Способ получения замещенного октагидро-1-( @ - меркаптоалканоил)- @ -индол-2-карбоновой кислоты или их фармацевтически пригодных солей

 

Способ получения замещенного октагидро-1(У-меркаптоалканоил)-1Н- -индол-2-кар6оновой кислоты общей формулы I г о COORi Rj-S-CHj-CH-C-Nгде R - водород или низший С. - С. - - алкил , R - метил; R - водород или R , где R низший С - С, алкил, или их фармацевтически пригодных солей , отличающийся тем, что этиловый или триметилсилиловый эфир октагидро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты ацилируют галоидангидридом кислоты общей формулы II RrQ-S-CH -CH-C-X Д 1 II О RO О R2 g О) с где R имеют указанные значения; X - хлор или бром, образовавшийся продукт или вьщеляют, или подвергают гидролизу основанием для получения соединений общей формулы I, где R и Rj - водород, и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде фармацевтически пригодных солей. го ни. О5 00 ) со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР пО ДелАм изОБРеТений и ОткРытий

Ф г, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /

4 Q /

К ПАТЕНТУ

8<-С-S-СН,-СН-С-Х

ii о в, о (21) 3339202/23-04 (22) 05.10.8 1 (31) 194 307 (32) 06.10.80 (33) US (46) 23.07.86. Бюл. Р 27 (71) Варнер Ламберт Компани (US) (72) Милтон Луис Хоуфл и Джордж Бобовски (US) (53) 54?.757.07(088.8) (56.) Патент США Р 4046,889, кл. 424-244, 1979.

Вейнганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химии. — H.:

Химия, 1968, с. 431. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАМЕЩЕННОГО

ОКТАГИДРО-1 †(W-МЕРКАПТОАЛКАНОИЛ) †1Н-ИНДОЛ-2-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИГОДНЫХ СОЛЕЙ (57) Способ получения замещенного октагидро-1(W-меркаптоалканоил)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты общей формулы I

„„SU „„1246893 А 3 (51)4 С 07 П 209/26, А 61 К 31/40 где R — водород или низший С вЂ” С

1 1 Э алкил; г — метил

R, — водород или R -С=О, где R низший С „— С, = алкил, Ь или их фармацевтически пригодных солей, отличающийся тем, что этиловый или триметилсилиловый эфир октагидро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты ацилируют галоидангидридом кислоты общей формулы II где R,è R имеют укаэанные значения;

Х вЂ” хлор или бром, образовавшийся продукт или выделяют, или подвергают гидролиэу основанием для получения соединений общей формулы ?, где R„ R, — водород, и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде фармацевтически пригодных солей.

1 1246893

Изобретение относится к области получения новых замещенных октагидро- Ь!

-1 †(W-меркаптоалканоил)-1Н-индол-2-карболовой кислоты общей формулы соотг где

Р;S CH2 — CH C,— Ú.

R — воцород или низший С вЂ” алкил;

R метил, О и

R — водород или R — С где R — низший С, — С вЂ” алкил .

4 - 1 Д

5 или их фармацевтически пригодных солей, обладающих противогипертоническим действием.

Целью изобретения является разработка на основе известного метода способа получения новых соединений, облацающих ценными фармакологическими свойствами.

Пример 1. Этил(2К,З Я,7K/)— — октагидро-1 — (3-(ацетилтио) --пропаноил ) -1Н-индол-2-карбоксилат.

Раствор 4,2 г (0,025 моль) 3-(ацетилтио)-ïðîèalloèëõëoðèäa в !0 мл дихлорметана вводится в течение 20 мин

1 в перемешанную смесь 4. 9 г (0,025 моль) рацемического этил-(2К, 3;l.1, 7lp)-октагидро-!Н-индол-2-карбоксилата и 4,0 г бикарбона.та натрия в 40 мл воды и 90 мл дихлорметана при охлаждении до 5-!О С. Через

40 мин отделяются две фазы, водную фазу зкстрагируют 50 мл дихлорметана.

