0-трифосфорный эфир 4-метил-5- @ -оксиэтил-n-(2 @ -метил-4 @ -аминопиримидил-5 @ -метил) тетрагидротиазолия полуфосфат, обладающий в @ -антивитаминной активностью

Авторы патента:

ОСТРОВСКИЙ Ю.М.

ВОСКОБОЕВ А.И.

ЗАБРОДСКАЯ С.В.

C07F9/09 - эфиры фосфорных кислот

A61K31/675 - содержащие азот в качестве гетероатома кольца, например пиридоксал фосфат

1 "се О4 нлмк

О П И С А Н И " Й

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик jiij 792893.К АВТОР СКОМУ С ИЯЬСЯУ (6f) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 170479 (21) 2779457/23- 04 (5 )м. к,.

С 07 F 9/09

A 61 К 31/бб с присоединением заявки Йо

Государственный комитет ссср но делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 0709.81, бюллетень Ио 33

Дата опубликования описания 070981 (53) УДК 547. 26 118. 07 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Ю.М. Островский, А.И. Воскобоев и С.В. Забродская (7t) Заявитель

Отдел регуляции обмена веществ АН Белорусской CCP (54) 0-ТРИФОСФОРНЫЙ ЭФИР 4-МЕТИЛ-5 -ОКСИЭТИЛ-Й-(2 -МЕТИЛ -4 "АМИНОПИРИМИДИЛ-5 -МЕТИЛ)-ТЕТРАГИДРОТИАЗОЛИЯ ПОЛУФОСФАТ,ОБЛАДАЮЩИЙ

В„ -АНТИВИТАИИННОЙ АКТИВНОСТЬЮ!

/2 Н P0< ".К.ф ГН

С, Н, S Ож,g-0-у-0-Р- ©Н

i I 1

ОН ОН ОН

Изобретение относится к области химии фосфорорганических соединений а именно к новому 0-трифосфорнаму обладающему В вЂ” антивитаминной акф тивностью, который может найти применение в медицине.

Соединение формулы I и его свойства в литературе не описаны.

Известны сильнейшие антйвитаминные препараты тиамина: окситиамин и пиритиамин, которые применяются в экспериментальной и лечебной практике (1) и )2) . Однако они имеют следующие недостатки: а) окситиамин более токсичен,чем предлагаемое соединение при внутрибрюшинном введении белым мышам; б) окситиамин н пиритиамин в той же дозе, что и предлагаемое соединение (1 мг/100,0 г веса животного), не проявляют .антивитаминной активности по влиянию на фермент пируватдеэфиру 4-метил-5 Р -оксйэтил-й-(2 -меi тил-4 -аминопирамидил-5 -метил) -тетрагидротиазолия полуфосфату формулы гидрогеназу из печени и сердца белых мышей .

Целью изобретения является расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Поставленная цель достигается описываеьым 0-трифосфорным эфиром 4-ме1 тил-5-P-рксиэтил-тй-(2 -метил-4 -ами20 нонириьвщил-5 -метил)-тетрагидротиаt золия полуфосфатом формулы Х, обладакщим В(- антивитаминной активностью.

0-Трифосфорный эфир 4-метил-5 В25 -оксиэтил-й-(2 -метил-4 -аминопирамиl. дил-5 -метил)-тетрагидротиазоля по- . луфосфат получают путем фосфорилирования тетрагидротиамина смесью ОртОфосфорной кислоты и фосфорного ангид30 рида с последующим ионообменным хро792893 матографированием полученной смеси фосфатов.тетрагидротиамина.

Пример 1. Получение 0-Трифосфорного эфира 4-метил-5 Р-оксиt этич-й- (2 -метил.-4 -аминопиримидил-5 -метил) -тетрагидротиаэолия-полуфос- 5

1 фата.

