Способ количественного определения антоцианов в лекарственном растительном сырье



Способ количественного определения антоцианов в лекарственном растительном сырье
Способ количественного определения антоцианов в лекарственном растительном сырье
Способ количественного определения антоцианов в лекарственном растительном сырье

 


Владельцы патента RU 2557953:

государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа антоцианов в таком лекарственном растительном сырье, как плоды черники обыкновенной, аронии черноплодной, смородины черной и т. д. Предлагаемый способ количественного определения антоцианов включает извлечение антоцианов из лекарственного растительного сырья водно-спиртовыми смесями, содержащими 0,5-1,0% кислоты хлороводородной, с концентрацией спирта этилового не менее 70% и определение количественного содержания антоцианов по оптической плотности в 95% этиловом спирте, содержащем 0,5% аммиака, на фоне раствора сравнения при аналитической длине волны максимума поглощения в диапазоне 611-630 нм с использованием раствора стандартного образца цианидина-3-O-глюкозида или с использованием значения его удельного показателя поглощения в 95% этиловом спирте, содержащем 0,5% аммиака. Техническим результатом является повышение чувствительности и воспроизводимости результатов определения, а также уменьшение продолжительности выполнения анализа по сравнению с прототипом. 3 ил,. 7 пр.

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа антоцианов в лекарственном растительном сырье: плоды черники обыкновенной, аронии черноплодной, смородины черной и т.д.

Действующая система контроля качества требует постоянного усовершенствования подходов к стандартизации биологически активных соединений (БАС) с использованием современных методов анализа и актуальных данных об их свойствах, позволяющих дифференцированно определять конкретные группы БАС.

Антоцианы представляют собой широко распространенную группу природных БАС, обладающих антиоксидантными, вазопротективными, антикоагуляционными свойствами, способностью улучшать микроциркуляцию, трофику сетчатки глаза, а также в некоторых исследованиях in vitro показавших противоопухолевую активность (1,2).

Антоцианы относятся к флавоноидам и по химической природе являются гликозилированной формой гидрокси- и метоксизамещенных производных 2-фенилхромена (антоцианидинов) (рис. 1) (3). Для антоцианов известна способность менять свою окраску в зависимости от значения pH среды. В кислой среде (pH<3) они присутствуют в растворе в виде бензопирилиевых солей красного цвета. При повышении pH (4-5) происходит присоединение гидроксильной группы во втором положении с образованием бесцветного псевдооснования. При pH 6-7 образуются феноляты синего цвета. При pH более 8,0 происходит размыкание хроменового цикла и образуется соответствующий халкон(4).

Известен pH-дифференциальный метод количественного определения, основанный на способности антоцианов изменять свой цвет в зависимости от значения pH. Он основан на измерении оптической плотности раствора при pH 1,0 и pH 4,5. Указанные значения pH создаются использованием буферных растворов (5). Однако данный метод характеризуется высокой трудоемкостью, особенно в процессе пробоподготовки на стадии приготовления буферных растворов. Также нами был отмечен в ходе воспроизведения данной методики ряд ограничений, в частности для некоторых анализируемых проб образование опалесцирующего раствора при доведении до метки буферным раствором, возможно, вследствие замены растворителя. С легкой опалесценцией может быть связано завышение оптической плотности, что в дифференциальном варианте исполнения может обусловливать занижение полученных результатов.

Таким образом, целью изобретения является разработка нового способа количественного определения антоцианов.

Техническим результатом является повышение чувствительности и воспроизводимости, уменьшение продолжительности и стоимости способа количественного определения антоцианов в лекарственном растительном сырье.

Технический результат достигается тем, что способ осуществляют путем извлечения антоцианов из лекарственного растительного сырь водно-спиртовыми смесями, содержащими 0,5-1,0% кислоты хлороводородной с концентрацией спирта этилового не менее 70% и определения количественного содержания антоцианов по оптической плотности в 95% этиловом спирте, содержащем 0,5% аммиака, на фоне раствора сравнения при аналитической длине волны максимума поглощения в диапазоне 611-630 нм с использованием раствора стандартного образца цианидина-3-глюкозида или с использованием значения его удельного показателя поглощения в 95% этиловом спирте, содержащем 0,5% аммиака.

При анализе известных решений в научной литературе не было обнаружено результатов исследований по количественной оценке антоцианов в выбранном нами направлении и соответственно сведений о влиянии параметров экстракции, пробоподготовки на достижение технического решения.