Соединенные огранические экстракты промывают сначала разбавленной 0,01 н. серной кислотой, затем бикарбонатом натрия (0,01 н.) и затем водой. Органический слой отделяют и высушивают над сульфатом натрия. Растворитель удаляют в вакууме, в результате чего получается 5,8 г продукта в виде вязкой бесцветной жидкости, т.кип. 245247 С (при 753 мм рт.,ст.).

ИК-спектр (пленка) см : 1 745 (C=0 сложного эфира), 1690 (С=О Sацетила), 1643 (С=О амида)„ Тонкослойная хроматография (использование для элюирования смеси ацетонитрил— метанол в соотношении 2:1, использование адсорбента В О,): единственная точка Rf 0,3.

Вычислено, 7.: С 58,70; Н 7,70;

С, Н, NO S

Найдено„ i: С 58,17; Н 7,69;

<) N 4,00.

Этил («, ЗхЯ, 7ap ) — ок-а ецро-1Н вЂ” индол-2--карбоксилат, используемый в качестве исходного продукта в примере 1„ приготавливают следующим обра-! и =-ом. Раствор 100 г (0.53 моль) этилиндол-2-карбоксилата в 100 и;т абсолютного этанола и 32 мл концентр=.рованной серной кислоты поцвергаотся гидрогенизации при пропускании над

l5 родием наHpñåíIlûè на дреBес:ый у:-оль (4,0 г; 102), с использованием аппаратуры гидрогенизапии Паара, до тех пор,, пока не прекращается поглощение водорода (22 3 ч) . Катализатор удаля2б !lo . путем фильтрация, фильтрат вы. ари-! вают в вакууме. Остаточный сиропооб разный продукт выгаривания растворя-ют в ледяной воде, раствор нейтрализуют сначала карбонатом калия и затем

25 его подще.-. ачивают бикарбонатом калия.

Маслянистый осадок экстрагируют 300мл прос.ого диэтилового эфира, и водный с;.ой экстрагируют другой порцией диэтилового эфира в количестве 300 мл.

«б Соединенные эфирные экстракть: промывают насьпценным водным раствором хло-, ристого натрия, высушивают над сульфатом магния и выпаривают в вакууме, ь ре 1ультате чего получается 78,5 г з" ил(2<,,Зо .J, И ) -октагидро- Н вЂ” индол-2-карбоксилата в виде почти бесцветного масла высокой степени чистoTbl, Исходный водный слой насьпцают твердым хлоридом натрия и экстрагируют дважды 150 мл "- òèëaöåòàòà. Соединенные экстрак-..ы промывают небольшим коли-ьеством воды, высушивают над сульфатом натрия и вгппаривают в вакууме в результате чего пол« ; ется дополнительно 6,5 г продукта, ИК-спектр (пленка), см : 3450, 3300 (ИМ), 1732 (С=О сложного эфира), 1,4767. !

Данный материал является достаточно чистым,, так что сразу не может ис5б

;,îëü-оватъся для осуществгения пропесса согласно примеру 1.

Пример 2. (2,3,7j) †Октагидрс — 1-(3-меркаптопропаноил) — 1H-ичдол-2-карбоновая кислота„

Суспензию 2,0 г зтиг(2,36$,7 )— — окта гидро-1 — (3- (аце тилтио) -пропанои;: ) -1Н-испол-2-карбоксилата в 10 мл

1246893

10Х-ного водного раствора гидрата окиси натрия выдерживают при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. Образующийся в результате раствор подкиспяют путем добав- 5 ления ледяной уксусной кислоты до рН 6,0. Смолистый осадок экстрагируют двукратно 100 мл диэтилового эфира. Соединенные эфирные экстракты промывают насыщенным раствором хлори-10 да натрия, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают в атмосфере азота. После перемешивания остаточного продукта выпаривания с теплым ацетонитрилом и охлаждения получается 1 6 г 15 о

Э продукта, т.пл. 143-144 С. Путем перекристаллизации данного продукта из ацетонитрила получается высокочистый образец, т.пл. 145-146 С.

ИК-спектр (КВ r), см ": 2615 (SH), 20

1735 (СООН), 1597 (С=О амида) .

Вычислено, Е: С 56,02; Н 7,44;

N 5,44.

Найдено, 7: С 56,33; Н 7,46;

N 5,43.

