Способ определения моносахаридов в вагинальной жидкости

Изобретение касается способа определения моносахаридов в вагинальной жидкости и заключается в том, что используют метод газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Образцы подготаливают путем высушивания 10 см3 вагинального смыва при 30°C в течение 24 ч. Навеску сухого остатка массой 35 мг обрабатывают 300 мкл смеси N, O-бис-(триметилсилил)-ацетамида, триметилхлорсиланом, N-триметилсилилимидазолом в соотношении 3:2:3 и 40 мкл N, О-бис-(триметилсилил)-трифторацетамида, приготовленную смесь выдерживают в виале при 80°C в течение 15 мин. Полученные производные исследуют на хромато-масс-спектрометре с масс-селективным детектором при температуре аналитического интерфейса 280°C и температуре испарителя 280°C. Разделение осуществляют на кварцевой капиллярной колонке HP-5MS. Далее нагревают со скоростью 10°C/мин до 130°C, выдерживают систему - 0 мин, далее со скоростью 3°C/мин до 210°C - 0 мин, затем со скоростью 15°C/мин до 240°C - 0 мин, со скоростью 3°C/мин до 265°C - 10 мин и со скоростью 15°C/мин до 295°C - 15 мин, время анализа - 70 мин, скорость потока газа-носителя (гелия) - 1 см3/мин, средняя линейная скорость газа-носителя - 37,6 см/сек, диапазон сканирования m/z 45.0-350.0 а.е.м., объем вводимой пробы - 5 мкл. Для идентификации ТМС-производных моносахаридов по их масс-спектрам используют базу данных NIST, входящих в состав штатной программы обработки данных масс-спектрометра. Использование способа позволяет с высокой точностью определять моносахариды в вагинальной жидкости.

 

Изобретение относится к медицине, в частности гинекологии, и касается методики определения моносахаридов в вагинальной жидкости для ранней диагностики бактериального вагиноза.

Известен способ определения моносахаридов при использовании для анализа тонкослойной хроматографии путем нанесения водного раствора исследуемой пробы (10 мкл) на стартовую линию пластинки силуфол, двухкратном элюировании в смеси растворителей гексан-этанол в объемном соотношении (1 C3):(2 C5), соответственно с последующим обнаружением анилинфталатом. (1).

Недостатком данного способа является невозможность определения глюкопиранозы, D-галактозы, фукозы, глюкозы, D-галактозы, D-ксилопиранозы, гексапиранозы, D-Галактопиранозы, D-маннозы, D-маннопиранозы в вагинальной жидкости.

Известен способ определения моносахаридов когда для проведения газохроматографического анализа используют ацетилированные альдононитрилы моносахаридов сыворотки крови, анализ проводят на двухметровой колонке диаметром 3 мм, заполненной 3% Selicone XE-60 на отмытом кислотой хроматоне при температуре 220°C в изотермическом режиме или режиме программирования температур от 210 до 245°C со скоростью 12°C в минуту. (2).

Недостатком данного способа является трудоемкость процесса и невозможность определения глюкопиранозы, D-галактозы, фукозы, глюкозы, D-галактозы, D-ксилопиранозы, гексапиранозы, D-Галактопиранозы, D-маннозы, D-маннопиранозы в вагинальной жидкости. Данный способ принят за прототип.

Целью изобретения является совершенствование ранней персонифицированной диагностики бактериального вагиноза за счет определения изменения моносахаридов в вагинальной жидкости при бактериальном вагинозе, что позволит своевременно и эффективно начать лечение.