Возможно исполнение предлагаемого способа с применением стандартного образца цианидина-3-О-глюкозида, что повышает точность анализа с учетом конкретных условий проведения испытания, либо при отсутствии образца с использованием в расчетной формуле его удельного показателя поглощения в 95% этиловом спирте, содержащем 0,5% аммиака.

Способ осуществляют следующим образом. Получают извлечение из антоциансодержащего лекарственного растительного сырья в оптимальных условиях. Рекомендуется использовать водно-спиртовые смесей с концентрацией спирта этилового не менее 70% и содержащих 0,5-1,0% кислоты хлороводородной. Отбирают две одинаковые аликвоты и помещают в две мерные колбы, в одной из которых объем раствора до метки доводят 95% спиртом этиловым - раствор сравнения, в другой - 95% спиртом этиловым, содержащим 0,5% аммиака, - испытуемый раствор. Растворы перемешивают и в течение 1 мин измеряют оптическую плотность полученных растворов в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм при длине волны, соответствующей максимальной разнице оптической плотности между пробой в растворе аммиака и исходным раствором (рис. 2).

В случае использования стандартного образца параллельно измеряют оптическую плотность цианидина-3-О-глюкозида в тех же условиях.

Приготовление раствора цианидина-3-О-глюкозида: точную навеску стандартного образца циианидина-3-глюкозида в количестве около 0,02 г помещают в мерную колбу на 50 мл, растворяют в спирте метиловом, содержащем 1% хлороводородной кислоты, доводят растворителем до метки и перемешивают, 5 мл полученного раствора помещают в колбу на 25 мл, доводят 95% спиртом этиловым, содержащим 1% хлороводородной кислоты, перемешивают. По 2 мл полученного раствора помещают в мерные колбы вместимостью 25 мл, в одной из них объем доводят до метки 95% спиртом этиловым, в другой - 0,5% раствором аммиака в 95% спирте этиловом.

Измеряют оптическую плотность в течение 1 мин после приготовления раствора при аналитической длине волны в диапазоне 611-630 нм в зависимости от длины волны максимума поглощения исследуемого объекта.

При использовании стандартного образца расчет результатов количественного определения суммы антоцианов в пересчете на цианидин-3-О-глюкозид проводят по формуле:

где:

Ах - оптическая плотность испытуемого раствора;

Ast - оптическая плотность раствора стандартного образца;

mx - точная навеска анализируемого образца;

mst -точная навеска цианидин-3-О-глюкозида;

ах - аликвота анализируемого раствора;

V1 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья.

При отсутствии стандартного образца рассчитывают с учетом удельного показателя поглощения цианидина-3-О-глюкозида:

где:

Ах- оптическая плотность испытуемого раствора;

mx - точная навеска анализируемого образца;

ах - аликвота анализируемого раствора;

V1 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья; 250 - удельный показатель поглощения цианидина-3-О-глюкозида. Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Определение антоцианов в плодах черники обыкновенной свежих Vaccinium myrtillus L., семейство Вересковые - Ericaceae, с использованием раствора стандартного образца цианидина-3-О-глюкозида.

Около 1,0 сырья (точная навеска) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл 95% этилового спирта, содержащего 1% хлороводородной кислоты. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 30 мин. Затем закрывают той же пробкой, охлаждают до комнатной температуры. После чего колбу снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр и содержимое перемешивают.

5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят 0,5% раствором аммиака в 95% спирте этиловом до метки. В качестве раствора сравнения используют раствор, приготовленный при тех же условиях, но доведенный до метки 95% спиртом этиловым. Оптическую плотность измеряют в течение 1 мин после приготовления раствора при аналитической длине волны 623 нм.

Рассчитывают количественное содержание по формуле:

где:

Ах=0,7382 - оптическая плотность испытуемого раствора;

Ast=0,1808 - оптическая плотность раствора стандартного образца;

mx=1,2263 - точная навеска анализируемого образца;

mst=0,0226 - точная навеска цианидина-3-О-глюкозида;

ах=5 - аликвота анализируемого раствора;

V1=25 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2=50 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья.

Испытание проведено в нескольких повторностях. Все данные были статистически обработаны. Содержание антоцианов составило 0,60±0,02%. Относительная ошибка метода составила ±3,33%. При количественном определении антоцианов с использованием pH-дифференциальной спектрофотометрии содержание антоцианов в пересчете на цианидин-3-О-глюкозид составило 0,61±0,03%, относительная ошибка метода±4,92%.