Пример 3. (2,3gP,7 )-Октагидро-1 в (3 †(ацетилтио)-пропаноилj

-1Н-индол-2-карбоновая кислота.

A. 3-(Ацетилтио)-пропаноилхлорид 30 (4,2 r, 0,025 моль) добавляют по капо лям при температуре от -5 до С С к тщательно перемешанному раствору

4,2 г (0,025 моль) (2a,ЗКЯ,7oLP)-октагидро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты

35 и 6,0 r бикарбоната калия в 30 мл воды. Полученный раствор перемешивают еще в течение 45 мин при 0 С и затем добавляют 2 н. серную кислоту до рН 3,5. Маслянистый продукт растворя 40 ют в 150 мл диэтилового эфира, водный слой экстрагируют дополнительными 150 мл простого эфира. Соединенные эфирные экстракты промывают насыщенным раствором хлористого натрия, вы- 15 сушивают над сульфатом натрия и кон-, центрируют до остаточного объема примерно 40 мл, после охлаждения которого получается 2,4 г высокочистых белых кристаллов, т.пл. 103-104 С. gp

После концентрирования фильтрата с последующим разбавлением теплым изопропиловым простым эфиром получается дополнительно 2,9 r данного продукта, 0 т.пл. 103-104 С. После перекристаллизации из этилацетата получается другая возможная кристаллическая форма продукта, т.пл. 131 †1 С.

HK-спектр (КВ г), см ": 1742 (СО.,Н), 1689 (0=OS-ацетила); 1648, 1592 (С=-О амида).

Вычислено, 7: С 56,17; Н 7 07;

N 4,68.

Найдено, 7: С 56,4 1; H 6,94;

М 4,60.

Исходная (21,3 1,7

Раствор 2,0 r (0,01 моль) этил(2Ы, З Я,7/P)-октагидро-1Н-индол-2-карбо"силата в 25 мп 157.-ной соляной кислоты нагревают с обратным холодильником в течение 4 ч и затем выпаривают досуха в вакууме.

Беловатый осадок перекристаллизовывают из смеси ацетонитрил-этилацетат (в соотношении 3:1), в результате чего получается 1,7 г аналитически чистого продукта в виде хлористоводородной соли, т.пл. 186-187 С (плавление с разложением). В результате концентрирования фильтрата до небольшого остаточного объема и последующего охлаждения получается дополнительно 0,2 г продукта, т.пл.184186 С.

Свободная кислота получается путем растворения 1,2 r хлористоводородной соли в 10 мл воды и добавления 2 н. хлористоводородной соли до рН 6,5.

Полученный раствор выпаривают досуха при пониженном давлении во вращающемся выпарном аппарате при температуре бани 35 С. Остаточный продукт выпаривания нагревают с обратным холодильником вместе с 50 мл ацетонитрила и фильтруют в горячем состоянии.

Раствор концентрируют до остаточного объема примерно 10 мл и охлаждают, в результате чего получается 0,5 г продукта, т.пл. 239-240 С (плавление с разложением).Тонкослойная хроматография (с использованием для элюирования метанола СН1CN и в качестве адсорбента SiO показывает одну един2 ственную точку: Rf 0,4).

Вычислено, Е: С 63,88; Н 8,94;

N 8,28.

Найдено, Е: С 64,13; li 8,83;

N 6,17.

Б. (2d,ЗК, 7dP) -Октагидро-1 — (3— (ацетилтио) -пропаноил j — 1fl-индол-212468

-карбоновая кислота может быть также получена следующим образом. Смесь (2К,31,716)-октагидро-1Н-индол-2-карболовой кислоты (3,0 r, 0,0177 моль), гексаметилдиелазана с (3,0 г, 0,0186 моль) и одной капли хлорметилсилана в 10 мл ацетонитрила нагревают с обратным холодильником в течение 3 ч. Образующийся в результате раствор охлаждают в ледяной бане 10 и добавляют к нему по каплям раствор 2,9 г (0,0177 моль) 3-(ацетилтио)-пропаноилхлорида в 5 мл ацетонитрила. 15 мл пробы, содержащей ацетонитрил и летучие, отгоняют при атмосфер- 1 > ном давлении. Раствор охлаждают и фильтруют, а затем концентрируют при пониженном давлении, удаляя оставшийся.растворитель, в результате чего получается масло, которое отвержда-. 2() ется при выдержке. Остаток растворяют в 60 мл кипящего этилацетата. Раствор фильтруют и охлаждают, в результате чего получается 3,0 г желаемого продукта, т.пл. 131-133 С.

