Способ оценки устойчивости мембран эритроцитов при обострении цитомегаловирусной инфекции путем измерения гистохимическим методом содержания ионов кальция в эритроцитах периферической крови беременных

Изобретение касается способа выявления ионов кальция в эритроцитах периферической крови беременных. Способ включает выполнение гистохимической реакции на монослойных мазках периферической крови с помощью их последовательной обработки растворами, состоящими из 5% нитрата серебра, промывки 5% тиосульфатом натрия и дистиллированной водой с последующей докраской 1% раствором сафранина на 96% этиловом спирте, дифференцировки в 96% этиловом спирте, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации, просветление в кислоте и заключение в бальзам. Затем изучают компьютерным цитофотометрическим методом содержание кальция в отдельно взятых эритроцитах и устанавливают. При обострении цитомегаловирусной инфекции до титра антител 1:1600, снижении содержания кальция в мембранах эритроцитов до 12,80±0,40 усл. ед., при контроле - 34,00±0,07 усл. ед., увеличении количества дегенеративных форм эритроцитов до 12,0±0,95% и снижении содержания оксигемоглобина до 92,3±1,5% определяют угрозу формирования в организме беременной гипоксии. 2 ил.

 

1. Цель изобретения - выявить, что при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации при снижении в мембранах эритроцитов ионов кальция создается угроза разрушения эритроцитов и появляются признаки гипоксии в периферической крови беременной.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа диагностики устойчивости мембран эритроцитов и появлению в периферической крови беременной признаков гипоксии.

3. Раскрытие изобретения. Экранирование фиксированных зарядов клеточной поверхности снижает электрофоретическую подвижность клеток. Этот эффект может быть объяснен как экранирование фиксированных зарядов клеточной поверхности, и связывания ионов кальция с соответствующими заряженными группировками мембраны [1, 4]. На поверхности эритроцитов могут реагировать с ионами кальция остатки нейраминовой (сиаловой) кислоты и карбоксильные группы белков [8]. В различных мембранах поверхностный заряд может в значительной степени варьировать [7].

Ионы кальция, связывающиеся на поверхности клеточной мембраны, существенны для поддержания их структурной целостности. Стабильность мембраны может снижаться, о чем свидетельствует прогрессирующее снижение сопротивления и утечка через каналы содержимого клетки. При снижении ионизированного кальция на поверхности мембраны уменьшается поверхностный потенциал мембраны [2]

4. Новая техническая задача

Найти новый способ оценки устойчивости мембран эритроцитов методом определения количества связанных ионов кальция с мембраной в зависимости от обострения в организме цитомегаловирусной инфекции.

5. Уровень техники раскрытия изобретения

Устойчивость мембран эритроцитов зависит от количества связанного с ее рецепторами ионов кальция. В случае снижения содержания ионов кальция заряд мембраны снижается, нарушается проходимость мембранных каналов и наблюдается утечка содержимого клеток [4].

Эти вопросы успешно решались в течение многих лет микроэлектрофоретическим методом на интактных клетках [4]. Однако в организме человека эти вопросы обстоят намного сложнее. В целом ряде случаев клеточная мембрана эритроцитов попадает под воздействие чужеродных белков, которыми являются и антигены вирусных инфекций. Поэтому мы применили в наших исследованиях гистохимический метод с целью показать, как ионы кальция связываются с рецепторами мембран эритроцитов как в норме, так и при вирусных заболеваниях.

Антиген цитомегаловируса находит рецептор на мембране эритроцита в качестве гликофорина, количество которого при вирусных заболеваниях резко возрастает, что нами и отмечено [5]. Это позволило провести исследования связи ионов кальция с мембраной эритроцитов гистохимическим методом с последующим цитофотометрическим подсчетом содержания связанного с мембраной эритроцита ионов кальция. Метод специфичен и прост в своем исполнении.

Отсутствие достаточного количества ионов кальция на мембране эритроцитов приводит к нарушению ее устойчивости и как следствие к гибели клетки, что фиксировалось автоматической установкой "Mekos" по количеству дегенеративных форм эритроцитов. Наконец, биохимическим методом подтверждается, что количество оксигемоглобина в этой ситуации значительно снижается, что составляет угрозу формирования в третьем триместре гестации для беременной гипоскии. Подобных исследований у беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции мы не встречали.