Пример 2. Определение антоцианов в плодах черники обыкновенной свежих Vaccinium myrtillus L., семейство Вересковые - Ericaceae, с использованием значения удельного показателя поглощения цианидина-3-О-глюкозида.

Определение проводят аналогично примеру 1. Далее содержание рассчитывают по формуле:

где:

Ах=0,7382 - оптическая плотность испытуемого раствора;

mx=1,2263 - точная навеска анализируемого образца;

ах=5 - аликвота анализируемого раствора;

V1=25 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2=50 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья;

250 - удельный показатель поглощения цианидина-3-О-глюкозида.

Испытание было проведено в нескольких повторностях. Все данные были статистически обработаны. Содержание антоцианов составило 0,60±0,02%.

Пример 3. Определение антоцианов в плодах черники обыкновенной воздушно-сухих Vaccinium myrtillus L., семейство Вересковые - Ericaceae, с использованием раствора стандартного образца цианидина-3-О-глюкозида.

Около 1,0 сырья (точная навеска) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл 95% этилового спирта, содержащего 1% хлороводородной кислоты, 5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят 0,5% раствором аммиака в 95% спирте этиловом до метки (испытуемый раствор А). Далее процесс проводят в соответствии с примером 1. Оптическую плотность измеряют в течение 1 мин после приготовления раствора при аналитической длине волны 627 нм. Расчет проводят на абсолютно сухое сырье.

Рассчитывают по следующей формуле:

где:

Ах=0,381 - оптическая плотность испытуемого раствора;

Ast=0,1808 - оптическая плотность раствора стандартного образца;

mx=1,2340 - точная навеска анализируемого образца;

mst=0,0226 - точная навеска цианидина-3-О-глюкозида;

ах=5 - аликвота анализируемого раствора;

V1=25 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2=50 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья;

W - влажность сырья, %.

Испытание проведено в нескольких повторностях. Все данные были статистически обработаны. Содержание антоцианов составило 0,325±0,009%. Относительная ошибка метода составила ±2,77%. При количественном определении антоцианов с использованием pH-дифференциальной спектрофотометрии содержание антоцианов в пересчете на цианидин-3-О-глюкозид составило 0,312±0,123%, относительная ошибка метода ±3,85%.

Пример 4. Определение антоцианов в плодах аронии черноплодной свежих Aronia melanocarpa (Michx.) Elliott., семейство Розоцветные - Rosaceae, с использованием раствора стандартного образца цианидина-3-О-глюкозида.

Около 1,0 сырья (точная навеска) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл 95% этилового спирта, содержащего 1% хлороводородной кислоты. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01 г. Далее процесс повторяют в соответствии с примером 1.

2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят 0,5% раствором аммиака в 95% спирте этиловом до метки. В качестве раствора сравнения используют раствор, приготовленный при тех же условиях, но доведенный до метки 95% спиртом этиловым. Оптическую плотность измеряют непосредственно в течение 1 мин после приготовления раствора при аналитической длине волны 617 нм.

где:

Ах=0,1362 - оптическая плотность испытуемого раствора;

Ast=0,1808 - оптическая плотность раствора стандартного образца;

mx=1,0256 - точная навеска анализируемого образца;

mst=0,0226 - точная навеска цианидина-3-О-глюкозида;

ах=2 - аликвота анализируемого раствора;

V1=25 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2 - 50 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья.

Испытание проведено в нескольких повторностях. Все данные были статистически обработаны. Содержание антоцианов составило 0,332±0,010%. Относительная ошибка метода составила ±2,92%. При количественном определении антоцианов с использованием pH-дифференциальной спектрофотометрии содержание антоцианов в пересчете на цианидин-3-О-глюкозид составило 0,342 ±0,011%, относительная ошибка метода ±3,31% (рис. 2).

Пример 5. Определение антоцианов в плодах аронии черноплодной свежих Aronia melanocarpa (Michx.) Elliott., семейство Розоцветные - Rosaceae, с использованием значения удельного показателя поглощения цианидина-3-О-глюкозида.