2с;

Пример 4. Зткл(2К3, 7a P)—

-октагидро-1- (3-(ацетилтио) -2-метилпропанол J -1Н вЂ” индол-2-карбоксилат.

По примеру 1, используя в качестве исходных продуктов этил (2(,ЗК, 30

7 1)-октагидро-1Н-инцол-2-карбоксилат и 3-(апетилтио)-2-метилпропаноилхлорид, получают этил -(2<,ЗК, 7k/ )—

-октагидро-1 в 13-(ацетилтио)-2-метилпропаноил ) -1Н-индол-2-карбоксилат, представляющий собой вязкое масло, т .кип . 261 С (при 748 мм рт .ст .) .

НК-спектр (пленка), см . 1742 (Ссс0 сложного эфира), 1690 (С=О S— ацетила), 1640 (С=О амида). Танко-,Н слойная хроматография (с использовав нием в качестве элюента апетонитрила и в качестве адсорбента SiO ) показы2 вает одну точку: Pf 0,6.

Вычислено,7: С 59,81; H 7,97; N 4,10,,1

Найдено, Z: С 59,55; Н 7,86;

N 4,04.

Пример SA ° (2,3

Раствор 2,05 r (0,01 моль) хлоргидрата (2,3jfj 7<))-октагидро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в 15 мл без- i5 водного пиридина .перемешивают при

О С при одновременном добавлении по каплям в течение 10 мин 1,81 г

93 Ь (О, О . моль) 3-(ацетилтио) -2-метилпроланоилхлорида. Премешивание продолжается в течение 2 ч, затем величину рН раствора доводят до 3,5. путем медленного добавления 15Е-ной серной кислоты. Образующийся осадок растворяют I 100 мл Диэтилово1о эфира, воД ную фазу экстрагируют дополнительно

100 мл простого эфира. Соединенные эфирные экстракты промывают насыщенным рВсТВороМ хлорида натрия, высушивают над сульфатом натрия, затем концентрируют до остаточного обьема

15 мл. После выдержки в течение ночи и после фильтрации получается 1,4 г белых кристаллов, т.пл. 165-167 С.

После перекристаллизации из циклогексана--этилацетата (1:1) получается

0,9 г нысокочистого диастереоиэомера A т,пл. 168,5-170 С.

НЕ-спектр (КВ т), см : 1742 (COOH)

1689 (С-=О S-ацетила), 1648, 1592 (С=О амида) .

Вычислено, Х: С 57,49, Н 7,40;

I 4,47.

Нслйдено, 7: C 5733; FI 7, 15;

М 4,36.

Пример 5 Б. (21,346,7K))-Ок- àãèäðî -1- (3-(ацстилтио)-2-метилпропаноил)-1Н-инцол-2-карбоновая кислота,, диастереизомер Б.

После получения путем фильтрации диастереизомера А в исходный фильтрат вводят 20 мл изопропилового эфира, раствор концентрируют до остаточного объема 15 мл. При охлаждении получае;.ся дополнительно О,/ I желаемого градукта, т,пл. 135- l37 С, Б результате фракционировàFIHQH кристаллизации поочередно из гексана и этилацетата получается чистый образец диастереоизомера Б в виде белого твердого вещества, т.пл. 151 †1,5 С.

П р и и е р 6А. (21318, 7а!ф)-Октагидро-1-(3-меркапто-2-метилпропаноил,1 — 1H- индол-2-карбононая кислота, диас .Тереоизомер А. (ZcC, 3<р, 71(ф) -Октагидро-1 в (3-(ацетилтио) -Z-метилпропаноил j — 1Н-индолвЂ.2-карболовую кислоту (диастереоизомер А, в к.оличестве 1,0 г растворяют в 5 н. растворе аммиака в метаноле при комнатной -емпературе в атмосфере азота. Раствор перемешивают в течение 2,5 ч и затем растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаточный продукт растворяют в воде, 7 1246 подкисляют 107-ным раствором бисульфита калия и экстрагируют этилацетатом. После сушки (с использованием сульфата магния) и выпаривания органического слоя получается диастереоизомер А желаемого продукта, который очищают путем кристаллизации от этилацетата. Чистый изомер А имеет т.пл. 155-156 С.