К однородной массе, содержащей ,4,0 артофосфорной кислоты, обезвоженной в вакууме при 125 С н течение

6 ч, и 4,0 г Фосфорного ангидрида, прибавляют 2,0 r (0,074 моль) тетрагидротиамина, синтезируемого иэ фармакодейного препарата тиамина.Реакционную смесь при 107 С перемешивают

30 мин, затем охлаждают до 40оС, прибавляют 9,6 г измельченного льда и перемешивают до полного растворения.

Раствор выливают в 160,0 мл безводного ацетона при температуре 5-10 С и оставляют на холоду до следующего дня. Отстоявшийся водно-ацетононый 20 слой отделяют и н остатке получают

4,0 г смеси фосфатов тетрагидротиа.мина, включающей в виде побочного продукта реакции фосфорилирования

0-трифосфорный эфир 4-метил-5-1-окси-.g$ этил-N-(2 - метил-4 -аминопиримидил-5 -метил ) -тетрагидротиазолия полуфосфат. На колонке 1 > 20 см катионообмеийой смолы 0о((ех 50и фирмы Ооп

СЬе(((1са(Со 05А 50-100 меш (Н -фор- щ ма) при автоматическом отборе фракций при скорости истечения 18 мп/ч выделяется 125 мг 2.х 10 4(4 целевого продукта.

На фиг. 1 представлен полный профиль элюции смеси тетрагидротиаминфосфатов. В качестве элаента используют воду. Контроль выхода 0-трифос. Фориого эфира 4-метил-5р-оксиэтил-.В (2 -метиламинопиримидил-5 -метил)(-тетрагидротиазолия полуфосфата осу- i 40 ществляют спектрофотометрически (дли= на волны 269 нм, фиг. 2} и методом бумажной восходящей хроматографии в системе ((-пропиловый спиртгвода:

:,3./15 М цитратыый буфер рН = 5,0 в Д5

Соотношении 7:2:1 на ватмане F(1trah.11 за 10-12 ч. Кислый водный раст.вор препарата упаривают на роторном испарителе при комнатной температуре, высушивают в вакуум-эксикаторе до у) состоянйя стеклообраэного вязкого масла желтого цвета, хорошо раствори. мого в воде.

Найдено,Ъ: Р 19,8; ((9,5.

С„, Н Р„,0„„ 5 1/2 НРО4.

55, Вычислено,В: Р 19,5, ((10,0.

Соотношение грамм-атомов органически.снязанного фосфора к числу грамм-молей тетрагидротиамина из . аликвоты водного раствора с максимальным содержанием препарата равно б0

2,99. Трифосфаттетрагидротиамина полуфосфат хроматографически однороден и в укаэанной системе -разделения имеет = 0,094. Ультрафиолетовый спектр поглощения 7,4 х 10 М раство- б5 ра препарата.в 0,02 М К, Na+-фосфатном буфере, снятый на регистрирующем двухлучевом спектрофотометре

"UV Vi ь Specord" (фиг. 2, позиция 2) почти идентичен спектру поглощения самого тетрагидротиамина (фиг. 2,позиция 1) и пуи длине волны 269 нм

Е = 6080 см

Пример 2. Определение В -антинитаминной активности 0-трифосфорного эфира 4-метил-5 Р-оксиэтил-8-{2 -метил-4 -аминопиримндил-5 -меI ( тил)-тетрагидротиаэолия полуфосфата

{ ГГТ-ТФ).

В качестве объекта испытаний выбран наиболее чувствительный В, -витаминзависимый фермент вЂ” пируватдегидрагенаэа печени и сердца животных.

