лейцнл-валил)-цистинил-бис-глицина в 40 мл

4 н. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте добавляют 2,5 мл воды и проводят те же операции, что и в примере 3

Получают 2,9 r (84%) продукта, Аминокислотный состав; тироэнн 0,95 (1), лейцин 1,00 (1), валин 0,97 (1), цистеин 0,91 (1), глицин 1,02 (1).

Пример 5. Бис-(аспарагинил-глутамнннл-гистиднл-лейцнл)-цистинил-бис-глнцин, К раствору 2,5 г бис-(карбобензоксиаспарагинил-глутаминил-гистидил-лейцил)-цнстинил-бис-глицина диметилового эфира в 8 мл 4 н. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте добавляют 0,5 мл воды, выдерживают 3 дня при комнатной температуре, разбавляют эфиром, отфильтрс вывают кристаллы, растворяют их в воде, обрабатывают раствор ионообмениой смолой ИРА-410 в ОН-форме, упаривают, отфильтровывают кристаллы, промывают их эфиром, сушат и получают 1,81 r (90%) продукта, Амннокислотный состав: аспарагиновая кислота 0,97 {1), глутамнновая кислота 1,00 (1), гнстидин 1,05 (1), лейцин 0,99 (1), цистнн 0,90 (1), глицин 1,10 (1), Пример 6, А-цепь инсулина человека.

К раствору 3,5 r метилового афнра карбобензокси-0-бензил-тнроэил-глутамнннл -лейцнл- ) -трет-бутил-глутамил-аспарагинил-тироэил- S -ацетамидометилцистеинил-аспарагнна в 10 мл 4,9 н, раствора бромистого водорода в уксусной кислоте добавляют 0,5 мл воды, выдерживают три дня при комнатной темпера4 туре, разбавляют эфиром, отфильтровывают осадок, растворяют его в воде, сФрабатьпзают ионообменной смолой в ОН-форме w получают 2,25 г (90%) тирозип5>-глутаминил-лейцил-глутамил-аспарагиннл«тироэип- S --ацетамидометил-цистеинил-аспарагина.

Аминокислый состав: аспарагиновая, кислота 1,96 (2), глутаминовая кислота ц 2,00 (2), лейцин 1,00 (1), тнрозин 1,89 (2), цистин 0,93 (1).

Карбобензокси-иэолейцнл- 5 -ацетами дометил-цистеинил-серил-лейцил-тироэил16 -глутаминил-лейцил-глутамил-аспарагинилтирозил- 8 -ацетамидометил-BHGTeHHHJl-аспарагин получают иэ 1,98 г вещества, полученного выше, и 0,98 г гидразида карбобенэокси-изолейцил- S -ацетамидометил-цистеинил-сернл-лейцина азидным методом, Выход 1,6 r (62%), т.пл. выше

300оС, fd1 31о({." -, днметилсульфоксид).

Найдено,%:,С 53,00; Н 6,5; Й 13,5.

{ 77нш 17 Ew В

Вычислено,%: С 53,2; Н 6,4; Й 13,7 °

Аминокислотный состав: аспарагиновая кислота 1,86 (2), глутаминовая кислота

2,00 (2), сернн 0,9 (1), цистнн 0,93 (1 ), изолейцин О, 94 (1 ), лейцин 2, 00

{2) „тирозин 1,70 (2).

Из 1,5 г синтезированного продукта и 1,0 г гндразида карбобензокси-глицил- . изолейцилвалил- Г -трет-бутил-глутамилглутаминнл-цнкло-цистинил-треонил-серина азидным методом получают защищенный пептид, который обрабатывают последовательно йодом в диметнлформамиде и бромистым водородом в трифторуксусной кислоте, подвергают окислительному сульфитолизу, фильтруют через колонку с Сефадексом ДЭАЭ н получают 1,95 г (89%) тетрасульфоната А-цепи инсулина человека, ГФ3 -92о {C=O,1, вода).

Амннокислотный состав: аспарагиновая кислота 1,92 (2), треонин 0,93 (1), серин 1,81 (2), глутаминовая кислота 4,00 (4), глицин 1,00 (1), цистин 1,92 (2), валин 0,96 (1), изолейцин 1,91 (2), лейцин 2,03 (2), тирозин 1,81 (2}, Полученный продукт — индивидуальное вещество по данным электрофореза, при атом его подвижность точно совпадает с

55 подвижностью тетрасульфоната А-пепи, выделенного из природного инсулина.

Ф йрмула изобретения

Способ получения свободных пептидЪв взаимодействием метиловых ипи атипйнь х

513026

Составитель В. Волкова

Редактор T. Шарганова Техред 0. Луговая Корректор Л. I ó <. из

Заказ 275/7 Тираж 576 Подписное

Ш1ИИ 11 Государственного комитета Совет» Министров СССР пс делам изобретений и открытий

113О35, Москва, Ж-35, Рпушская иаб., д. 4/5 1 илиад I IIII I 11.л -нт", г, Ужгород, ул. Гагарин», 01 эфиров карбобензокси-пептидов с бромистым водородом в уксусной кислоте, о т— личаюшийся тем,что,сцелью упрощения процесса, увеличения выхода целевого продукта и расщиреии,. сыра, ОИ базы, реакцию проводят в раство1 -. ор >.иистого водорода с добавлением 4-ь об, воды.