6. Осуществление изобретения

6.1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Обследовано 25 рожениц в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией в стадии обострения (основная группа) и 10 беременных без патологии (контрольная группа). Диагноз устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие JgM или четырехкратного и более нарастания титра антител JgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности (65%), а также наличия ДНК к цитомегаловирусу (ЦМВ). Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства здравоохранении РФ №266 от 19.06.2003 г.

6.2. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре "Stat-Fax-2100" (USA) с использованием тест-систем ЗАО "Вектор-Бест" (Новосибирск), методами ПНР на аппарате ДТ-96 (Россия) с использованием наборов НПО "ДНК-технология " (Москва).

7. Монослойные мазки периферической крови приготовляли на центрифуге Stat-Sprin Μ 700-22 (USA).

8. Выявление ионов кальция проводили с использованием рекомендаций Косса [3].

8.1. Фиксация выполнялась в течение 30 мин в закрытом эксикаторе в парах параформальдегида.

8.2. После фиксации мазки заливали 5% раствором нитрата серебра на 15 мин при ярком дневном свете.

8.3. После окраски нитратом серебра мазки промывались 5% раствором тиосульфата натрия и дистиллированной водой

8.4. Далее на мазок наносится на 30 мин 1% раствор сафранина на 96% этиловом спирте.

8.5. Обезводить в спиртах возрастающей крепости, просветлить в ксилоле и заключить в бальзам. В местах размещения кальция появляются черные зерна реакции, фон - желто-розовый.

9. Полученные мазки изучались под цифровым микроскопом MEIJI (Япония), связанным с компьютером через цитофотометрическую программу "Scion " (USA), позволяющую определять автоматически количество продуктов реакции (в данном случае кальция) в каждом эритроците.

10. Число дегенеративных форм эритроцитов определяли с помощью цитофотометрической установки "Mekos "(МЗ РФ, 29/100110198/1282-01).

11. Уровень оксигемоглобина определяли по методу Эвелина и Мэллой [6].

12. Статистическая обработка проводилась непарным параметрическим критерием Стъюдента и методом Фишера.

В процессе исследования установлено, что обострение хронической цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 на третьем триместре гестации связано со снижением количества ионов кальция в мембранах эритроцитов до 12,80±0,40 усл.ед., контроль - 34,00±0,07 усл.ед. (фигура 1, 2). Это связано с тем, что рецепторы мембран эритроцитов связаны в большинстве с антигеном цитомегаловируса, что экранирует контакты кальция с мембраной эритроцита. Это приводит к нарушению устойчивости мембраны эритроцитов и появлению в периферической крови беременной до 12,0±0,95% дегенеративных форм, а также к снижению оксигемоглобина до 92,3±1,5%, что и создает угрозу формирования в организме беременной гипоксии.

На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на активность ионов кальция в мембранах эритроцитов периферической крови беременной, перенесшей на третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции с титром антител к цитомегаловирусу 1:1600. Реакция на кальций снижается до 12,80±0,40 усл.ед., при контроле - 34,00±0,07 усл.ед.

Гистохимическая реакция на кальций по Коссу. Увеличение - 10±100.

На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция на активность ионов кальция в мембранах эритроцитов периферической крови беременной, не болевшей в течение гестации. Интенсивность реакции на кальций - 34,00±0,07 усл.ед. Гистохимическая реакция на кальций по Коссу. Увеличение-10±100.

ЛИТЕРАТУРА

1. Дорошенко П.А., Костюк П.Г., Мартынюк А.Е. Инактивация кальциевых токов в соматической мембране нейронов моллюсков// Нейрофизиология. 1982. Т. 14, №5. С. 525-531.

2. Дорошенко П.А., Мартынюк А.Е. Блокирование кальцийзависимого выходящего тока в соматической мембране нейронов моллюсков повышением рН внутриклеточной среды// Нейрофизиология. 1982. Т.14, №5. - С. 426-430.

3. Кононский А.И. Гистохимия. Киев.: Вища Школа. 1976. - 277 с.

4. Костюк П.Г. Кальций и клеточная возбудимость. М.: Наука, 1986, 254 с.