Для сраннительной оценки биологичес кой активности описываемого соединения в тех же условиях и дозах испытывали сильнейшие антивитаминные анало-. ги тиамина окситиамин (ОТ) и пиритиамин {ПТ). В опыте использовали белых мышей обоего пола средним весом

18,0 г в количестве: группа с 0T вЂ” 7, группа с ПТ вЂ” 7, группа с ТГТ-ТФ - 11, контрольная группа животных вЂ” 24.Способ введения препаратов - одноразовая подкожная инъекция при физиологическом Значении рН водных растворов. ,Цоэа введения вЂ” 1 мг/100,0 г веса животного. Через 3 ч после одноразовой подкожной инъекции окситиамина, пиритиамина и описываемого соединения животных забивали методом декапитации..Исследуемые ткани печени и сердца гомогеииэировали на холоду с

0,15 м раствором хлористого калия в приготовленных гомогенатах определяли активность В4 - витаминэависимого фермента пируватдегидрогенаэы. Угнетение актинности этого фермента критерий глубин авитаминоза В,. Активность фе(:мента выражается в мкмоль феррицианида калия, восстановленного в соответствующий ферроцианид при окислении пировиноградной кислоты.

В табл. 1 представлены абсолютные значения активности фермента и данные по величине активности фермента, выраженные в процентах по отношению к контролю (контрольные данные приняты за .100%). Символом Р обозначен критерий достоверности Стьюдента, характеризующий значимость различий. Величины Р <. 0,05 нринимаются за достоверны(э .

Актйвность пируватдегидрсген азы (мк моль K )(.е {Сй)< 1 на мг белка за

20 мин) в тканях белых мышей при введении различных антивитаминов B .

В табл. 2 представлены данные по токсичности описываемого соединения и окситиамина. как видно из данных табл. 1, описываемый 0-трифосфорный эфир 4-метил- ,. 6

792893 ватными антивитаминами тиамина - окснтиаминбм и пиритиамнном.

Сам тетрагидротиамин, его моно- и дифосфорный эфиры антивитаминной активностью практически не обладают после введения аивотным даме в очень высокой дозе f2).

Таблица 1 Окснтиамин Пиритиамин

Ткани

Контроль

0,12+ 0,01 0,13 й0,01 0,13 10,02

0,05 +0,01

Печень

100 108

Ог1

0,01

0,1

0,20 и 0,01 0,22 и 0,01 0,23 20,01

Сердце

0,12 «+ 0,01

100

115

110

0,01

0,1

Таблица 2

Токсичность ЛД мг/кг окситиамина и 0-трифосфор5О 1 1 ного эфира 4-метил-5-р-оксиэтил-И-(2 -метил-4

-аминопиримидил-5 -метил)--тетратиазолия полуФосфата

Исследуемый препарат Эффективная доза Д мг/кг

340 293 i 394

1. Окситиамин

2. 0-трифосфорный эфир 4-.

-метил-5 р -окснэтил й-(2 -метил-4 -амннопиримидил-5 -метил (-тетрагидротназолия полуфасфат

730 707 «+ 750 обладающий В -антивитаминной актив-.

+ иост ыо.

Источники информации, принятые во внимание прн экспертизе

1. Островский Ю.И. Антивитамины в экспериментальной н лечебной практике. Издательство ".Наука и техника".

Иинск, 1973.

55 2. Доста Г.A. и др. Иатериалы 5-ro

Гродненского симпозиума 20-22.09.78. с. 51, 55.

Формула изобретения

-5 Я -оксиэтнл- п -{2 -метил-4 -аминопиримьщил-5 метил}-тетрагидротнаеолия полуфосфат обладает почти в 2 раза более сильным антивйтаминным воздействием на пируватдегидрогеназу печени и сердца по сравнению с биологически неактивными в этой дозе из0-Трифосфорный эфир 4-метил-5 }

-оксиэтил-й-(2 -метил-4 -амннопнримндил-5 вЂ .метил)-тетрагидротиазолия . полуфосфат формулы о ин, сир;о+о-о-о-О-он

0-трифосфорный эфир

4-метил-5-P îêñèэтил-М-(2 -метил-4S 1 амннопиримидил-5 -метил}-тетрагидротназолия полуфосфат *

792893

mao

ВЮ

И0

7" 1ъ жо >>

ЫР йо +

5 Ю

Жо <

suо