Эта цель достигается использованием метода газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для анализа образцов, подготовленных путем высушивания 10 см3 вагинального смыва при температуре 30°C в течение 24 часов для получения сухого остатка, затем получением триметилсилильных производных моносахаридов по следующей схеме: навеска сухого остатка массой 35 мг обрабатывается 300 мкл смеси N, O-бис-(триметилсилил)-ацетамида, триметилхлорсиланом, N-триметилсилилимидазолом в соотношении 3:2:3 (Sylon BTZ, Supelco) и 40 мкл N, О-бис-(триметилсилил)-трифторацетамида, далее смесь выдерживается в виале при 80°C в течение 15 минут, затем полученные производные исследуют на хромато-масс-спектрометре с масс-селективным детектором при температуре аналитического интерфейса 280°C и температуре испарителя 280°C; разделение осуществляют на кварцевой капиллярной колонке HP-5MS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки неподвижной фазы 0,25 мкм при программировании температуры: 120°C в течение 5 мин, далее нагрев со скоростью 10°C/мин до 130°C, выдержка системы - 0 мин, далее со скоростью 3°C/мин до 210°C - 0 мин, затем со скоростью 15°C/мин до 240°C - 0 мин, со скоростью 3°C/мин до 265°C - 10 мин и со скоростью 15°C/мин до 295°C - 15 мин., время анализа - 70 мин, скорость потока газа-носителя (гелия) - 1 см3/мин, средняя линейная скорость газа-носителя - 37,6 см/сек, диапазон сканирования m/z 45.0-350.0 а.е.м., объем вводимой пробы - 5 мкл; для идентификации ТМС-производных моносахаридов по их масс-спектрам используется база данных NIST, входящая в состав штатной программы обработки данных масс-спектрометра; определяются 1,2,3,4,6-пентакис-O-(триметилсилил)-глюкопираноза, 2,3,4,5,6-пентакис-O-(триметилсилил)-D-галактоза, тетракис(триметилсилиловый)эфир L(-)-фукозы, 5-(триметилсилил)-глюкоза, 5-(триметилсилил)-D-галактоза, 1,2,3,4-тетракис-O-(триметилсилил)-.beta.-D-ксилопираноза, 1,2,3,4,6-пентакис-O-(триметилсилил)гексапираноза, 1,2,3,4,6-пентакис-O-(триметилсилил)-.alpha.-D-галактопираноза, 2,3,4,5,6-пентакис-O-(триметилсилил)-талоза, 2,3,4,5,6-пентакис-O-(триметилсилил)-D-манноза, пер-ТМС фукоза, 1,2,3,4,6-пентакис-O-(триметилсилил)-D-маннопираноза.

Количественную оценку компонентного состава вагинальной жидкости оценивали методом абсолютной градуировки в идентичных условиях пробоподготовки.

Предлагаемый способ позволяет в течение 70 мин получить данные о качественном и количественном содержании ТМС-производных глюкопиранозы, D-галактозы, фукозы, глюкозы, D-галактозы, D-ксилопиранозы, гексапиранозы, D-Галактопиранозы, D-маннозы, D-маннопиранозы в вагинальной жидкости с целью ранней диагностики бактериального вагиноза.

Предлагаемый способ за счет большой чувствительности (до 0,005 мкг вещества) может быть использован для диагностики моносахаридов в вагинальной жидкости, состав которых лабораторно соответствуют ранним дисбиотическим изменениям во влагалище.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Способ определения моносахаридов в сыворотке крови (патент РФ №2163722) Строев Е.А., Бухов В.А., Окороков В.Г., Чурилов Г.И

2. Способ определения галактозы в сыворотке крови (патент РФ №2101705) Кадырова Р.Г., Зухрабов М.Г.