Пример 6Б. (2К,ЗК),7/P)-Ок- 10 тагидро-1-(3-меркапто-2-метилпропаноил)-IН-индол-2-карбоновая кислота, диастереоизомер В.

Осуществляя процесс по примеру

5Б, получают диастереоизомер В (2К, 15

ЗЫЯ,уф)-октагидро-1 †(3-меркапто-2-метилпропаноил)-IН-индол-2-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества, т.пл. 141-142 С. (21,3/g,7КР ) — Октагидро-1 †(3 †м- 20 капто-2-метилпропаноил)-IН-индол-2-карбоновую кислоту (5 мг) растворяют в растворе воды (2,5 мл) и эквивалентного количества 1 н. гидрата окиси натрия. Раствор высушивают при 25 о температуре ниже 0 С, получается натриевая соль. (2К,ЗКф,7MP) -Октагидро-1 †(3-меркапто-2-метилпропаноил) -1Н-индол-2-карбоновую кислоту (5 мг), окись З0 магния (49,5 мг) и воду (10 мл) пер"мешивают при слабом нагревании до полного растворения. Затем растворитель удаляют путем сушки при темпеа ратуре ниже О С, получается магниевая соль. (21,3К,7КP)-Октагидро-1-(З-меркапто-2-метилпропаноил)-IH-индол-2-карбоновую кислоту (5 мг) растворяют в смеси гидрата окиси кальция (91 мг) и воды (10 мл) и раствор высушивают при температуре ниже О С, в результате чего получается кальциевая соль. (2 Ы,ЗК,70/)-Октагидро-1 †(3-мер- 45 капто-2-метилпропаноил)-IН-индол-2-карбоновую кислоту (5 мг) растворяют в смеси эквивалентного количества бикарбоната калия и воды (10 мл) и подвергают сушке при температуре ниже 0

0 С, в результате чего получается калиевая соль.

Пример 7. (1.) =(21,3К,Р,7К )—

-Октагидро-1 в (3-(ацетилтио)-пропаноилj — IН-индол-2-карбоновая кислота.55

Осуществлял процесс по примеру 3, (1.) =.(2К,3 ),7 P)-октагидро-IН-индол-2-карбоновую кислоту превращают

893

8 в (1.) = (2к, ЗКр, 71 ) -октагидро-1 — (3— (ацетилтио) -пропаноил f — I Н-индол-2—

-карбоновую кислоту, имеющую т.пл.

110-112 С f

Пример 8. (1.) =("/,3Êß,7КЯ)—

-Октагидро-1-(3-меркаптопропаноил)—

-IН-индол-2-карбановая кислота.

Осуществляя процесс по примеру

6A, (L)-(2K,3К 1,7К )-октагидро-1 в (3†(ацетилтио)-пропаноил) — IН-индол-2-карбоновую кислоту превращают в (1)-. — (2К,З ., 7К ) -октагидро-1 — (3-меркаптопропаноил) — IН-индол-2-карбоновую о кислоту, имеющую т.пл. 168,5 — 170 С, (aL) 1, = — 68, 5 (С= I, метанол) .

Пример 9. (1.) — (2К,ЗКВ,7(4,p)—

-Октагидро-1- (3-(бензоилтио)-2-метилпропаноил-1Н-индол-2-карбоновая кислота, диастереоизомер А.

