Способ получения производных 7-ацетамидо3- тиадиазолилтиометил-3-цефем-4-карбоновой кислоты или их эфиров или их солей
(i 11 683627
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
Союз Советских
Социалистических
Республик (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 16.12.76 (21) 2429154/23-04 (23) Приоритет — (32) 16.12,75 (31) 30333 А/75 (33) Италия (43) Опубликовано 30.08.79. Бюллетень № 32 (45) Дата опубликования описания 30.08.79 (51) М. К,.е
С 07 D 501/06
С 07 D 501/60//
//А 61 К 31/545
Государственный комитет (53) УДК 547.869.1. .07 (088.8) ло делам изобретений и OTKpIITHH (72) Авторы изобретения
Иностранцы
Джулиано Наннини, Джованни Биасоли, Дино Северино, Джузеппе Маинарди, Джизелла Монти и Альберта Бианчи (Италия) Иностранная фирма
«Карло Эрба С. п. А.> (Италия) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ
7-АЦЕТАМИДО-3-ТИАДИАЗОЛ ИЛТИОМЕТИЛ-3-ЦЕФЕМ4-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ, ИЛИ ИХ ЭФИРОВ, ИЛИ ИХ СОЛЕЙ
1
Изобретение относится к способу получения новых соединений — производных 7ацетамидо - 3-цефем-3 - тиадиазолилтиометил-4-карбоновой кислоты общей формулы 1
S к „н с т(Н 1т — Н эт
СООН где R — фенил, незамещенный или монозамещенный в параположении атомом хлора, метилсульфонил-, окси-, метильной, метокси-, сульфо- или цианогруппой;
R2 — атом водорода, окси-, карбокси-, метокси-, формилокси-, сульфо- или аминогруппа, при условии, когда R> — монозамещенный фенил, Кз — не является аминогруппой, или R> — фурил-2 или пиридил-4 и
R> — оксигруппа, или R> — тиенил-2 и R — атом водорода, окси-, карбокси- или сульфогруппа, или R> — тетразолил-1, 1,2,3-триазолил-1, 3,5-дихлор-1,4-дигидро-4-оксопиридил-1, 5-циано-1,2,3-триазолил-1, р-цианоэтилентиогруппа, Р-карбоксамидоэтилентиогруппа и R2 — атом водорода;
Кз — карбоксиметил, кар боксиэтил, карбоксиэтилен, карбоксиэтинил, сульфометил, сульфоэтилен, цианометил илн оксиэтил, или их эфиров, илп их солей.
Эти соединения обладают физиологически активными свойствами.
Известные производные 7-ацетамидо-3тиадиазолилтиометил-3 - цефем-4-карбоновой кислоты, обладающие физиологически
10 активными свойствами, в частности получают ацилированием 7-амино-3-тиадиазолилтиометил-3-цефем-4-карбоновой кислоты
Я.
Целью изобретения является расширение (5 арсенала средств воздействия на живой организм.
Эта цель достигается основанным на известной реакции способом, который заключается в том, что соединение общей форму20 лы П г
S т N
СН вЂ” ь- Pl — S — E з
С ООН где R3 имеет указанные выше значения, 683627
Л
HSS
65 подвергают взаимодействию с кислотой общей формулы Ш
R,— СН вЂ” СООН !
Ra где R> и R2 имеют указанные выше значения, или с ее реакционноспособным производным при температуре от — 30 до +30 С в среде растворителя и выделяют целевой продукт в виде свободной кислоты или ее эфира, или ее соли.
Реакционноспособные производные соединения формулы II могут быть использованы в виде силиловых эфиров, аминных солей или солей металлов. Реакционноспособные производные соединения формулы III могут быть галоидангидридами, ангидридами, амидами, азидами, реакционноспособными сложными эфирами или солями таковых, как соли, образованные щелочными, щелочноземельными металлами, аммонием или органическим основанием.
Взаимодействие между соединением формулы II или его реакционноспособными производными и соединением формулы Ш или его реакционноспособными производными можно осуществлять при комнатной температуре или при охлаждении, в среде подходящего растворителя, такого как ацетон, диоксан, тетрагидрофуран, ацетонитрил, хлороформ, метиленхлорид, диметилформамид. Взаимодействие можно проводить в присутствии основания, такого как бикарбонат натрия, бикарбонат калия или триалкиламин.
Если соединение формулы Ш взаимодействует с соединением формулы II в форме свободной кислоты или соли, то желательно реакцию осуществлять в присутствии агента конденсации, такого как дициклогексилкарбодиимид.
Соединения формулы 1 можно переводить в форму соли, или наоборот, его соли в свободные основания. Исходя из этого соединения формулы I или его соль можно переводить в другое соединение формулы 1 или в его соль. Таким превращением может быть превращение соединения 1 в сложный эфир или же его соль, например этерификацию соединения формулы 1 проводят взаимодействием соединения формулы I, где группа СООН присутствует как таковая или в форме соли, например натриевой, калиевой, кальциевой, или соли триэтиламмония, с подходящими галоидными соединениями в среде органического растворителя, например ацетона, хлороформа, тетрагидрофурана, метиленхлорида, димстилформамида, диметилсульфоксида, или в смеси воды и органического растворителя, такого как диоксан или ацетон, при температуре реакции от — 20 до +80 С.
Кроме того, соединение формулы I, со"0
25 ,>О
00 держащее хотя бы одну этерифицированную карбоксильную группу, может быть омылено, например, с применением неорганической кислоты типа соляной, или неорганического основания типа гидроокиси натрия или калия.
Соединения формулы III могут быть получены, например, взаимодействием 7-аминоцефалоспорановой кислоты или ее соли с соединением формулы IV
Пример 1. К охлажденному до 0 С раствору 2,1 r 7-амино-3-(2-(5-карбоксиметилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) -3-цефем4-карбоновой кислоты и NaHCO3 (2,94 г) в смеси ацетона (30 мл) и воды (60 мл) при перемешивании прибавляют раствор хлорангидрида (R) -а-формилоксифенилуксусной кислоты (2 г) в ацетоне (40 мл) . Реакционную смесь перемешивают при 0 С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре до утра. Под разряжением отгоняют ацетон, водный раствор обесцвечивают при помощи древесного угля, разбавляют водой, извлекают этилацетатом и затем подкисляют 8%-ной НС1 до рН 1 — 2.
Органический слой промывают водой, высушивают над Na2SO4, выпаривают досуха.
Остаток растворяют в эфире и фильтруют, получая 7- ((К) -миндальамидо) -3- (2- (5-карбоксиметилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)-3-цефем-4-карбоновую кислоту (1,94 r, выход 70% ); т. пл. 95 — 100 С (разложение) .
Найдено, %: С 43,51; Н 3,37; N 9,73;
S 22,65.
С20Н1ВИ407$4.
Вычислено, %: С 43,33; Н 3,27; N 10,10;
S 23,11.
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4)
7,„,„, 260 MMê, Е С„219,7; е 12185.
Хроматография в тонком слое (СНС1 .
: МеОН: НСООН 160: 40: 20) R< 0,57.
ИК-спектр (КВг): (С= О) Р-лактам
1780 см —, ч (С вЂ” N) +б (N — Н) вторамид
1550 см — .
7-Амино-3 - (2- (5-карбоксиметилтио-1,3,4тиадиазолол) -тиометил) -3-цефем - 4-карбоновую кислоту, применяемую в качестве исходного соединения, получают следующим образом.
К нагретому до 45 С раствору 7-аминоцефалоспорановой кислоты (2,72 г) и
NaHCO (1,68 г) в смеси воды (45 мл) и ацетона (20 мл) прибавляют при перемешивании раствор 2-меркапто-5-карбоксиметилтио-1,3,4-тиадиазола (3,12 r) и NaHCO3 (1,26 г) в воде (25 мл) и ацетоне (15 мл) .
Смесь нагревают с дефлегмацией 4 ч, охлаждают и подкисляют 8% -ной HCI до
683627
65 рН 4 и затем отфильтровывают. Твердый продукт собирают и промывают один раз холодной водой и затем ацетоном, высушивают, получая таким образом 7-амино-3-(2(5-карбоксиметилтио - 1,3,4 - тиадиазолил)— тиометил) -3-цефем-4-карбоновую кислоту (3,15 г); выход 75 /0, т. пл. 198 — 200 С (разложение).
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4):
Х 277 ммк; ЕЯм 292,7; 8 12310.
2-Меркапто-5 - карбоксиметилтио - 1,3,4тиадиазол получают следующим образом.
К раствору, содержащему iVa (0,23 r) с
СН80Н (30 мл), прибавляют 2,5-димеркаптотиадиазола (1,5 г), затем смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин.