5. Луценко М.Т., Андриевская И.Α., Кутепова О.Л. Морфофункциональная характеристика глутатионового цикла эритроцитов периферической крови беременных, перенесших в период гестации обострение цитомегаловирусной инфекции // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 2014. Т.157, №2. С. 246-250.

6. Покровский А.А. Справочник биохимических исследований. М.Медицина. 1969. 337 с.

7. Bolognani L., Masserini Μ., Bodimi P. Lipid composition in ganglia of molluses// J. Neurochem.,1981. V.36. P. 821-825.

8. Seaman G.V., Vasser P., Kenall M.J. Electrophoretic studies of human polynuclear leucocytes and erythrocytes// Arch. Biochem. And Biophys.1969. V.135. P 356-363.

Способ определения угрозы формирования в организме беременной гипоксии, включающий выполнение гистохимической реакции на монослойных мазках периферической крови с помощью их последовательной обработки растворами, состоящими из 5% нитрата серебра, промывки 5% тиосульфатом натрия и дистиллированной водой с последующей докраской 1% раствором сафранина на 96% этиловом спирте, дифференцировки в 96% этиловом спирте, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации, просветление в кислоте и заключение в бальзам, после чего изучают компьютерным цитофотометрическим методом содержание кальция в отдельно взятых эритроцитах и устанавливают, что при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра антител 1:1600, снижении содержания кальция в мембранах эритроцитов до 12,80±0,40 усл. ед., при контроле - 34,00±0,07 усл. ед., увеличении количества дегенеративных форм эритроцитов до 12,0±0,95% и снижении содержания оксигемоглобина до 92,3±1,5% определяют угрозу формирования в организме беременной гипоксии.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области молекулярной биологии, иммунологии и медицины и предназначена для идентификации популяций аутореактивных Т-клеток у индивидуумов с аутоиммунными заболеваниями.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения иммуностимулятора из нервной ткани головоногих моллюсков, мозга морских млекопитающих и рыб.
Изобретение относится к медицине и описывает способ оценки эффективности диализно-фильтрационной очистки крови, заключающийся в том, что в сыворотке крови больного определяют суммарную концентрацию фенилуксусной (ФУК), пара-гидроксифенилуксусной (п-ГФУК), фенилмолочной (ФМК) и пара-гидроксифенилмолочной (п-ГФМК) кислот до и после очистки крови и при снижении ее в 2 и более раз очистку крови оценивают как эффективную.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования депрессии тяжелой степени у мужчин с ишемической болезнью сердца (ИБС). Сущность способа состоит в том, что у мужчин с ИБС устанавливают временную и структурную связь между ИБС и признаками депрессии, измеряют уровень личностной тревожности с помощью теста Спилбергера-Ханина.

Изобретение относится к гинекологии и представляет собой способ прогнозирования риска развития пролапса гениталий (ПГ) у женщин с родовыми травмами в анамнезе, включающий отбор биоматериала для выделения ДНК, проведение генотипирования ДНК методом тетра-праймерной аллель-специфической полимеразной цепной реакции, выявление полиморфизма гена FBLN5 по сайтам rs12586948, rs2018736, rs12589592 и rs2474028, в котором высокий риск развития пролапса гениталий прогнозируют при выявлении совокупности генотипов: rs12586948-A/*, rs2018736-C/*, rs12589592-G/G и rs2474028-T/*, а низкий риск - при совокупности генотипов: rs12586948-G/G, rs2018736-A/A, rs12589592-A/A и rs2474028-С/С.
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики меланоцитарных новообразований кожи. Способ включает получение биоптата исследуемого новообразования кожи, затем с исследуемым образцом проводят ПЦР в реальном времени для количественного определения относительного уровня экспрессии микроРНК по нормализующей микро-РНК - snRNA-U6, при этом маркером дифференциальной диагностики является ген hsa-miR-205.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда, и описывает способ диагностики ранних нарушений от воздействия вредных производственных факторов в организме работников, занятых в производстве синтетических смол не более 5 лет.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к нефрологии и относится к применению комбинации метаболитов, включающей по меньшей мере две аминокислоты, по меньшей мере два ацилкарнитина и по меньшей мере два биогенных амина, в качестве массива биомаркеров, предназначенного для оценки хронической болезни почек в образце крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к детской терапевтической стоматологии, и предназначено для диагностики воспаления пульпы временного зуба. Для этого проводят исследование десневой жидкости в области проблемного зуба, определяя активность ферментов ACT и АЛТ.