Раствор 1,8 r (L) †(2 К,ЗК,7д )—

-октагидро-IН-индол-2-карбоновой кислоты и 2,5 г пнридина в 20 мл тетрао гидрофурана охлаждают до 0-5 С и добавляют по каплям (L) †3 †(бензоилтио)—

-2-метилпропионилхлорид. Смесь перео мешивают в течение 2 ч при 0-5 С, затем концентрируют, удаляя растворитель. Остаточный продукт концентрирования обрабатывают водой, подкисляют 6 н. серной кислотой и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором хлорида натрия, высушивают (с использованием сульфата магния) и концентрируют досуха. Остаток концентрирования, который частично кристаллизуется, перемешивается с этилацетатом и фильтруется, в результате чего отделяется желаемый продукт. Этот продукт очищают путем перекристаллизации из этилацетата он имеет т.пл. 184,5

185,5 С (ri) „ = — 135,6 (С = 1, метанол).

Пример 10. Дициклогексил— аминовая соль (L)-(2К,ЗКJ .,7rEP )-октагидро-1-(3-меркапто-2-метилпропаноил) — IН-2-карбоновой кислоты (диастереоизомера А) .

Осуществляя процесс по примеру

6А, но используя (L) †(2Ы,ЗКP,7КP)—

-октагидро-1 в (3 (бензоилтио)-2-метилпропаноил ) — I Н вЂ” 2-карболовую киСлоту (диастереоизомер А) вместо (2К, 3, 7КЯ ) -октагидро-1- (3 — (ацетилтио)—

-2-метилпропаноил)-!H-<» boa-2-карбоновой кислоты, получак т (1.) -(2К,3yf, 7Кф)-октагидро-1 †(3 — меркапто — 2-метилпропаноил) — 18-2 †карболов кислокислоты

R R R Диастереоизомер Молярная концент3.,! рация LC

6,7 х 106

1,6 х 10

1,6 х 1()

1,1х10

7,0 х 10

5,2 х !О

1,7х 10

С Н

СН CH СО

CCH HCCH

СНз CH300

dI, Б

dl А

d1, А з з з

СН СН СН, СО з (з)з

CCHHç

d1, А

5,2 х 10

I, А

Величина LC,, является молярной концентрацией, которая ингибирует

50Х конверсии ангиотензина I в ангиотепзин II, и для полученных соединений значительно лучше, чем для каптоприла, для которого равна 2 х 10

П р и м е ч а н и е.

БНИИПИ Заказ 4029/59

Тираж 379 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 9 12468 ту. Данный продукт очищают, получая дициклогексиламиновую соль,,т.пл.

145-148 С, t К) > = — 53,5" (C=i, ме танол) .

Предлагаемые соединения могут 5 быть использованы для снижения кровяного давления.

Действие фермента ренина на ангиотензиноген, псевдоглобулин в кровяной плазме, приводит к образованию 10 цекапептидного ангиотенэина Х. Ангиотенэин I превращается под действием фермента превращения ангиотеэина (АСЕ) в октапептидный ангиотензин II.

Последний является активным вещест- 15 вом, повышающим кровяное давление, и.

t причиной различных форм гипертомии у различных мпекопитающих животных, например, крыс и собак.

Предлагаемые соединения принимают участие в последовательности процессов ренин — я.ангиотензин Т -э- ангиотензин II> ингибируя фермент превращения ангиотензина I и устраняя об2! разование ангиотензина II, вещества, вызывающего повышение кровяного давления, а следовательно, эти соединения являются ценными веществами, сни93

10 жающими или полностью снимающими повышенное давление.

В таблице показана активность соединений формулы(1) в условиях ч13)"o или испытании на ингибирующеедействие фермента превращения антиотензита.

)Лспытание ACE в условиях vitro.

Ингибирующее действие фермента превращения ангиотензина (ACE) определя ют путем испытания АСЕ сыворотки морских свинок в присутствии и в отсутствие испытуемого соединения. АСЕ . из сыворотки морских свинок и испытуемые соединения предварительно выдерживают в термостате в течение 10 мин, после чего вводят меченый субстрат

3-гиппурил-глицилглицин. После вью держки в термбстате при 37 С в течение (з0 мин реакция прекращается пу eM ввода 0,1 н. НС1. АСЕ расщепляет гиппурил-глициловую связь, в резуль-, тате чего образуются глицилглицин и

ЗН вЂ” гиппуровая кислота. 3H — гиппуровую кислоту затем зкстрагируют этилацетатом,, и ингибирование АСЕ данного образца рассчитывают, исходя иэ ко— личесTB,3 образующейся ЗН-гиппуровой