Прибавляют по каплям раствор хлоруксусной кислоты (0,945 г) в СН80Н (10 мл), смесь перемешивают 12 ч при комнатной температуре, после чего под разряжением отгоняют метанол, остаток переносят в воду и подкисляют фосфорной кислотой. Извлекают этилацетатом, высушивают органический слой над Ма2$04 и выпаривают досуха. После перекристаллизации из смеси этилацетат — петролейный эфир получают 2-меркапто-5-карбоксиметилтио-1,3,4тиадиазол; т. пл. 164 — 160 С; выход 800/0.
Вычислено, /0. С 23,07; Н 1,93; N 13,45;
S 46,18.
C4H4N202S, Найдено, /0. С 23,22; Н 2,11; N 13,27;
$45,75.
Аналогичным образом получают следующие соединения:
7- ((S) ) — Миндальамидо-3- (2- (5-карбоксиметилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) -3цефем-4-карбоновая кислота.
Вычислено, /0. С 43,33; Н 3,27; N 10,10;
$23,11.
С20Н18М407$4.
Найдено, /0. С 43,47; Н 3,38; N 3,82;
S 22,83.
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4): лм,, 275 ммк; E1 218,9; в 12100.
Тонкослойная хроматография (CHC18 ..
МеОН: НСООН 160:20: 20) Rg 0,30.
7- ((4-Метил) - (R) - миндальамидо) -3-(2(5-карбоксиметилтио - 1,3,4 - тиадиазолил)тиометил) -3-цефем-4-карбоновая кислота.
Вычислено, 0/0. .С 44,35; Н 3,54; N 9,85;
S 22,55.
С21Н20М407$4.
Найдено, : С 44,63; Н 3,80; N 9,35;
S 22,10.
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4):
1 ОО6
4„„, 273 ммк; Е1, „229.
7- ((4-Метокси) — (R) -миндальамидо) -3-2(-5 - (карбоксиметилтио-1,3,4-тиадиазолил)тиометил) - 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Вычислено, /0. .С 43,14; Н 3,45; N 9,58;
S 21,94.
C21H20N40sS4
1о !
25 зо
6
Найдено, /0. С 43,62; Н 3,62; N 9,18;
$21,33. ь Ф-спектр (фосфатный буфер рН 7,4):
leО лм,„.,=274 ммк; Е1",м 274.
Тонкослойная хроматография (CHC18 .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) К1 0,41;
7- ((R) - Миндальамидо) -3- (2- (5-цианометилтио-1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) - 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Вычислено; 0/0, С 44,84; Н 3,2; V 13,07;
S 23,94.
С20Н17М505$4.
Найдено, /0. С 45,15; Н 3,55; N 12,73;
S 23,42.
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4):
1 О
Хмамс 273 ММК; Е1 см 230)9.
Тонкослойная хроматография (СНС18 .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) К1 0,29.
7-((R)-Миндальамидо)-3-(2- (5-Р - оксиэтилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) - 3цефем-4-карбоновая кислота.
Вычислено, /0. С 44,43; Н 3,78; N 10,36;
S 23,72.
С20Н201 1406$4.
Найдено, /0. С 44,14; Н 3,81; N 10,05;
S 23,42.
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4):
),,„м-, 275 ммк; Е1, м 235.
Тонкослойная хроматография (CHCI8 .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) К 0,64.
7- ((4-Хлор) — (К) - миндальамидо) -3- (2- (5карбоксиметилтио-1,3,4 - тиадиазолил) -тиометил) - 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, . .С 40,53; Н 2,73; iV 9 46;
S 21,33.
С20Н17С1И407$4.
Вычислено, /0. С 40,77; Н 2,91; N 9,51;
S 21,77.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
1О5 л„,м, 266 ммк; Е1 „274.
ИК-спектр (таблетирование с КВг):
v (C=0) р-лактама 1780 см —, у (С вЂ” N)+
+6 (N — Н) во вторичных амидах 1550 см —, Тонкослойная хроматография в системе
СНС!8 МеОН: НСООН 160: 20: 20.
7- ((4-Циано) - (R) -миндальамидо) - 3- (2(5-карбоксиметилтио-1,3,4 - тиадиазолил)тиометил)-3 - цефем-4-карбоновая кислота.
7 - ((4-Метилсульфонил)-(R) - миндальамидо)-3-(2 - (5 - карбоксиметилтио - 1,3,4тиадиазолил)-тиометил)-3-цефем - 4-карбоновая кислота.
Найдено, /0 .. С 39,61; Н 3 25; iV 8 65;
S 25,09.
С21Н201Ч409$5.
Вычислено, /0. С 39,86; Н 3,19; N 8,85;
S 25,34.
УФ-спектр (в фосфатном буфере с рН
1ОО
7)4): Хм„, 267 ммк; Е1, „254.
ИК-спектр (таблетка с КВг): v (С=О) в
Р-лактаме 1770 см —, 683627
l0
7
Тонкослойная хроматография (система
СНС1з: MeOH: НСООН 160: 20: 20) К7
0,33.
7-((4-Окси) -(R) -миндальамидо) - 3-(2- (5карбоксиметилтио - 1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) -3-цефем-4 - карбоновая кислота.
Найдено, %: С 41,92; Н 2,92; N 9,71;
$22,22.
С2юН18И408$4.
Вычислено, : С 42,09; Н 3,18; М- 9,82;
$22,48.
УФ-спектр (в фосфатном буфере, рН 7,4):
1 04
Лмака 266 ММК; Е1 ам 219.
ИК-спектр (таблетирование с КВг): ч (С=О) в Р-лактаме 1700 см — ; ч (С— — N)+6(N — Н) вторичной амидной группы
1550 см — .
Тонкослойная хроматография в системе хлороформ: метанол: НСООН 160: 20: 20
К2 0,50.
7-((R)-а-окси-2 - фурилацетамидо)-3-(2(5-карбоксиметилтио - 1,3,4 - тиадиазолил)тиометил) - 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, %, С 39,41; Н 2 73; N 10,11;
$23,21.
С18НЦМ408$4.
Вычислено, /о. С 39,69; Н 2,96; N 10,29;
S 23,55.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Лмаа, 272 ммк; Е1 „222.
ИК-спектр (таблетка с КВг): ч (С=О) р-лактам 1770 см —, v (С вЂ” N) +6 (М вЂ” Н) вторичной амидной группы 1550 см — .
Тонкослойная хроматография (система растворителей СНС12 . МеОН: НСООН
160: 20: 20) Я2 0,42.
7 - ((R) -а-Окси-4 - пир идилацетамидо) -3(2-(5-карбоксиметилтио - 1,3,4 - тиадиазолил) -тиометил) -3-цефем-4-карбоновая кислота.
7-((Я) - Миндальамидо)-3-(2 - (5-карбофеноксиметилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)-3-цефем-4-карбоновая кислота.
7- ((К) -Миндальамидо) -3- (2- (5-P - карбоксиэтилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, /о. .С 44,15; Н 3,61; N 9,63;
S 22,33.
С21Н20И407$4.
Вычислено, /о. С 44,35; Н 3,54; N 9,85;
S 2,55.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Лмака 267 ммк; Е1 р 221.
ИК-спектр (таблетка с КВг): v (C=O)
Р-лактам 1770 см —, ч (С вЂ” N) +6 вторичной амидной группы 1550 см — .
Тонкослойная хроматограмма (СНС12 .
MeOH: НСООН 160:20:20) К 0,57.
7- ((R) -Миндальамидо) - 3- (-2- (5- (а,а-диметил) -карбоксиметилтио-1,3,4 - тиадиазолил) - тиометил) - 3-цефем-4 - карбоновая кислота.
7-((R)-Миндальамидо) - 3-(2-(5 - карбоинданилоксиметилтио - 1,3,4-тиадиазолил)8 тиометил) — 3 - цефем-4-карбоновая кислота.
7-((R) -Миндальамидо)-3((2 - (5 - морфолинэтилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)3-цефем-4-кар боковая кислота.
7- ((R) -Миндальамидо) - 3- (2 - (5-карбоксиэтинилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, /о, С 44 43; Н 2 63; N 9 73;
S 22,43, С21H16N407$4.
Вычислено, /р. С 44,67; Н 2,86; N 9,92;
S 22,71.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Лмака 269 ммк; Е1, м 210.
Тонкослойная хроматограмма (CHCl> .
МеОН: НСООН 160:20: 20) К1 0,60.
7- ((R) -Миндальамидо) - 3- (2- (5-сульфометилтио-1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) - 3цефем-4 — карбоновая кислота.
Найдено, /о. С 38,42; Н 2,91; N 9,22;
S 26,83.
С19Н18 1408$5.
Вычислено, /о. .С 38,63; Н 3,07; N 9,48;
S 27,14.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Лм»а, 267 ММК; Е1",„215.
Тонкослойная хроматограмма (СНС12 .
МеОН: СООН 160: 20: 20) К2 0,30.