Способ определения моносахаридов в вагинальной жидкости, отличающийся тем, что используют метод газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для анализа образцов, подготовленных путем высушивания 10 см3 вагинального смыва при температуре 30°C в течение 24 ч для получения сухого остатка, затем получают триметилсилильные производные моносахаридов по следующей схеме: навеска сухого остатка массой 35 мг обрабатывают 300 мкл смеси N, О-бис-(триметилсилил)-ацетамида, триметилхлорсиланом, N-триметилсилилимидазолом в соотношении 3:2:3 (Sylon BTZ, Supelco) и 40 мкл N, О-бис-(триметилсилил)-трифторацетамида, приготовленную смесь выдерживают в виале при 80°C в течение 15 мин, затем полученные производные исследуют на хромато-масс-спектрометре с масс-селективным детектором при температуре аналитического интерфейса 280°C и температуре испарителя 280°C; разделение осуществляют на кварцевой капиллярной колонке HP-5MS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, толщина пленки неподвижной фазы 0,25 мкм при программировании температуры: 120°C в течение 5 мин, далее нагревают со скоростью 10°C/мин до 130°C, выдерживают систему - 0 мин, далее со скоростью 3°C/мин до 210°C - 0 мин, затем со скоростью 15°C/мин до 240°C - 0 мин, со скоростью 3°C/мин до 265°C - 10 мин и со скоростью 15°C/мин до 295°C - 15 мин, время анализа - 70 мин, скорость потока газа-носителя (гелия) - 1 см3/мин, средняя линейная скорость газа-носителя - 37,6 см/сек, диапазон сканирования m/z 45.0-350.0 а.е.м., объем вводимой пробы - 5 мкл; для идентификации ТМС-производных моносахаридов по их масс-спектрам используют базу данных NIST, входящих в состав штатной программы обработки данных масс-спектрометра; определяют 1,2,3,4,6-пентакис-O-(триметилсилил)-глюкопиранозу, 2,3,4,5,6-пентакис-O-(триметилсилил)-D-галактозу, тетракис (триметилсилиловый) эфир L(-)-фукозы, 5-(триметилсилил)-глюкозу, 5-(триметилсилил)-D-галактозу, 1,2,3,4-тетракис-O-(триметилсилил)-.beta.-D-ксилопиранозу, 1,2,3,4,6-пентакис-O-(триметилсилил) гексапиранозу, 1,2,3,4,6-пентакис-O-(триметилсилил)-.alpha.-D-галактопиранозу, 2,3,4,5,6-пентакис-O-(триметилсилил)-талозу, 2,3,4,5,6-пентакис-О-(триметилсилил)-D-маннозу, пер-TMC фукозу, 1,2,3,4,6-пентакис-O-(триметилсилил)-D-маннопиранозу.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и трансфузиологии и касается выявления методов оценки восстановления микроциркуляции крови при лечении пострадавших с глубокими отморожениями конечностей.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу течения и оценки эффективности лечения атопического дерматита. Способ течения и оценки эффективности лечения атопического дерматита заключается в проведении клинического и лабораторного обследования пациентов с верифицированным атопическим дерматитом с определением содержания в сыворотке крови белка - лактоферрина (ЛФ) в мкг/мл, альфа-1-антитрипсина (a1-AT) в г/л, альфа-2-макроглобулина (а2-МГ) в г/л, далее вычисляют коэффициент К по определенной формуле и при его значениях от 6 до 15 прогнозируют легкую степень тяжести заболевания, а при 15 и более - среднюю и тяжелую степень тяжести заболевания, через месяц после лечения проводят повторное обследование с вычислением коэффициента К и при его снижении на 30% и более от его исходного значения лечение считают эффективным, прогнозируют длительную ремиссию, а при снижении коэффициента К менее 30% от его исходного значения лечение считают малоэффективным, прогнозируют короткий период ремиссии и высокий риск рецидива.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и касается способа биохемилюминесцентной оценки токсичности рубцовой жидкости in vitro. Представленный способ включает измерение интенсивности свечения бактерий штамма E.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, травматологии, и может быть использовано для выбора метода лечения пациентов с наименьшим риском развития плевролегочных осложнений у пациентов с посттравматическим свернувшимся гемотораксом, без продолжающегося кровотечения.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки течения раневого процесса в ране стопы у больных с синдромом диабетической стопы в послеоперационный период.
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для микробиологической диагностики парапротезной инфекции. Для этого проводят микробиологическое исследование смывной жидкости с извлеченных имплантатов, забранных в операционной во время ревизионных операций при эндопротезировании суставов, после применения ультразвуковой обработки путем посева в педиатрические флаконы с высокопитательными средами для аэробных и анаэробных микроорганизмов и инкубирования в аэробных и анаэробных условиях с помощью автоматического анализатора, при этом педиатрические флаконы со смывной жидкостью с извлеченных имплантатов после ультразвуковой обработки помещают в микробиологический автоматический анализатор VersaTrek для инкубирования и автоматической манометрической детекции роста микроорганизмов.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения концентрации свинца в легких крупного рогатого скота черно-пестрой породы. Сущность способа заключается в определении в волосе концентрации Mn и/или Na методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой.