Процесс проводят аналогично примеру 4. Далее рассчитывают содержание антоцианов с использованием значения удельного показателя поглощения:

где:

Ах=0,1362 - оптическая плотность испытуемого раствора;

mx=1,0256 - точная навеска анализируемого образца;

ах=2 - аликвота анализируемого раствора;

V1=25 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2=50 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья;

250 - удельный показатель поглощения цианидина-3-О-глюкозида.

Испытание было проведено в нескольких повторностях. Все данные были статистически обработаны. Содержание антоцианов составило 0,332±0,010%.

Пример 6. Определение антоцианов в цветках василька синего Centaurea cyanus L., семейство Сложноцветные - Compositae, с использованием раствора стандартного образца цианидина-3-О-глюкозида.

Около 1,0 сырья (точная навеска) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл 95% этилового спирта, содержащего 1% хлороводородной кислоты. Далее процесс проводят в соответствии с примером 4. Оптическую плотность измеряют в течение 1 мин после приготовления испытуемого раствора при аналитической длине волны 622 нм. Расчет проводят в пересчете на абсолютно сухое сырье по формуле:

где:

Ах=0,2748 - оптическая плотность испытуемого раствора;

Ast=0,1808 - оптическая плотность раствора стандартного образца;

mx=0,9662 - точная навеска анализируемого образца;

mst=0,0226 - точная навеска цианидина-3-О-глюкозида;

ах=2 - аликвота анализируемого раствора;

V1=25 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2=50 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья;

W - влажность сырья, %.

Испытание проведено в нескольких повторностях. Все данные были статистически обработаны. Содержание антоцианов составило 0,79±0,02%. Относительная ошибка метода составила ±2,67%. При количественном определении антоцианов с использованием pH-дифференциальной спектрофотометрии содержание антоцианов в пересчете на цианидин-3-О-глюкозид составило 0,61±0,03%, относительная ошибка метода ±4,92%.

Пример 7. Определение антоцианов в плодах смородины черной воздушно-сухих Ribes nigrum L., семейство Крыжовниковые - Grossulariaceae, с использованием раствора стандартного образца цианидина-3-О-глюкозида.

Около 1,0 сырья (точная навеска) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл 95% этилового спирта, содержащего 1% хлороводородной кислоты. Далее процесс проводят в соответствии с примером 1. Оптическую плотность измеряют в течение 1 мин после приготовления анализируемого раствора при аналитической длине волны 626 нм. Расчет проводят в пересчете на абсолютно сухое сырье по формуле:

где:

Ах=0,1632 - оптическая плотность испытуемого раствора;

Ast=0,1808 - оптическая плотность раствора стандартного образца;

mx=1,1702 - точная навеска анализируемого образца;

mst=0,0226 - точная навеска цианидина-3-О-глюкозида;

ах=5 - аликвота анализируемого раствора;

V1=25 - объем мерной колбы для разведения извлечения из растительного сырья;

V2=50 - объем извлечения из лекарственного растительного сырья;

W - влажность сырья, %.

Испытание проведено в нескольких повторностях, все данные статистически обработаны. Содержание антоцианов составило 0,155±0,004%, относительная ошибка метода ±2,58%. При количественном определении антоцианов с использованием pH-дифференциальной спектрофотометрии содержание антоцианов в пересчете на цианидин-3-О-глюкозид составило 0,065±0,004%, относительная ошибка метода ±6,15%.

Таким образом, предлагаемый способ количественного определения суммы антоцианов в лекарственном растительном сырье разработан впервые для анализа данной группы БАС и обладает следующими преимуществами (рис. 3).

1. Практически не учитывает вклад других соединений (основан на известной для антоцианов способности окрашиваться в синий цвет в щелочной среде).

2. Характеризуется меньшими временными и финансовыми затраты при выполнении анализа по сравнению с прототипом.

3. Характеризуется меньшей ошибкой единичного определения метода для рассматриваемых примеров.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:

1. Cyanidin 3-Glucoside and Peonidin 3-Glucoside Inhibit Tumor Cell Growth and Induce Apoptosis In Vitro and Suppress Tumor Growth In Vivo / Pei-Ni Chen et al. // Nutrition And Cancer. - 2005. - Vol. 53, №2. - P. 232-243.

2. Kowalczyk, E., Krzesinski P., Kura M., Szmigiel В., Blaszczyk J. Anthocyanins in medicine. - Pol. J. Pharmacol. - 2003. - Vol. 55. - P. 699-702.

3. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов / Изд. 2-е, перераб. и доп.- Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. - 1239 с.