Пример 2. К охлажденному до 0 С раствору 7-амино-3-(2-(5-карбоксиэтилен)транс - (тио-1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) -3цефем-4-карбоновой кислоты (2,15 г) и
NaHCO2 (2,94 r) в смеси ацетона (30 мл) и воды (60 мл) при перемешивании прибавляют раствор хлорангидрида R-а-формилоксифенилуксусной кислоты (2 г) в ацетоне (40 мл) . Реакционную смесь перемешивают при 0 С 1 ч и затем ночь при комнатной температуре. Под разряжением отгоняют ацетон и водный раствор обесцвечивают обесцвечивающим древесным углем, затем разбавляют водой и экстрагируют этилацетатом, подкисляют 20О/р серной кислотой до рН около 2. Органический слой промывают водой, высушивают на Na2$04 и выпаривают досуха. Остаток помещают в этиловый эфир и отфильтровывают, получая таким образом 7- ((R) -миндальамидо) -3- (2- (5-карбоксиэтилен)-транс-(тио - 1,3,4 - тиадиазолил)-тиометил)-3 - цефем - 4 - карбоновую кислоту; т. пл. 150 — 155 С (разложение);
1,98 г; выход 70О/О.
Вычислено, /о. С 44,50; Н 3,20; N 9,90;
S 22,61.
С21Н1вМ407$4.
Найдено, /О. .С 44,30; Н 3,20; N 9,70;
S 22,30.
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4):
Лм», 264 ММК; Е1Ссм 272; Е 15413.
Тонкослойная хроматография (СНС1а .
МеОН: НСООН 160: 20: 20) К2 0,33.
683627
60
ИК-спектр (КВг): ч (С= О) р-лактам
1775 см —, v (С вЂ” N)+6(N — Н) втор-амид
1520 см —, 6 (С вЂ” ОН) втор-спирт 1060 см —, 6 (С вЂ” Н); С=С-транс 950 см — .
7-Амино-3-(2-(5-карбоксиэтилен) - транс(тио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) - 3-цефем-4-карбоновую кислоту, применяемую в качестве исходного соединения, получают следующим образом.
К нагретому до 45 С раствору 7-аминоцефалоспорановой кислоты (27,2 r) и NaHCO3 (1.68 г) в смеси воды (45 мл) и ацетона (20 мл) прибавляют при перемешивании раствор 2-меркапто - 5 - карбоксиэтилентранс-тио - 1,3,4-тиадиазол (2,76 г) и (1,05 г) в воде (35 мл) и ацетоне (25 мл).
Смесь затем кипятят с дефлегмацией 4 ч, после чего охлаждают, подкисляют 8 /о-ной соляной кислотой до рН 3,5, полученный при этом осадок отфильтровывают, промывают холодной водой, а затем ацетоном.
Получают 7-амино-3- (2- (5-карбоксиэтилен(транс) -тио - 1,3,4-тиадиазолил) -тиометил)3-цефем - 4-карбоновую кислоту; 3,02 г; выход 70 /о, т. пл. 230 С (разложение).
УФ-спектр (фогфатный буфер рН 7,4)
4„,<, 268 ммк; E1СМ 312; е 13494 и Х,,„с
302 ммк; Е „280; а 12110.
2-Меркапто-5 - карбоксиэтилен -(транс)тио-1,3,4-тиадиазол получают следующим образом.
К пастворч, содержащему 0,23 г в 30 мл
СНаОН прибавляют 1,5 г 2,5-димеркапто1,3,4-тиадиазол, затем реакционную смесь перемешивают 30 мин при комнатной температуре. Медленно прибавляют раствор
1,06 г 8-хлор-(транс)-акриловой кислоты в
20 мл СН ОН перемешивают 12 ч при комнатной температуре. Метанол отгоняют под разряжением, остаток растворяют в воде, подкисляют фосфорной кислотой и полученный твердый остаток отфильтровывают.
Пер екристаллиз ацией из изопропилового спирта — петролейного эфира получают
2-меркапто-5 - карбоксиэтилен- (транс) -тио1,3.4-тиадиазол (1,65 г); выход 75 /о, т. пл.
195 — 197 С (разложение) .
Вычислено, о/о. С 27,26; Н 1,83; N 12,72;
S 43,67.
CsHgNgOgSg.
Найдено, /о.. С 27,49; Н 2,09; N 12,51;
S 43.28.
ЯМР (диметилфульфоксид dt;): 6,24 6 (di СНООН); 7,83 б (di — S — СН=); т СН= СН 15 Н (транс).
Аналогичным образом получают следующие соединения:
7- ((R)-Миндальамидо)-3 - (2- (5-сульфоэтилен- (транс) -тио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) - 3-цефем-4-каобоновая кислота.
Найдено, о/о . С 39,53; Н 2,91; N 9,09;
S 26,40.
С20Н18М40835.
Вычислено, о/о. С 39,85; Н 3,01; N 9,29;
S 26,60.
УФ-спектр (фосфатный буфер); рН 7,4: (oA
Х,.„,«. 272 ммк; Е,"м 240.
ИК-спектр (таблетка с КВг): v (С=О)
Р-лактама 1770 см —, ч (С вЂ” Х)+б (N — H) вторичной амидной группы 1550 см —, 6 (C — Н) С = С-транс 950 см — .
Тонкослойная хроматограмма (СНС1З .
МеОН: НСООН 160: 20: 20) Rg 0,45.
Пример 3. К охлажденномудо0 С раствору 2,16 r 7-амино-3-(2-(5-карбоксиэтилен- (uuc) -тио-1,3,4 - тиадиазолил) — тиометил1-3-цефем-4-карбоновой кислоты и 2,94 г
NaHCO3 в смеси ацетона (30 мл) и воды (60 мл) при перемешивании прибавляют раствор 2 r хлорангидрида (R) -а-формилоксисЬенилуксусной кислоты в 40мл ацетона. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при 0 С и затем в течение ночи при комнатной температуре. Затем отгоняют ацетон под разрежением, водный раствор обесцвечивают при помощи древесного угля, затем разбавляют водой, извлекают этилацетатом и подкисляют 20 /О-ной HgSO4 до рН 2.
Органический слой промывают водой, высушивают и выпаривают досуха, остаток переносят в эфир, при перемешивании несколько раз промывают эфиром и затем выпаривают досуха, получая 7-((R))-миндальамидо) -3- (2 - (5-карбоксиэтилен- (цис)тио-1,3,4-тиадиазолил) -тиомет л) -3 — цефем4-карбоновую кис. ото". т. пл. 145 — 150 С (разложение); выход 68%.
Вычислено, о/о. С 44,50; Н 3,20; N 9,90;
S 22,60.
Cg)H>gN4O S4.
Найдено, /o . С 44,25; Н 2,15; N 9,65;
S 22,35.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4): ц„ .т"- 260 ммк; Е см 280.
Тонкослойная хроматография (СНС1з .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) Rr 0,45.
ИК-спектр (КВг): ъ (C=O) P-лактам
1775 см — . ч (С вЂ” N) +6 (N — H) втор-амин
1520 см —, б (С вЂ” ОН) втор-спирт 1060 см —, 6 (С вЂ” Н) С = С-цис 1590 см — .
7-Амино-3- (2- (5-карбоксиэтилен - (цис-)тио-1.3,4-тиадиазолил) - тиометил) -3-цефем4-капбоновую кислоту, применяемую в качестве исходного продукта, получают следующим образом.
К нагретому до 45 С раствору 2,72 г 7аминокефалоспорановой кислоты и 1,68 г
NaHCO> в смеси воды (45 мл) и ацетона (20 мл) ппибавляют при перемешивании раствор 2,76 г 2-меркапто-5-карбоксиэтилен- (uuc) -тпо-1,3,4-тиадиазола и 1,05 г
NaOH в 35 мл воды и 25 мл ацетона; смесь нагревают 4 ч при дефлегмации, охлаждают и подкисляют 8О/о-ной НС1 до рН 3,5.
Г1ол чаемый осадок отфильтровывают, промывают холодной водой и затем ацетоном
683627 и получают с выходом 69 /о (2,98 г) 7-амино — 3- (2- (5-карбоксиэтилен- (иис) -тио-1,3,4тиадиазолил) -rHoxerHa) - 3-цефем-4-карбоновую кислоту; т. пл. 220 С (разложение).
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4): 5 о м.-кс 270 ммк; Е4 см 312; е 13494; Х»кк
302 ммк; Å4 „325; е 14057.
2-Меркапто-5-карбоксиэтилен -(цис)-тио1,3,4-тиадиазол получают следующим абра- 10 зом.
К раствору 0,46 r Na в 60 мл СНвОН прибавляют 3 г 2,5-димеркапто-1,3,4-тиадиазола, затем смесь перемешивают 30 мин при комнатной температуре. Медленно при- 15 бавляют к этой смеси раствор, содержащий
1,4 г пропиловой кислоты и 0,46 r Na в
40 мл СНвОН и смесь перемешивают 4 ч при комнатной температуре. Метанол отгоняют и остаток растворяют в воде, под- 20 кисля1от водный раствор 8о/о-ной HCI. Получаемьш осадок промывают водой и кристаллизуют из 99о/о-ного спирта. Получают
3,08 r (выход 70 /о) 2-меркапто-5-карбоксиэтилен- (иис) -тио-1,3,4-тиадиазола; т. пл. 25
230 — 232 С (разложение) .