Изобретение относится к субстрату для иммобилизации функциональных групп, а также к способам приготовления данного субстрата и картриджу с сорбентом для использования в устройстве диализа.

Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к способу оценки состояния микробиоты пищеварительного тракта у подростков 14-18 лет по микрофлоре ротовой жидкости.
Изобретение относится к ихтиологии и рыбоводству и представляет собой способ тестирования физиологического состояния осетровых рыб, включающий исследование сыворотки крови рыб, отличающийся тем, что сыворотку крови исследуют методом краевой дегидратаци в аналитических ячейках и производят морфологический анализ образовавшихся структур в режиме обычной микроскопии при различных увеличениях, при этом дендритные и переходные формы являются показателями нормы гомеостаза, а наличие пластинчатых структур указывает на изменения, происходящие в организме рыб.

Изобретение относится к колоночной хроматографии и предназначен для проведения хроматографического анализа веществ на борту космического аппарата в условиях космического полета.

Изобретение относится к газовой хроматографии и может быть использовано для стандартизации и оценки подлинности различного лекарственного растительного сырья в медицине, фармакологии, пищевой, парфюмерной и других отраслях промышленности.

Изобретение относится к газовой хроматографии и может быть использовано для стандартизации и оценки подлинности различного лекарственного растительного сырья в медицине, фармакологии, пищевой, парфюмерной и других отраслях промышленности.

Изобретение относится к органическому синтезу, а именно к неразрушающим методам определения содержания олефинов в синтетических жидких углеводородах с помощью комбинационного рассеяния света.

Использование: для количественного анализа сложных смесей органических и неорганических веществ природного и техногенного происхождения в различных отраслях промышленности: химической, нефтяной, нефтехимической, энергетике, медицине, биологии, экологии и др.

Изобретение относится к газохроматографическим методам анализа и может быть использовано для идентификации летучих компонентов различных лекарственных растений и фитопрепаратов в медицине, фармакологии, здравоохранении, пищевой, парфюмерной и других отраслях промышленности.

Изобретение относится к медицине и касается способа очистки белка, содержащего эритропоэтин и один остаток полиэтиленгликоля, от побочных продуктов реакции или от исходного материала, не вступившего в реакцию, с помощью катионообменной хроматографии.

Изобретение относится к никелевому комплексу 5,10,15,20-тетракис [3′,5′-ди-(2″-метилбутилокси)фенил]-порфина формулы: Изобретение позволяет получить никелевый комплекс, проявляющий свойство стационарной фазы для газовой хроматографии.

Изобретение относится к газохроматографическим методам анализа и может быть использовано для идентификации летучих компонентов различных лекарственных растений и фитопрепаратов в медицине, фармакологии, здравоохранении, пищевой, парфюмерной и др.

Изобретение относится к области аналитической химии и может найти применение в области экологии и охраны окружающей среды при контроле загрязнения атмосферы для определения акролеина в атмосферном воздухе на уровне референтной концентрации.

Изобретение относится к способу оценки эффективности эрадикационной терапии у больных ишемической болезнью сердца с сочетанием гастродуоденальной патологии, заключающемуся в исследовании слюны, отличающемуся тем, что слюну больного в объеме 50-100 мкл, полученную после завершения эрадикационной терапии, наносят на предметное стекло и проводят дегидратацию препаратов в потоке теплого воздуха при температуре 40-50°C и влажности 20-30% в течение 15-20 минут в горизонтальном положении, сравнивают полученные кристаллоскопические фации с паттерном, характерным для успешной эрадикационной терапии, по четырем показателям, первым из которых является индекс структурности, вторым - кристаллизуемость, третьим - степень деструкции фации, четвертым - выраженность белковой краевой зоны, при этом при совпадении значений не менее трех из них с паттерном фиксируют эффективность эрадикационной терапии. Изобретение обеспечивает ускорение анализа с одновременным упрощением метода оценки эффективности. При подобной оценке чувствительность анализа составляет 89% по отношению к комбинации морфологического и биохимического (быстрого уреазного) методов диагностики хеликобактериоза. Кроме того, является неинвазивным, не требует специализированного оборудования и реактивов, выполняется в течение 10-15 мин, прост в исполнении, экономичен. 1 табл., 2 ил.
Наверх