4. Rein, М. Copigmentation reactions and color stability of berry anthocyanins: Academic dissertation / Maarit Rein. - Helsinki. - 2005. - 88+34 pp.

5. Giusti, M.M. Characterization and measurement of anthocyanins by UV-visible spectroscopy. Unit F1.2 / M.M. Giusti, R.E. Wrolstad, S.J. Schwartz (Ed.). -Current Protocols in Food Analytical Chemistry». - John Wiley & Sons, Inc. New York, NY. Pp. F1.2.1-F1.2.13.

Способ количественного определения антоцианов в лекарственном растительном сырье с помощью спектрофотометрии, отличающийся тем, что способ осуществляют путем извлечения антоцианов из лекарственного растительного сырья водно-спиртовыми смесями, содержащими 0,5-1,0% кислоты хлороводородной, с концентрацией спирта этилового не менее 70% и определения количественного содержания антоцианов по оптической плотности в 95% этиловом спирте, содержащем 0,5% аммиака, на фоне раствора сравнения при аналитической длине волны максимума поглощения в диапазоне 611-630 нм с использованием раствора стандартного образца цианидина-3-O-глюкозида или с использованием значения его удельного показателя поглощения в 95% этиловом спирте, содержащем 0,5% аммиака.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению ингибиторов адгезии и/или агрегации тромбоцитов, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем с использованием матрицы кДНК слюнной железы Anopheles stephensi получают полипептид, который используют в составе фармацевтической композиции и в наборах для скрининга ингибиторов адгезии или агрегации тромбоцитов.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа флавоноидов в лекарственном растительном сборе «Желчегонный сбор №3».

Изобретение относится к аналитической химии и фармацевтике и может быть использовано при анализе остаточного содержания новокаина в водных средах. Способ извлечения новокаина из водных растворов включает приготовление водно-солевого раствора новокаина путем его растворения в насыщенном растворе высаливателя, экстракцию и анализ равновесной водной фазы, при этом в качестве экстрагента применяют раствор сольвотропного реагента в хлороформе с концентрацией 10 мас.%, для чего готовят водно-солевой раствор новокаина с pH 8,0±0,5 вследствие применения в качестве высаливателя насыщенного раствора сульфата аммония и добавления аммонийного буферного раствора, экстрагируют новокаин в течение 5-7 мин раствором сольвотропного реагента в хлороформе при соотношении объемов водно-солевого раствора новокаина и экстрагента 5:1, далее отделяют водно-солевую фазу от органической и анализируют методом УФ-спектрофотометрии при длине волны 291 нм, по градуировочному графику находят концентрацию новокаина в водном растворе; рассчитывают коэффициент распределения (D) и степень извлечения (R, %) новокаина по формулам.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в системе контроля за содержанием тиосульфата натрия в растворах. Способ определения тиосульфата натрия в растворах характеризуется введением анализируемой пробы в реакционный сосуд, содержащий соответствующее количество фотогенерированного йода, полученного путем продувания 1-2 минуты воздухом и облучения стабилизированным источником света реакционной смеси, состоящей из 0,5 М раствора йодида калия, ацетатного буферного раствора с pH 5,6 и сенсибилизатора эозината натрия, фиксированием изменения тока в ячейке и по достижении его постоянства повторным продуванием реакционной смеси воздухом в течение 2-3 минут и повторным ее облучением стабилизированным источником света до достижения исходного количества йода в сосуде, фиксированием времени генерации йода, затраченного на восполнение его убыли, определением количества тиосульфата натрия по градуировочному графику по изменению силы тока и времени генерации.

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения липоевой кислоты в биологически активных добавках методом катодной вольтамперометрии, включающий перевод вещества из пробы в раствор и вольтамперометрическое определение, при этом проводят катодную вольтамперометрию на ртутно-пленочном электроде при потенциале -0.373 В относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода на фоне боратного буферного раствора pH 9,18 при постоянно токовой форме развертки потенциала со скоростью 0,06 В/с с областью определяемых содержаний липоевой кислоты от 4.5·106 до 1.1·10-3 моль/л.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано при определении фунгицидной активности химических препаратов в отношении грибов рода Fusarium - возбудителей болезней растений.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и представляет собой способ доклинических исследований кардиотропных антиаритмических средств, включающий определение биоэлектрических параметров в изолированных многоклеточных перфузируемых препаратах и оценку изменения длительности потенциалов действия, отличающийся тем, что в качестве изолированных многоклеточных перфузируемых препаратов используют миокард легочных вен крысы, причем изменения параметров получают в трех режимах работы многоклеточных препаратов, дополнительно оценивают потенциал покоя и по изменениям ДПД 90%, отношения ДПД 50%/ДПД 90%, скорости спонтанного сдвига потенциала покоя, наиболее положительного значения мембранного потенциала в покоящемся препарате, частоты следования пачек спонтанной активности, частоты и вариабельности следования спонтанных ПД в пачке, количества и интенсивности постдеполяризаций, а также по смещению мембранного потенциала, соответствующего началу пачечной активности, оценивают признаки антиаритмического или аритмогенного действия.