Вычислено, : С 27,26; Н 1,83; N 12,72;
$43,67.
СвН»К 04$з 30
Найдено, /о. С 27,58; Н 1,93; N 12,73;
S 43,40.
ЯМР (димети.чсульфоксид дв) 6,12 б (d =
=СН вЂ” СООН); 7 72 6 (d> — S — CH=): т СН=СН 9,5 Н, (иис), :>5
Аналогичным образом получают следующие соединения.
7- ((К) -а - Окси-2-фурилацетамидо) -3- (2(5-карбоксиэтилен- (иис) -тио — 1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) - 3-цефем-4 - карбоновая кислота.
Вычислено, /о. С 40,99; Н 2,90; N 10,07;
$23,04, С»Н NО$,.. 13
На йде но, о/о . С 40,63; Н 3,01; lit 9,93;
S 22,92.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Х„, 264 ммк; Е4 „272:
ИК-спектр (таблетка с КВг): ч (С=О)
Р-лактама 1770 см —, v (С вЂ” N)+h (N — Н) вторичной амидной группы 1550 см — .
Тонкослойная хроматограмма (СНС1в .
: МсОН: НСООН 160: 20: 20) Rg 0,50.
7-((R)-Миндальамидо) - 3-(2-(5-сульфоэтилен- (иис) -тпо - 1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) - 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, о/о .. С 39,62; Н 2,87; N 9,11;
$26,33. 60
СвоНigN40в$в
Вычислено, /о. С 39,85; Н 3,01; N 9,29;
$26,60.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Хмвко 272 ммк; Е4 сц 220. 65
12
ИК-спектр (таблетка с КВг): (С=О) р-лактама 1780 см —, v (С вЂ” N)+6 (N — Н) вторичной амидной группы 1550 см- .
Тонкослойная хроматография (СНСIв:
: МеОН: НСООН 160: 20:20) Rq 0,33.
Пример 4. К охлажденному до 0 С раствору 4,2 r 7-амино-3-(2-(5-карбоксиметилтио-1,3,4 - тиадиазолпл) — тиометил) - 3цефем-4-карбоновой кислоты и 3,36 г
ХаНСОв в смеси 40 мл ацетона и 50 мл воды прибавляют при псремешивании 1,7г хлорангидрида фенилуксусной кислоты в 20 мл ацетона.
Реакционную смесь перемешивают при
0 С 1 ч и 3 ч при комнатной температуре.
Ацетон отгоняют под разрежением, водный раствор обесцвечивают древесным углем, разбавляют водой, извлекают этилацетатом и подкисляют 8/о-ной HCI до рН 2.
Органический слой промывают водой, высушивают над Хав$04 и выпаривают досуха, Остаток переносят в эфир и отфильтровывают получаемую при этом 7- (фенилацетамидо) -3- (2 - (5-карбоксиметилтио-1,3,4тиадиазолил) - тиометил) - 3-цефем - 4-карбоновую кислоту (4,04 г); выход 75 ; т. пл.
152 — 156 С (разложение) .
Вычислено, /о.. С 44,59; Н 3,37; Х 10,40:
S 23,81.
СыН вМ»Ов$».
Найдено, /о. С 44,73; Н 3,43; N 10,19;
$23,56.
УФ-спектр (фосфатный буфер) рН 7,4:
j Оя
Х вкс 276 ммк; Е4 см 253; е 3627.
Тонкослойная хроматография (СНС1в .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) Rr 0,31.
ИК-спектр (КВг): v (С=О) -лактам
1770 см — . v (С = 0) амид 1720 см —, (C — N) +6 (N — Н) вторичный амид
1540 см —, v (C — Н) монозамещенный фенол 740, 700 см- .
Аналогичным образом получают следующие соединения:
7- (а - Метоксифенилацетамидо) -3- (2- (5карбоксиметилтпо - 1,3,4-тиадиазолил)- тпометил) — 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Вычислено, о/о. С 44,35; Н 3,54; N 9,85;
$22,55.
С. Н„Ы.О,S .
Найдено, о/о. С 44,47; Н 3,62; U 9,63;
S 22,21.
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4) ).„к,к, 276 ммк; Е4, „239; е 13550.
Тонкослойная хроматография (СНС1в .
: МеОН: NH»OI- 32о/о-ный 160: 20: 20)
R4 0,33.
7-(Фенилацетамидо) - 3 - (2-(5-кярбоксиэтилен (транс) -тио - 1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) - 3-цефсм - 4-карбоновая кислота.
B ò--..;,т,числ по, /î .. С 45,80; Н 3,29; N 10,17;
S 23,30.
C 1Н вМ»Ов$».
11айдено, о/о. С 45,55; Н 3,07; N 9,93;
S 23,05.
683627
5
10 !
;30
УФ-спектр (фосфатныи буфер, рН 7,4)
Хъ(((с 266 ммк: EI с„275; е 1 5 1 00.
Тонкослойная хроматография (СНС1з .
: МсОН: НСООН 160: 20: 20) RI 0,46.
ИК-спектр (KRI ) i v (С= О) Р-л актам
1770 см —, 11 (C=O) амид 1720 см —, v (С вЂ” N)+5(N — Н) втор-амид 1540 см —, 11 (С вЂ” Н) С=С-11ис 1590.
7- (Фенилацетамидо) - 3- (2 - (5-карбоксиэтилентио - 1,3,4-тиадиазолил) - тпометпл)3-цефем-4-каобоновая кислота.
Найдено, %: С 45,73; Н 2,73: N 10,11;
$23,21.
Сы Н i sN40sS4.
Вычислено, %. С 45,97; H 2,94; N 10,21;
S 23,38.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
1%
А:((((((с 269 ммк; Е1см 240.
ИК-спектр {КВг): v (С=О) Р-лактама
1780 см —, v (С вЂ” 1«1)+б (N — Н) вторичной амидной группы 1550 см — .
Тонкослойная хроматограмма (СНС1з .
МеОН: HCOOH 160: 20: 20) RI 0,42.
7 - (2-Тиенилацетамидо) - 3- (2- (5-карбоксиэтилен-(трпнс)-тио - 1,3,4-тиадиазолил)тиометил)-3 - цефем-4-карбоновая кислота; т. пл. 145 — 150 С (разложение).
Найдено, %: С 40,71; Н 2,71; N 9,93:
S 28,60.
СвНisN406$5
Вычислено, %: С 40,90; Н 2,89; N 10,06;
S 28,80.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
1% л,„,,„, 266 ммк; Ei,"„270.
ИК-спектр (КВг): ч (С=О) Р-лактама
1780 см —, ч (С=С)-трпнс 1590 см —, v (С вЂ” 1«1)+б (N — Н) вторичного амида
1550 см —, ъ (С=С)-транс 950 см — .
Тонкослойная хроматограмма (CHCls .
СН,ОH: НСООН 160: 20: 20) R 0,45.
7- (2-Тиенилацетамидо) - 3- (2 - (5-карбоксиэтилен- {quc) - тио — 1,3,4 - тиадиазолил)тиометил) - 3 - цефем-4-карбоновая кислота; т. пл. 142 — 145 С (разложение).
С19Н„.Ч40;.$,.
Найдено, %: С 40,68; Н 2,72; N 9,81;
S 28,54, Вычислено, %: С 40,90; Н 2,89; N 10,06;
S 28,80.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
1%
Х„.„(с 266 х1мк; EI 260.
ИК-спектр (КВг): 1 (С = О) й-лактама
1780 см-, {С = С) -1{ис 1590 см —, v {C — N) (-й (N — Н) вторичного амида
1560 см- .
Тонкослойна я хром атограм«1 а { CHCls .
: СН-;ОН НСООН 160: 20: 20) RI 0,50.
П р» ер 5. К охлажденному до 0 С раствору 2,1 г 7-амино-3-(2-(5-карбоксимстилтио - 1,3,4-тиадиазолил) -тиометпл)-3-цефем4-карбоновой кислоты и 1,68 г МаНСОз в смеси из 30 мл ацетона и 60 мл воды пр. . персмешиванпи прибавляют раствор хлоранп1дрпда (В) -а - формилоксифенилуксусной кислоты в 40 мл ацетона.
Поибавля1от небольшое количество
NaHCO> для того, чтобы рН раствора поддерживать равным 6,5. Раствор перемешивают 20 мин при 0 С, затем подкисляют разбавленной серной кислотой до рН 2. Отгоняют под разрежением ацетон, водный раствор экстрагируют этилацетатом, промывают водой эфирный слой, высушивают и упаривают досуха. Остаток переносят в эфир и отфильтровывают полученную таким обр азом в виде осадка 7- ((R) -а-формилоксифенилацетамидо) -3 - (2- (5-карбоксиметилтио — 1,3,4 — тиадиазолил) - тиометил)-3 — цефем - 4 - карбоновую кислоту (2,33 r), выход 80%.