Изобретение относится к медицине, в частности к области медицинской диагностики, и описывает способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ).
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и гастроэнтерологии, и описывает способ оценки риска развития язвенной болезни у хакасов на основе генетического анализа. Способ характеризуется тем, что устанавливают факторы риска - определяют полиморфизм интерлейкина IL-8 методом рестрикционного анализа при выделении ДНК из лимфоцитов венозной крови, а также определяют генотип Helicobacter pylori методом ПЦР при выделении ДНК из биоптатов слизистой оболочки желудка у пациентов, относящихся к коренным жителям Республики Хакасия. Факторам риска присваивают числовые значения и затем определяют прогностические коэффициенты P1, Р2. При Р1>Р2 прогнозируют низкий риск, а при Р1<Р2 прогнозируют высокий риск развития язвенной болезни. Предложенный способ обладает высокой прогностической значимостью положительного результата в оценке риска развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у хакасов (89,7%). Изобретение может использоваться для повышения точности оценки риска развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки на основе генетического анализа на стадии доклинических проявлений и для проведения эффективных мероприятий, направленных на превенцию распространенного заболевания. 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии, а именно к способу определения неизвестной концентрации клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к известной концентрации клостридиального нейротоксина во втором образце и к способу определения относительной активности клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к активности клостридиального нейротоксина во втором образце, где способ включает следующие этапы: (а) контактирование клеточной культуры с указанным вторым образцом, содержащим клостридиальный нейротоксин в известной концентрации; (c) измерение второго эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре указанным клостридиальным нейротоксином в известной концентрации; (d) повторение этапов (а)-(с) при различных концентрациях указанного клостридиального нейротоксина; (e) регистрацию измеренного второго эффекта этапа (d) в зависимости от концентрации клостридиального нейротоксина с регистрацией, таким образом, второго набора данных; (f) контактирование клеточной культуры с указанным первым образцом, содержащим указанный клостридиальный нейротоксин в неизвестной концентрации; (h) измерение первого эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре указанным клостридиальным нейротоксином в неизвестной концентрации; (k) определение концентрации клостридиального нейротоксина, при которой указанный первый и указанный второй эффекты идентичны; и (l) сравнение концентрации клостридиального токсина, определенной в (k), с указанной неизвестной концентрацией клостридиального нейротоксина; где до указанного измерения в этапе (с) и этапе (h), и после контакта в этапе (а) и этапе (f), указанную клеточную культуру подвергают контакту в течение от 0,5 до 100 ч с водной средой, которая не содержит клостридиальный нейротоксин, и где этап (с) выполняют при отсутствии указанного второго образца, а этап (h) выполняют при отсутствии указанного первого образца. Применение способа для определения неизвестной концентрации клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к известной концентрации клостридиального нейротоксина во втором образце. Использование заявленного способа позволяет повысить точность определения неизвестной концентрации клостридиального нейротоксина и относительной активности клостридиального нейротоксина в образце. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Сущность способа состоит в том, что способ включает измерение в крови десмостерола, бета-амилоида, гельсолина. При уровне десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, или при уровне десмостерола и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонных значений, или при уровне десмостерола и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 и уровне гельсолина в крови субъекта ниже эталонных значений, или при уровне десмостерола и гельсолина в крови ниже эталонных значений диагностируют болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство. Использование заявленного способа позволяет эффективно диагностировать болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство. 4 н.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл., 6 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ диагностики наличия гломерулонефрита у кошки предусматривает измерение уровня экспрессии одного или нескольких биомаркеров, выбранных из группы, состоящей из люмикана; цепи коллагена альфа 1 (III), варианта 12; декорина; секретируемого родственного frizzled белка 2; ретинол-связывающего белка 5; MMP-2; MMP-7 и MMP-19, в биологическом образце, полученном от кошки. При этом значимое отличие в экспрессии одного или нескольких биомаркеров в образце по сравнению с контрольным значением для экспрессии в образце, полученном от здорового животного, свидетельствует о наличии расстройства почек. В группу изобретений также входит набор для осуществления указанного способа, с возможным использованием для диагностики нуклеотидных последовательностей комплементарных указанным выше генам. Проведение диагностика гломерулонефрита с использованием данной группы изобретений позволяет выявлять и прогнозировать развитие гломерулонефрита на ранних стадиях. 