Изобретение относится к способу определения резистентности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте (АСК) путем импедансного исследования агрегационной функции тромбоцитов in vitro, при котором исследуют агрегационную активность после инкубации образца биологического материала с АСК с использованием индуктора агрегации, причем агрегацию тромбоцитов индуцируют коллагеном в оптимальной концентрации 2 мг/мл и одновременно с измерением импеданса проводят определение динамики освобождения гранул тромбоцитов люминесцентным методом, где перед проведением агрегации пробы калибруются с помощью стандарта аденозинтрифосфата (АТФ), по полученным агрегатограммам определяют значения амплитуды агрегации в Омах и присваивают полученным значениям баллы: значения ≤6 соответствуют 0 баллов, значения 7-9 соответствуют 1 баллу, значения 10-12 соответствуют 2 баллам, значения >12 соответствуют 3 баллам; затем определяют интенсивность высвобождения АТФ из гранул тромбоцитов в нмолях и присваивают полученным значениям баллы: значения <0,5 соответствуют 0 баллам, значения 0,5-1,0 соответствуют 1 баллу, значения 1,0-1,5 соответствуют 2 баллам, значения >1,5 соответствуют 3 баллам, и далее рассчитывают индекс резистентности (ИР) по формуле, при этом значение показателя ИР более 4 указывает на наличие аспиринорезистентности тромбоцитов.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии. Заявлено применение жировой эмульсии для парентерального питания в качестве растворителя для малорастворимых в воде соединений.

Изобретение относится к биологии, токсикологической и аналитической химии, а именно к способам определения прокаина в плазме крови. В плазму крови, содержащую прокаин, вводят фторид натрия для создания концентрации 10 мг/мл, полученную смесь обрабатывают ацетоном, извлечение отделяют от выпавшего осадка путем фильтрования, ацетон из фильтрата испаряют в токе воздуха при комнатной температуре, водный остаток разбавляют путем прибавления воды, образующийся раствор насыщают сульфатом аммония, подщелачивают аммонийным буферным раствором до pH 9,0-9,5, экстрагируют двукратно порциями органического экстрагента, в качестве которого используется 30% раствор камфоры в метилацетате, при соотношении водной и органической фаз 1:1 по объему, органические экстракты отделяют, объединяют, растворитель из объединенного экстракта испаряют в токе воздуха при комнатной температуре, остаток хроматографируют в тонком слое силикагеля СТХ-1А на пластинах «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ, применяя подвижную фазу дихлорметан-этанол в соотношении 6:4 по объему, хроматограмму проявляют в УФ-свете, анализируемое вещество элюируют из сорбента смесью ацетонитрил-метанол-0,025 М раствор дигидрофосфата калия с pH 3,0 в соотношении 10:10:90 по объему, хроматографируют методом ВЭЖХ с применением обращеннофазового сорбента «Nucleosil C18», полярной подвижной фазы ацетонитрил-метанол-0,025 М раствор дигидрофосфата калия с pH 3,0 в соотношении 10:10:90 по объему и УФ-детектора, регистрируют оптическую плотность при длине волны 298 нм и вычисляют количество анализируемого соединения по площади хроматографического пика.