Вычислено, %: С 43,29; Н 3,11; N 9,62;
S 22,01.
С i Н1sN40sS4Найдено, %: С 43,45; Н 3,22; N 9.47;
S 21,83.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Х.„,„, 275 ммк; Е1СС4(219,2; в 12770.
Тонкослойная хроматография (CHCls .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) Я1 0,32.
Аналогичным образом получают следуюшие соединения:
7- ((R) -а — форм илоксифенилацетамидо)3-(2 - (5-карбокспэтилен-(трпнс) - тио-1,3,4тиадиазолил)-тиометил) — 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, %: С 44,22; Н 2,92; N 9,22;
S 21,33.
СкН18Х408$4.
Вычислено, %: С 44,43; Н 3,05; N 9,42;
S 21,57.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4): .м;(к 27 ммк, Е1 см 219.
ИК-спектр (КВг): 1 (С=-О) р-лактама
1780 см —, т (С вЂ” N) +б (N — Н) вторичного амида 1550 см — . б (С вЂ” Н) C =C-транс
950 см — 1, Тонкослойная хроматограмма (СНС1З .
: СН ОН: НСООН 160: 20: 20) RI 0,42.
7-((R)-а - формилоксифенилацетамидо)3-(2-(5 - карбоксиэтилен-(14ис)-тио - 1,3,4тпалпазолил) — тиометил - 3-цефем -4-карбоповая кислота.
Найдено, %: С 4431; Н 283; N 915;
S 21,22.
С -Н,.1 .;Os$4.
Вь 1ислено, %: С.44,43; Н 305; N 9,42;
S 21,57.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
1%
Ь(;(((с 272 ммк: Е1 с (220
ПК-спектр {КВг): v (С=-О) Р-лактама
1780 см — . (С вЂ” Х)+б (N — Н) вторичного а»1. а 1550 см — .
Т. и .ослойная «роматограмма (СНС1(, : МсОН: НСООН 160: 20:20) Я1 0,33, 683627
5
30 35
Пример 6. К раствору 1,8 г фенилмалоновой кислоты в 65 мл безводного тетрагидрофурана прибавляют 2,1 г дициклогексилкарбодиимида и смесь перемешивают
30 мин при комнатной температуре.
К полученному раствору прибавляют раствор 3,4 г 7-амино-3- (2- (5-карбоксиметилтио-1,3,4- тиадиазолил) - тиометил) - 3-це411ем - 4-карбоновой кислоты и 2,8 г
NaHCO8 в 60 мл воды и 40 мл тетпагидрофчрана. Раствор перемешивают 3 ч при комнатной температуре. Тетрагидрофуран отгоняют под разрежением, дициклогексилмочевину отфильтровывают через кизельгур, фильтрат подкисляют 8%-ной соляной кислотой, получаемый при этом осадок отфильтровывают, растворяют в тетрагидрофуране, высушивают и раствор упаривают под разрежением.
Остаток переносят в эфир, фильтруют, растворяют в этилацетате, высаживают эфиром, отфильтровывают полу ченную в виде твердого осадка 7- Г (R) -а — карбоксифенилацетамидо) - 3- Г2- (5-карбоксиметилтио1,3,4 — тиадиазолил) - тиометил1 - 3-цефем4-карбоновая кислота: выход 600 .
Вычислено, %. С 43,27; Н 3,11; N 9,62;
22,01.
Сти H18N408S4
Найдено, /О. С 43,47; Н 3,27; N 9,71;
$21,71.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4)
Х..та,тс 276 ммк; EI „221,1; е 12939.
Тонкослойная хпоматогпафия (СНС18 .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) Rq 0,41.
Пример 7. К охлажденному до 0 С растворч 4,2 г 7-амино-3-Г2-(5-карбоксиметилтио-1,3,4- тиадиазолил) — тиометил1 - 3-це<Ьем - 4-капбоновой кислоты, 0,4 г NaOH u
2 г NaHCO; в 60 мл воды и 60 мл ацетона ппи пепемешивании прибавляют раствор
3,6 r (R) -а-сульфофенилацетилхлорида в
60 мл апетона. Смесь перемешивают 20 мин ппи 0 — 5 C. Ацетон отгоняют, прибавляют к водному раствопч этилацетат и паствоп подкисляют 8 /о-ной соляной кислотой до пН 2. Органический слой промывают водой, высушивают и упаривают под разпяжением. Остаток переносят в эфир и отфильтповыва1от обпазовавшийся в виде осадка
7- Г (R) -а-счльфофенилапетамидо1 - 3- Г2- (5карбоксиметилтио - 1,3,4-тиадиазолил)-тиометил1 - 3-цефем-4 - карбоновую кислоту; выход 650/о.
Вычислено, о/о.. Г 38,85; Н 2,93; N 9,06;
S 25,90.
ГяттН1яМ40а$8.
Найлено, о : С 39,15: Н 3,03; N 8,92;
S 25,60.
Аналогичным образом получают следуюПттт т тт Д14НЕНИЯ.
7- Г (R) -а — сульфофенилацетамидо! -3- (2(5-карбоксиэтилен-(транс)-тио - 1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) - 3 - цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, о/о. С 39,81; Н 2,63; N 8,63;
S 25,22.
С21H!8N408$8
Вычислено, %.. С 39,99; Н 2,88; N 8,88;
S 25,42, УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
1 т4 макс 267 м м > Е1 см 245.
ИК-спектр (КВг): v (С = О) р-лактама
1770 см —, v (С вЂ” К)+б(К вЂ” Н) вторичного амида 1550 см —, б (С вЂ” Н) C =C-транс
950 см — .
Тонкослойная хроматограмма (СНС18 .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) RI 0,30.
7 - ((R)-а - сульфофенилацетамидо1 - 3(2- (5-карбоксиэтилен- (аис) -тио - 1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) - 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, о/о. С 39,71; Н 2,66; N 8,56;
S 25,31.
С21Н181Ч40,$ .
Вычислено, /о. С 39,99; Н 2,88; N 8,88;
$25,42.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Х„акс 267 ммк; Е1 "„233
ИК-спектр (КВг): v (C=0) f3-лактама
1770 см —, т (С вЂ” N)+6(N — Н) вторичного амида 1550 см — .
Тонкослойная хпоматограмма (СНС18 .
МеОН: НСООН 160: 20: 20) Ri 0,22.
П р и м е и 8. К охлажденному до 0 С раствоп 1,92 г 1-тетразолилчксусной кислоты и 2,1 мл тпиэтиламина в 80 мл безводного апетона, ппи перемешивании прибавляют
1,84 г тпиметилацетилхлорида, растворенного в 20 мл ацетона. Раствор перемешивают 30 мин, поддерживая температуру раствопа +5 Г, затем прибавляют к немч охлажденный до +5 С раствор 4.32 r 7-амино-3-f2-(5 - карбоксиэтилен - (транс)-тио1,3,4 - тиадиазолил) - тиометил1 - 3-цефем4-капбоиовой кислоты и 2,8 мл триэтиламина в 100 мл 40 -ного ацетона. Смесь затем перемешивают 1 ч ппи 5 С и 2 ч при комнатной температчре. Под пазрежением отгоняют ацетон, паствор обесцвечивают, подкисляют 8О/ -ной НС1 до рН 25, экстпагирч1от этилацетатом, эфирный слой Bblcvшива1от под Na.SO4, выпаривают досуха, ппибавляют к немч эбир и отбильтровыва1т . по.лччяя таким обпазом 4,9 г (выход
60 /о ) 7- Г (1-тетразолил) - ацетамидо1-3- Г2(5 - карбоксиэтилен - (транс)-тио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил! - 3-цефем-4-карбоновой кислоты. т. пл. 165 С 1 пазложеиие!.
Вычислено, /о. С 35,41; Н 2,60; N 20,65:
$23,64.
Г "Н NI-A- $, Нзттл.но. %. Г 35,23; Н 2,70; N 20,35;
S 23,10.
УФ-с-ектр (1+occha Tíûé бусЬер, рН 7,4):
>- „, 266 ммк; Е1 „290; е 15700.
683627
17
ИК-спектр (КВг): v (С=О) р-лактама
1780 см — ъ (С=С)-транс 1590 см — (С вЂ” N) +б (N — Н) втор-амид 1550 см —, б С=С-транс 950 см — .
Тонкослойная хроматография (СНСlз ..
: МеОН: НСООН 160: 40: 20) Кд 0,36.