3 н. и 19 з.п. ф-лы, 16 ил., 4 табл., 6 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ качественного определения адаптационной способности к мостовидным конструкциям ортопедических протезов по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области, причем, если определяют содержание в ротовой жидкости тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (ТИМП 1) в количестве 118,9-145,7 нг/мл и тканевого ингибитора металлопротеиназы 2 (ТИМП 2) в количестве 42,4-56,9 нг/мл, то диагностируют низкую адаптационную способность пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области к мостовидным конструкциям ортопедических протезов, а если определяют содержание в ротовой жидкости пациента ТИМП 1 в количестве 68,2-77,4 нг/мл и ТИМП 2 в количестве 21,9-37,7 нг/мл, то диагностируют полную функциональную адаптацию пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области к мостовидным конструкциям ортопедических протезов. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности определения адаптационной способности и чувствительности дифференциальной диагностики адаптационной способности. 2 з.п. ф-лы, 6 пр.
Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени, который включает приготовление кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы путем абразии эпителия роговицы и конъюнктивы инстилляцией раствора n-гептанола в глаз кролика; и введение испытуемого агента в глаз кролика модели и оценку эффекта восстановления ткани роговицы под действием испытуемого агента, в котором наносимый объем раствора n-гептанола составляет всего от 0,03 до 0,05 мл, который капают 2-4 раза, и в котором кролика заставляют моргать 2-4 раза, в котором стадия приготовления дополнительно включает принуждение кролика к закрытию глаза на период от около 1 до около 3 минут после инстилляции раствора n-гептанола в глаз. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 7 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к области морской медицины, может быть использовано в практике водолазной медицины для определения степени эндогенной интоксикации у водолазов. Способ осуществляется следующим образом: определяют концентрацию молекул средней массы в сыворотке крови, причем исследования проводят до погружения и повторно через 40 минут после его завершения, и при увеличении концентрации молекул средней массы до 1,4 раза включительно степень эндогенной интоксикации полагают легкой, при увеличении от 1,4 до 2,2 раза - выраженной и более 2,2 раза - тяжелой. Изобретение позволяет выявить нарушения, формирующиеся при декомпрессионном внутрисосудистом газообразовании у водолазов. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к онкогематологии. Предложен способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом в стадии A, включающий определение в момент постановки диагноза показателя соотношения абсолютного содержания NK-клеток к абсолютному содержанию клеток ХЛЛ, где при значении показателя соотношения NK-клетки/клетки ХЛЛ равном 0,07 и более прогнозируют благоприятный (выживаемость 5 лет и более), а при значении показателя менее 0,07 - неблагоприятный прогноз жизни больного (выживаемость менее 5 лет). Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования общей выживаемости больных ХЛЛ, получение дополнительного критерия определения продолжительности жизни больных. 1 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике. Изобретение представляет способ дифференциальной диагностики железодефицитной анемии и анемии хронических заболеваний, включающий исследование сыворотки крови с помощью иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что определяют уровень гепсидина-25 и при увеличении его значения более 11,8 нг/мл диагностируют анемию хронических заболеваний, а при снижении его значения менее 4,33 нг/мл диагностируют железодефицитную анемию. Изобретение обеспечивает повышение точности и достоверности диагностики анемии хронических заболеваний за счет определения гепсидина-25, являющегося биоактивной частью прогепсидина. 1 ил., 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам диагностики, и может быть использовано для оценки угрозы развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции на первом триместре гестации. Способ включает определение на первом триместре гестации в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, содержание в гомогенате плаценты на 12-й неделе беременности дегидроэпиандростеронсульфата, содержание в периферической крови дегидроэпиандростеронсульфата и эстриола. При нарастании титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600, содержания в гомогенате плаценты дегидроэпиандростендиолсульфата до 1,20 мкмоль/л и снижении в периферической крови беременной дегидроэпиандростеронсульфата до 7,53 мкмоль/л и эстриола до 2,70 пмоль/л определяют угрозу развития плода.
Наверх