Изобретение относится к медицине и описывает способ идентификации водорастворимого лекарственного вещества путем сравнения с эталоном. Способ характеризуется проведением ионометрии, титрометрии и спектрофотометрии, при этом ионометрические исследования проводят с использованием различных концентраций лекарственного вещества, начиная от насыщенного раствора с уменьшением концентрации идентифицируемого вещества в каждом последующем растворе кратно по сравнению с предыдущим, титрометрические зависимости измеряют в различных концентрациях идентифицируемого лекарственного вещества, начиная от насыщенного раствора с уменьшением концентрации в каждом последующем титруемом растворе ниже, чем в предыдущем, в кратное число раз, титрующий раствор вводят равномерно в течение всего процесса титрования, дополнительное измерение спектрофотометрических зависимостей проводят не менее чем в двух разных концентрациях: насыщенного раствора и разбавленного в 10-20 раз, а измерения спектрофотометрических зависимостей проводят в двух растворителях: бидистиллированной воде и ином растворителе из ряда спиртов. Изобретение обеспечивает повышение достоверности полученных данных. 18 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Сущность способа состоит в том, что способ включает измерение в крови десмостерола, бета-амилоида, гельсолина. При уровне десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, или при уровне десмостерола и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонных значений, или при уровне десмостерола и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 и уровне гельсолина в крови субъекта ниже эталонных значений, или при уровне десмостерола и гельсолина в крови ниже эталонных значений диагностируют болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство. Использование заявленного способа позволяет эффективно диагностировать болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство. 4 н.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл., 6 пр.
Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени, который включает приготовление кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы путем абразии эпителия роговицы и конъюнктивы инстилляцией раствора n-гептанола в глаз кролика; и введение испытуемого агента в глаз кролика модели и оценку эффекта восстановления ткани роговицы под действием испытуемого агента, в котором наносимый объем раствора n-гептанола составляет всего от 0,03 до 0,05 мл, который капают 2-4 раза, и в котором кролика заставляют моргать 2-4 раза, в котором стадия приготовления дополнительно включает принуждение кролика к закрытию глаза на период от около 1 до около 3 минут после инстилляции раствора n-гептанола в глаз. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 7 табл., 3 пр.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги. Способ количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье чаги или препарате чаги включает исчерпывающую экстракцию сырья или препарата петролейным эфиром с температурой кипения 40-70°C при объемном соотношении сырье чаги или препарат чаги:растворитель 1:2, отделение полученного экстракта, удаление органического растворителя и определение количества тетрациклических тритерпенов в полученном сухом остатке спектрофотометрическим методом. Вышеописанный способ повышает точность количественного определения тетрациклических тритерпенов в сырье или препарате чаги за счет максимального избирательного извлечения этих соединений. 1 табл., 8 пр.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения концентрации азотсодержащих противомикробных препаратов (изиниазида, этамбутола и др.) и антибиотиков (цефалоспоринового ряда - цефазолина, цефатоксима, цефуроксима, цефалексина и др.) в исследуемых жидких средах. Способ определения содержания биоцидного азотсодержащего органического соединения в водном растворе заключается в том, что модифицируют сорбент силикагель солью переходного металла путем обработки силикагеля водным раствором соли переходного металла при температуре 50-70°C и при величине pH от 3 до 5 в течение 1-1,5 часов, высушивают, помещают сорбент в стеклянную индикаторную трубку, затем пропускают анализируемую пробу через индикаторную трубку с размещенным в нем сорбентом, модифицированным солью переходного металла, измеряют длину окрашенной зоны сорбента и определяют по нему концентрацию указанного соединения. Способ позволяет сократить время определения антибиотиков при снижении предела их обнаружения, увеличить точность определения, снизить погрешность определяемого результата. 4 з.п. ф-лы, 4 пр., 2 ил.