ЯМР (диметилсульфоксид — dq): 3,76 6 (q CH — 2); 4,46 б (q! — СН вЂ” S); 5,17, 5,41 б (S, метиленовые протоны 1-тетразолил-1-метила); 5,78 б (q СН вЂ” 7), 6,24 б (d=CH — СООН-транс); УСН=СН=16 Н,;
7,97 6 (d — S — СН-транс); 9,38 б (S протоны тетразола); 9,556 (4 — CONH).
Аналогичным образом получают следующие соединения:
7- (2 - (5-Циано-1- {1,2,3 - триазолил} -ацетамидо) ) -3 - (2- (5-карбоксиметилтио-1,3,4тиадиазолил) -тиометил)-3 - цефем-4-карбоновая кислота.
Вычислено, %: С 36,85; Н 2,54; N 20,20;
$23,15.
Г t тН i 4NsOsS4.
Найдено, %: С 36,60; Н 2,63; N 20,01;
S 22,83.
УФ (фосфатный буфер, рН 7,4):
) „„;, 275 ммк; Едс, 205; в 11300.
Тонкослойная хроматография (CHCI .
МеОН: НСООН 160: 70: 20) R< 0,36.
7-(P-Цианоэтилен -(транс) - тиоацетамидо)-3-(2-(5 - карбоксиметилтио - 1,3,4-тиадиазолил)-тиометил-3 - цефем - 4-карбоновая кислота.
Вычислено, %: С 37,45; Н 2,77; N 12,84;
S 29,32.
Сt ТНОМ ХьОяS s.
Найдено, %:
С 37,56; Н 2,93; N 12,62; S 29,11.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Хмакс 269 ммк, Ед см 381,0; е 20770.
Тонкослойная хроматография (СНС1 .
: MeOH: НСООН 160: 20: 20) К 0,27.
7- f (1-Тегразолил) - ацетамидо)-3-(2 -(5карбоксиэтинилтио - 1,3,4 - тиадиазолил)тиометил)-3 — цефем - 4- карбоновая кислота.
Найдено, %: С 35,22; Н 2,11; N 20,53;
S 23,42.
C>gH.gNgO6S..
Вычислено, %: С 35,55; Н 2,24; N 20,73:
S 23;73.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
)% .м„<, 267 ммк; Е,"„240.
ИК-спектр (КВг1: v (С=О) р-лактама
1770 см —, v (С вЂ” М)+б (N — Н) вторичного амида 1550 см — ;
Тонкослойная хроматограмма (СНС1 .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) R< 0,45.
7- f (1-Тетразолил) -ацетамидо) -3 - (2- (5счльфометилтио-1,3,4 - тиадиазолил) - тиометил1 - 3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, %: С 31,22; Н 2,42; N 20,73;
S 23,72.
C>4H>4NaO S4.
18
Вычислено, %: С 31,45; Н 2,63; Х 20,96;
S 23,99.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
)%
Ц1а <с 272 ммк; Ед см 233.
ИК-спектр (КВг): v (С= О) р-лактама
1780 см —, ъ (С вЂ” N) +б (N — Н) вторичного амида 1550 см —
Тонкослойная хроматография (СНС1з .
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) Rf 0,32.
7- ((1-Тетр азолил) - ацетамидо) -3 - f 2- (5сульфоэтилен - (транс) -тио-1,3,4 - тиадиазолил)- тиометил)-3-цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, %: С 32,73; Н 2,31; N 20,31;
S 23,23.
C)gHi4NgOgSg.
Вычислено, %: С 32,96; Н 2,58; N 20,50;
S 23,46.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4): %
Х,„„„272 ммк; Ед, „, 224.
ИК-спектр (КВг): v (С=О) р-лактама
1770 см —, ч (С вЂ” N) +б (N — Н) вторичного амида 1550 см —, 6 (С вЂ” Н) C = C-транс
950 см- .
Тонкослойная хроматограмма (СНСIЗ ..
: МеОН: НСООН 160: 20: 20) Кд 0,42.
Пример 9. К охлажденному до 0 С раствору 1,92 г 1-тетразолилуксусной кислоты и 2,1 мл триэтиламина в 80 мл безводного ацетона и 2 капель N-метилморфолина, прибавляют 1,84 мл триметилхлорида, растворенного в 20 мл ацетона.
Раствор перемешивают 30 мин при 0 С и затем прибавляют по каплям охлажденный до 0 С раствор 4,32 г 7-амина-3-(2-(5-карбоксиэтилен — (иис)-тио - 1,3,4 — тиадиазолил)-тиометил)-3 - цефем-4-карбоновой кислоты и 2,8 мл триэтиламина в 100 мл 40%ного ацетона. После окончания прибавления, раствор перемешивают 1 ч при 0 С и
2 ч при комнатной температуре. Ацетон выпаривают до рН 2,5 и затем экстрагируют этилацетатом. Органический слой высушивают над безводным Na.SO< и выпаривают досуха до небольшого объема, остаток переносят в эфир, твердую нерастворившуюся часть отфильтровывают, получая таким образом 7- ((1-тетразолил) - ацетамидо) -3- (2(5-карбоксиэтилен-(иис)-тио - 1,3,4-тиадиазолил)-тиометил) - 3-цефем-4 - карбоновую кислоту; т. пл. 148 — 150 С (разложение); (4,7 г); выход 57,5%.
Вычислено, %: С 35,44; Н 2,60; N 20,65;
S 23,64.
CigH)4NgOpS4.
Найдено, %: Г 35,75; Н 2,76; N 20,33;
S 23,33.
УФ-спектр (фосфатный спектр, рН 7,4):
>% .макс 266 ммк; Ед см 272; в 14700; Лмакс
302 ммк: Ед „280; е 15200.
Тонкослойная хллматография (CHClq .
: MeOH: НСООН 160: 40: 20) Кд 0,44.
683627
ИК-спектр (КВг): v (С=О) Р-лактама
1780 см-, v (С = С) -??ис 1590 см-, ч (С вЂ” N) +6 (N — Н) - втор- амид 1560 см — .
ЯМР (диметилсульфоксид — d5): 3,76 (q — CH — 2); 4,44 б (q! — СНзS); 5,16 б (d1 — СН вЂ” 6); 5,426 (т протоны метилена в
1-тетразолилметиле); 5,78 б (q — СН вЂ” 7);
6,24 6 (d=CH — СООН-цис); СН=СН=
=10Н,; 7,93 б (d? — S — СН-?1ис); 9,39 6 (т, протоны тетразола); 9,56 б (d — СΠ— ХН).
П р им е р 10. К охлажденному до — 10 С раствору 1,65 г 1-тетразолиуксусной кислоты и 1,68 мл триэтиламина в 80 мл безводного ацетона прибавляют при перемешивании 1,58 мл изобутилхлорформиата. Раствор перемешивают при — 10 С 30 мин, затем охлаждают до — 20 С. К этому раствору прибавляют в течение 30 мин раствор 4 г
7-амино-3- (2 — (5-цианометилтио - 1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) - 3-цефем-4-карбоновой кислоты и 1,4 мл триэтиламина в
100 мл 50О/о-ного ацетона. Смесь перемешивают 1 ч при — 20 С и затем 3 ч при комнатной температуре. Раствор фильтруют и отгоняют ацетон под разрежением, подкислЯ?От Остаток 10 //) -ной солянОЙ кислотОЙ до рН 2,5, затем экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой, высушивают над 1Х1аз$04 выпаривают досуха. Остаток переносят в эфир и получают
7- ((1-тетразолил) -ацетамидо) - 3- (2- (5-цианометилтио - 1,3,4-тиадиазолил) -тиометил)3-цефем-4-; т. пл. 93 С (разложение); выход 65О/О.
Вычислено, /О. С 35,21; Н 2,56; N 24,64;
S 25,07.
C15H13N9O4$4.
Найдено, /о. С 35,61; Н 2,73; N 24,25;
$24,63.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,5):
4„„<, 273 ммк; Е?Ссм 237; в 12100.
Тонкослойная хроматография (СНСIз .
МеОН: НСООН 160: 60: 30) К? 0,57.
7-Амино-3-(2-(5 - цианометилтио - 1,3,4тиадиазолил) - тиометил) - 3-цефем-4-карбоновую кислоту, применяемую в качестве исходного продукта, получают следующим образом.
2,72 г 7-аминоцефалоспориновой кислоты суспендируют в смеси 30 мл ацетона и
130 мл фосфатного буфера при рН 7, затем прибавляют 2,27 г 2-меркапто-5-цианометилтио — 1,3,4-тиадиазолил и 1,85 r.
NaH. СОз.
Раствор перемешивают 6 ч при 60 С, охлаждают, устанавливают рН в растворе, равным 3 (8О/о-ный HCI), образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают небольшим количеством холодной воды и затем ацетоном и получают 2,8 r 7-амино-3(2-(5-цианометилтпо - 1,3,4- тиадиазолил)тиомстил) - 3-цефем-4- <арбоного "1 кислоты. т. пл. 225 — 230 С (разложение).
?0
?5
Зо
УФ-спектр (фосфатный буфер рН 7,4):
).м„;„275 ММК; E? м 304,1; Е 12210.
2-Мер капто-5-цианометил - 1,3,4-тиадиазолил получают взаимодействием 2,5-димеркапто - 1,3,4 - тиадиазола с хлорацетонитрилом согласно способу, описанному в примере, для 2-меркапто-5-карбоксиметилтио - 1,3,4 -; т. пл. 128 — 130 С; выход 86о/О
Пример 11. Согласно способу примера 10 получают:
7- ((1-Тетр азолил) — ацетамидо) — 3- (2- (5Р-гидроксиэтилтио - 1,3,4 - тиадиазолил)тиометил) - 3-цефем-4-карбоновая кислота; т. пл. 125 С (разложение); выход 60О/о.
Вычислено, /о. С 34,87; Н 3,12; N 21,69;
$24,83.
С!5Н161х1805$4.
Найдено, /о. С 35,02; Н 3,33; N 21,33;
S 24,33.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Лмакс 275 MМК; E?см 239,4; Е= 12300.
Тонкослойная хроматография СНС1з .
: МеОН: НСООН 160; 40: 20) К? 0,34.
7-Ам ино-3- (2- (5-P — оксиэтилтио-1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) -3 - цефем-4 - карбоновую кислоту, применяемую в качестве исходного продукта, получают следующим образом.
К охлажденной до 0 С 3,74 г суспензии
7-аминоцефалоспорановой кислоты в 25 мл ацетона и 50 мл воды прибавляют раствор
2,31 г ХаНСОз в 50 мл воды, перемешивают несколько минут при комнатной температуре, а затем нагревают до 45 С, после чего прибавляют раствор 4 г 2-меркапто-5оксиэтилтио - 1,3,4-тиадиазола в 50 мл ацетона. Смесь перемешивают при дефлегмации 5 ч, поддерживая рН в растворе порядка 7,6 — 7,8 прибавлением 5 /о-ного
Na НСОз.
Раствор охлаждают, доводят рН раствора до 3,5 добавлением 23О/О-ной НСI и полученный осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и выпаривают досуха при 50 С, получая 7-амино-3- (2- (5+оксиэтилтио - 1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)-3цефем-4-карбоновую кислоту (4,2 г).
2-Меркапто-5-(P-оксиэтил) - тио-1,3,4-тиадиазол получают взаимодействием 2,5-димеркапто - 1,3,4-тиадиазола с этиленхлоргидрином; т. пл. 113 — 116; выход 75 /о.
Пример 12. К охлажденному до — 5 С раствору 2,66 г 1- (3,5-дихлор-1,4-дигидро4-оксопиридил) -уксусной кислоты и 1,68 мл триэтиламина в 100 мл безводного ацетона и 2 каплях морфолина, прибавляют 1,48 мл триметилацетилхлорида, растворенного в
20 мл ацетона, и смесь перемешивают при — 5 C в течение 30 мин, затем прибавляют раствор 4,2 r 7-амино-3- (2- (5 - карбоксиметплтио - 1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)-3цефем - 4-карбоновой кислоты и 2,8 мл три683627
21
22 этиламина в 140 мл 409/9-ного ацетона, причем температуру в реакционной смеси поддерживают равной — 5 С. После завершения прибавления раствора перемешива1от
1 ч при — 50 С и затем 2 ч при комнатной 5 температуре.
Ацетон отгоняют, остаток разбавляют водой, извлекают этилацетатом и подкисляют до рН 2,5 20 /9-ной Н9$04.
Нерастворившийся осадок отфильтровы- 10 вают, органический слой отделяют, высушивают над безводным N39$04, выпаривают досуха до небольшого объема. Прибавляют эфир, смесь перемешивают 2 ч и отфильтровывают затем твердый продукт, по- 15 лучая таким образом 7-(1-(3,5-дихлор-1,4дигидро-4-оксопиридил) -ацетамидо) - 3- (2(5-карбоксиметилтио - 1,3,4-тиадиазолил)тиометил) -3-цефем — 4-карбоновую кислоту; т. пл. 168 — 170 С (разложение); выход 20
709/19
Вычислено, /9. С 36,6; Н 2,43; М 11,25:
S 20,6.
Г19Н15С12Х507$4.
Найдено, /9 . С 36,23; Н 2,64; 1 1,02; 25
S 20,10.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Л„,;„-, 278 ммк; Е1А 453; е 28200.
ИК-спектр (КВг): (C= 0) р-лактам
1780 см —, v (C=O) пиридон 1630 см —, (С вЂ” К)+б (N — Н) втор-амид 1550 см — .
Тонкослойная хроматография (СНС19 .
: MeOH: HCO0H, 160: 40: 20) RI 0,28.
Аналогичным образом получают следующие соединения:
7- (1- (3,5-Дибром-1,4 - дигидро-4-оксопиридил) - ацетамидо) - 3- (2- (5-карбоксиметилтио - 1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)-3цефем-4-карбоновую кислоту; т, пл. 165—
170 С (разложение); выход 60 /9.
Вычислено, 9/9. С 32,0; Н 2,12; Х 9,83;
S 180;
С19Н19В г9М От $4
Найдено, 9/9. .С 3103; Н 2,23; N 9,43;
S 17,61.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4)
Ië„„<,. 280 ммк; Е1 СО„376.
Тонкослойная хроматография (CHC1> . 50
: MeOH: HCOOH) 160: 40: 20) Кс 0,34.
ИК-спектр (KBr): v (C=0) 8-лактам
1730 см — ч (С=О) пиридон 1625 см — (С вЂ” Х)+6 (N — Н) втор-амид 1550 см — .
7-(1 -(3,5-Дихлор - 1,4 - дигидро-4-оксо- 55 пиридил) -ацетамидо) — 3- (2- (5 - карбоксиэтилен- (транс) - тио - 1,3,4 - тиадиазолил)тиометил) -3 - цефем-4-карбоновая кислота; т. пл. 165 — 170 С (разложение); выход
68 00
Вычислено, /9. С 37,75; Н 2,38; Х 11,00;
S 20,15.
С„Н 19C1,N,O, S.
Найдено о/о С 37 43; Н 2,22; Х 10,81:.
S19,,93. 65
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4):
Х.„.,„с 276 ммк; Е1 " „473; е 30,000.
ИК-спектр (КВг): v (С = О) р-лактам
1770 см —, . (С=О) пиридон 1630 см — ; (С вЂ” N)+6 (N — Н) втор-амид 1550 см —, б (С вЂ” Н) C=C-транс 950 см — .
7- (1- (3,5-Дихлор-1,4-дигидро - 4 - оксопиридил) -ацетамидо) -3- (2- (5 - карбоксиэтплсн(ис)-тио - 1,3,4-тиадиазолпл) - тиометил)3-цефем-4-карбоновая кислота; т. пл. 170—
175 (разложение); выход 65 /9.
Вычислено, 9/9. С 37,75; Н 2,38; N 11,00;
S 20,15.
С29Н1ьС191 507$4.
Найдено, 9/9. .С 37,52; Н 2,25; Х 10,19;
S 19,94.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4): л„,„„278 ммк; Е1 „483; е 30744.
ИК-спектр (КВг): (C=O) Р-лактам
1770 см —, v (С=О) втор-ам11д 1695 см —, (С вЂ” М) +б (N — Н) втор-амид 1560 см — .
Тонкослойная хроматография (СНС19 .
: МеОН: HCOOH 160: 40: 20) Кс 0,42.
7- (1 - (3,5-Дихлор-1,4-дигидро-4 - оксопиридил)-ацетамидо) - 3-(2-(5- карбоксиэтинплтио - 1,3,4-тиадпазолил) - тиометил)-3цефем-4-карбоновая кислота.
Найдено, /9. С 37,62; Н 2,11; N 11,21;
S 20,33.
С9оН1зС1Иь0 $4.
Вычислено, /9. С 37,85; Н 2,06; Х 11,04;
S 20,21.
УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4); ,1о,;
/..1 1l ИК-спектр (КВг): ъ (C=O) р-лактам 1770 см —, v (С вЂ” N) +6 (N — Н) втор- амида 1550 см — Тонкослойная хроматограмма (CHC1> . : МсОН: НСООН 160: 20: 20) RI 0,62. П р и м с р 13. К раствору Р-карбоксиамидоэтилсH (трпнс) -мсркаптоуксусной кислоты в 80 мл безводного ацетонитрила и 40 мл безводного диметилформамида при перемсшивании и охлаждении до — 5 С прибавляют 1,4 мл триэтиламина и 2 капли N-мстилморфолина, а затем по каплям 1,22 мл триMåòèëàöåòèëõëорида, растворенного в 20 мл безводного ацетонптрила. Смесь перемешивают 30 мин при — 50 С, затем прибавляют 4,2 г 7-амино-3- (2- (5карбоксиметплтио-1,3,4 - тиадпазолил) -тиомстил) - 3-цсфем-4-карбоновой кислоты и 2,8 мл триэтпламина в 140 мл 509/о-ного ацетона. После завершения прибавления смесь псрсмешива1от 1 ч при — 5 С, затем 2 I прп комнатной температуре, после чего ре",êöèîííóþ смс сь фильтруют, выпариваIoT досуха, разбив.. IloT водой, разделяют этилацетатом и .-.од:,,I=ляют 20 /9-ной Н9$04 до пН 2,5. О "с1. ..ч1.тповывают нерастворившийся осадок, 1.. ч". гсскпй слой отделяют, высушивают псг1, б;вводным Ха9$0.1 и упаривают до небольшого объема. Остаток пе683627 23 65 реносят в эфир, отфильтрованный твердый продукт снова растворяют в небольшом количестве ацетонаметанола и по каплям прибавляют к эфиру, затем перемешивают 2 часа. Образующийся твердый осадок отфильтровывают и высушивают под разряжением, получая 7- (р-карбоксиамидоэтилен- (транс)тиоацетамидо) - 3 - (2- (5 - карбоксиметилтио-1,3,4-тиадиазолил) - тиометил) -3 — цефем-4-карбоновую кислоту; т. пл. 135— 140 С; выход 60%. Вычислено, о/О . С 36,30; Н 3,04; 1х1 12,42; S 28,5. С пН п1х1ьОтЬз. Найдено, % .. С 36,70; Н 3,22; N 12,22; N 28,33. УФ-спектр (фосфатный буфер, рН 7,4): макс 272 M M K; E1 см 450. Тонкослойная хроматография (СНС19 . : МеОН: НСООН 160: 40: 20) Ri 0,37. ИК-спектр (КВг): v (С=О) р-лактам 1770 см, ч (С=О) сопряженный амид 1650 см —, ч (С вЂ” N)+6(N — Н) втор-амид 1150 см —, 6 (С вЂ” Н) С=С-транс 945 см — . Пр им ер 14. К холодному (— 10 С) раствору 4,52 г (R) -а-бутоксикарбоксиамидофенилуксусной кислоты и 2,8 мл триэтиламина в 100 мл сухого тетрагидрофурана при перемешивании в течение 20 мин прибавляют 3,0 мл фторформиата. К этой смеси прибавляют при — 10 С по каплям холодный раствор 11,2 г 7-амино-3-(2-(5-карбоксиэтилен(транс)-тио — 1,3,4 - тиадиазолил)-тиометил)-3 - цефем-4-карбоновой кислоты и 6 мл триэтиламина в 160 мл 50% -ного водного тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при 0 С и 2 ч при комнатной температуре. Отгоняют тетрагидрофуран, к оставшейся смеси прибавляют воду и затем извлекают этилацетатом. Органический слой отбрасывают. Водный слой охлаждают, разделяют на слои этилацетатом и подкисляют до рН 3 20%-ной H2SO4. Слои разделяют и водный слой экстрагируют этилацетатом. Выпаривают эти слои и высушенный органический слой получают твердый остаток, который затирают в порошок со смесью эфира и петролинейного эфира и получают чистое трет-бутоксикарбонильное произвольное. 14 г этого продукта прибавляют к 130 мл холодной трифторуксусной кислоты и перемешивают при 0 С. Раствор упаривают под разряжением до небольшого объема и остаток медленно приливают к большому объему эфира и собирают высадившуюся в осадок соль трифторуксусной кислоты. Эту соль растворяют в воде, прибавляют метилизобутилкетон и раствор доводят до рН 4 прибавлением три-н-бутиламина. Твердый продукт собирают, промывают этилацетатом и высушивают, получая 7-((R)-аминофенилацетамидо) -3- (2 - (5-карбоксиэтилен(транс) -тио - 1,3,4-тиадиазолил) -тиометил)5 4О 3-цефем-4-карбоновую кислоту с выходом 55% . Вычислено, %. С 44 65 Н 3,39; N 12 38 S 22,65. С21Н191х150654. Найдено, /9. С 44,33; Н 3,18; N 12,10; S 22,45. П р и мер 15. К суспензии 2,72 г 7-((1тетразолил) -ацетамидо) -3 - (2- (5-карбоксиэтилен-(транс)- тио-1,3,4-тиадиазолил)-тиометил) - 3-цефем-4 - карбоновой кислоты в 50 мл воды прибавляют стехиометрическое количество NaHCO>, при этом происходит полное растворение соединения. 3атем раствор лиофелизируют и получают Na-соль 7-.((1-тетразолил)-ацетамидо) - 3(2- (5 - карбоксиэтилен) — (транс-) тио-1,3,4тиадиазолил) -тиометил) -3 - цефем-4-карбоновой кислоты. Пример 16. К суспензии 2,82 г Na-соли 7- (1-тетразолилацетамидо) -3- (2 - (5 - карбоксиэтилен - (транс) - тио-1,3,4 — тиадиазолил) -тиометил)-3 - цефем-4-карбоновой кислоты в 40 мл ацетона, прибавляют 0,4 мл 10%-ного водного NaJ и 0,72 мл хлорметилата триметилуксусной кислоты, затем суспензию нагревают при дефлегмации 3 /2 ч, охлаждают, фильтруют и затем упаривают под разряжением. Маслянистый остаток растворяют в 20 мл этилацетата, промывают раствором бикарбоната и затем водой, высушивают и выпаривают досуха, получая триметилацетилоксометиловый эфир 7- ((1-тетразолил) -ацетамидо)-3-(2 - (5-карбоксиэтилен-(транс) - тио - 1,3,4-тиадиазолил) - тиометил)-3-цефем-4-карбоновую кислоту. Этот эфир также может быть получен взаимодействием натриевой соли 7-((1-тетразолил) - ацетамидо) - 3-(2-(5-карбо-третбутоксиэтилен-(транс)-тио - 1,3,4-тиадиазолил) -тиометил) -3 — цефем-4-карбоновой кислоты со стехиометрическим количеством хлорметилата триметилуксусной кислоты, согласно вышеописанной методике, таким образом, получают трет-бутоксипроизводное. которое затем омыляют. П р и м ер 17. 7-((1-тетразолил)-ацетамидо)-3 - (2-(5 - карбоинданилоксиметилтио1,3,4 - тиадиазолил)-тиометил)-3 - цефем-4карбоновую кислоту получают взаимодействием 1-тетразолилуксусной кислоты с 7-амино - 3-(2-(5-карбоинданилоксиметилтио-3,4-тиадиазолил) - тиометил) -3-цефем-4карбоновой кислоты согласно методике примепа 8. Аналогичным путем получают 7- ((1-тетр азолил) - ацетамидо) -3- (2- (5-карбофеноксиметилтио - 1,3,4 - тиадиазолил)тиометил) -3-цефем-4-карбоновую кислоту. Формула изобретения 1. Способ получения производных 7-ацетамидо-3-тиадиазолилтиометил - 3-цефем-4карбоновой кислоты общей формулы 683627 26 с и СООН - СН-С- 1Н N — 1 2 / N ) соон R — СН- СООН 1 кг Составитель 3. Латыпова Техред Н. Строганова Редактор Л. Герасимова Корректоры: 3. Тарасова и О. Тюрина Заказ 2501/12 Изд. № 591 Тираж 521 Подписное НПО «Поиск> Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва К-35, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 где R> — фенил, незамещенный или монозамещенный в параположении атомом хлора, метилсульфонил-, окси-, метильной, мегокси-, сульфо- или цианогруппой; 10 R> — атом водорода, окси-, карбокси-, метокси-, формилокси-, сульфо- или аминогруппа при условии, когда R> — монозамещенный фенил, R> не является аминогруппой, или R — фурил-2 или пиридил-4 и 15 Кз — оксигруппа, или R> — тиенил-2 и К2— атом водорода, окси-, карбокси-, или сульфогруппа, или R> — тетразолил-1,1,2,3-триазолил - 1,3,5-дихлор-1,4-дигидро-4 - оксопиридил-1, 5-циано-1,2,3-триазолил-1, р-циано- 20 этилентиогруппа, р-карбоксамидоэтилентиогруппа и Кз-атом водорода; Кз — карбоксиметил, карбоксиэтил, карбоксиэтилен, карбоксиэтинил, сульфометил, сульфоэтилен, цианометил или оксиэтил, 25 или их эфиров, или их солей, о тл и ч а юшийся тем, что соединение общей формулы где R имеет вышеуказанные значения, подвергают взаимодействию с кислотой общей формулы где R< и R имеют вышеуказанные значения, или с ее реакционноспособным производным, при температуре от — 30 С до +30 С в среде растворителя, и целевой продукт выделяют в виде свободной кислоты, ее эфира или соли. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что взаимодействие проводят в присутствии основания. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Выложенная заявка ФРГ № 2223375, кл. 12р 4/01, опубл. 1972.