Изобретение относится к аналитической химии и фармацевтике и описывает способ извлечения пролина из водных растворов, включающий приготовление водно-солевого раствора пролина путем его растворения в насыщенном растворе высаливателя, экстракцию и анализ равновесной водной фазы, где экстракцию пролина осуществляют раствором водорастворимого полимера, а именно сополимера поли-N-винилкапролактам-N-винилимидазол (ПВК-ВИ) в дистиллированной воде с концентрацией 1,15-1,20 г/см3 в течение 7-10 мин из водно-солевого раствора пролина, который имеет рН 9,7±0,3, при этом соотношение объемов водно-солевого раствора пролина и экстрагента 5:2 и в качестве высаливателя применяют раствор сульфата аммония, далее отделяют водно-солевую фазу от органической и анализ проводят методом УФ-спектрофотометрии при длине волны 450 нм, по градуировочному графику находят концентрацию пролина в анализируемом водном растворе, рассчитывают коэффициент распределения (D) и степень извлечения пролина (R, %). Предлагаемый способ извлечения пролина из водных растворов позволяет повысить коэффициент распределения (до 201,4) и достичь практически полного (97,7%-ного) извлечения пролина из водно-солевого раствора, характеризуется экспрессностью (продолжительность анализа 30-35 мин) и может быть применен при анализе водных растворов, содержащих пролин. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для поиска точки с дробным эффектом при определении эффективных доз веществ методом «одной точки» путем экспериментального определения зачетной дробной точки при введении животным вещества с n-кратным изменением последовательно вводимых доз с последующим расчетом дозы с заданным дробным эффектом по функции наклона линии токсичности. При определении интервала доз с альтернативным откликом при десятикратном различии доз применяют повторное введение растворов веществ одному и тому же животному до исчерпания лимита допустимого объема введения; затем сужают интервал доз с альтернативным откликом последовательным двукратным сокращением путем приготовления растворов для введения смешением одинаковых количеств растворов с краев интервала доз с альтернативным откликом до различия доз, находящихся на краях интервала, менее чем в два раза; определяют реперную дозу на полученном интервале доз с альтернативным откликом как среднюю величину и вводят рассчитанную дозу дополнительной группе из четырех животных. Объединяют данные по шести животным на реперной дозе в одну точку; рассчитывают частоту эффекта в процентах и переводят ее по стандартным таблицам в вероятностные единицы - пробиты; определяют величину эффективной дозы для заданного дробного эффекта, используя известную функцию наклона линии токсичности, по формуле , где DT - искомая доза тестируемого вещества с заданной частотой эффекта; DS - доза вещества-стандарта; S - функция наклона линии токсичности для вещества-стандарта; YT - пробит, соответствующий заданному дробному эффекту для тестируемого вещества; YS - пробит, соответствующий дробному эффекту для вещества-стандарта. Изобретение обеспечивает экономное проведение токсикологического эксперимента (предполагается уменьшение количества используемых животных и уменьшение количества вещества, необходимого для исследования); снижение погрешностей при разведениях растворов веществ, вводимых животным; повышение объективности за счет уменьшения погрешностей при определении эффективных доз. 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения амина в образце. Сущность способа заключается в контактировании образца, содержащего амин, с раствором соли, содержащей 2,2',2”,6,6',6”-гексаметокситритильный карбокатион, и последующем определении конъюгатов методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии. Способ пригоден как для летучих аминов малой массы, так и для полярных аминогликозидных соединений. Образующиеся производные аминов обладают поглощением в УФ-области и повышенной склонностью к ионизации, что облегчает их детекцию указанными выше методами. Использование способа позволяет с высокой точностью определить амины в образце. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 33 пр., 33 ил.

Изобретение относится к аналитической химии, конкретно к определению флуниксина в лекарственных препаратах. При осуществлении способа в ацетатно-аммиачный буферный раствор с рН 7.0-7.8 добавляют Твин-80 до концентрации 1·10-2 М, соль тербия Tb3+ до концентрации 1·10-3 М, лекарственный препарат триоктилфосфиноксид до концентрации 1·10-4 М, облучают раствор электромагнитным излучением с длиной волны λвозб=347 нм и по наличию флуоресценции на длине волны λфл=545 нм судят о наличии флуниксина. Дополнительно измеряют интенсивность флуоресценции, а концентрацию флуниксина в лекарственном препарате определяют по величине интенсивности с использованием заранее полученного градуировочного графика или методом стандартной добавки. Достигается упрощение анализа. 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 8 табл., 7 прим.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен микрофлюидный чип для создания клеточных моделей органов млекопитающих. Чип содержит пластину из поликарбоната, на которой отлит слой полидиметилсилоксана с размещенной в нём микрофлюидной системой. Микрофлюидная система включает объединенные микрожидкостными каналами шесть ячеек для одновременного культивирования клеточных моделей тканей и органов млекопитающих. Первая ячейка предназначена для модели кишечника, вторая для модели печени млекопитающего, а оставшиеся ячейки предназначены для типовых моделей. При этом система каналов включает входной и выходной каналы микрофлюидного чипа, входной и выходной каналы ячейки модели кишечника, четыре распределительных канала, четыре смесительных канала и байпасный канал для ячейки модели кишечника. Изобретение обеспечивает более аутентичное поведение клеточных моделей органов при культивировании, вследствие чего получение более достоверных результатов при тестировании воздействия различных препаратов на жизнеспособность моделей. 10 з.п. ф-лы, 2 ил.
Наверх