Способ получения иммуностимулятора пептидной природы (варианты) и бад на его основе

Изобретение относится к области пищевой и медицинской промышленности и может быть использовано для получения иммуностимулятора пептидной природы из нервной ткани морских гидробионтов. Для этого проводят размораживание, измельчение сырья, экстрагирование его 3%-ным раствором уксусной кислоты, получение и отделение надосадочной жидкости, выделение конечного продукта. При этом сырье экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 часа, затем подщелачивают раствором бикарбоната натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% уксусной кислоте, выдерживают в течение одного часа, полученную массу центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, к надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до 30% концентрации раствора, выдерживают при помешивании в течение двух часов, снова центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость диафильтруют на кассетной мембране с пределом разделения 1000 Да четырежды с добавлением к получаемому концентрату дистиллированной воды в соотношении концентрат : вода 1:2 до получения раствора с конечным веществом от 1000 до 15000 Да. Также предложена биологически активная добавка. Группа изобретений обеспечивает получение иммуностимулятора пептидной природы с повышенной биологической активностью за счет увеличения содержания в нем пептидов, обладающих иммуностимулирующим действием. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 6 пр.

 

Изобретение относится к области пищевой и медицинской промышленности, а именно к способу получения иммуностимулятора из нервной ткани морских гидробионтов. Полученный предлагаемыми способами препарат может применяться, как биологически активная добавка, и предназначен для приема внутрь (перорально).

Известен способ получения иммуностимулятора из молок лососевых рыб (патент РФ 2091073, A61K 35/60), представляющий собой замораживание сырья, измельчение, экстрагирование 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, центрифугирование, ультра- и диафильтрацию экстракта в растворе 0,9% хлорида натрия с pH 6,0-6,5 через пористый материал с пределом разделения 5000 Да, стерилизацию и лиофильное высушивание.

Известен способ получения иммуностимулятора из ганглий кальмара и каракатицы (патент РФ 2091072, A61K 35/60), включающий гомогенизацию сырья в воде, подкисленной уксусной кислотой до pH 3,5-4,5 и содержащей 0,1% хлористого цинка, отделение надосадочной жидкости, стерилизующую фильтрацию через мембранные фильтры с размером пор 0,8; 0,45; 0,22 мкм, концентрирование стерильного фильтрата в 5,5 раз на ультрафильтрационной установке через пористый материал с пределом разделения 1000-5000 Да с последующей очисткой в подщелоченной до pH 9-10 воде, повторное концентрирование на том же пористом материале и стерилизацию, лиофильное высушивание.

Недостатками этих способов являются:

- применение дорогостоящего ультрафильтрационного оборудования;

- отсутствие технологической операции по отделению веществ с молекулярной массой более 10000-15000 Да, что приводит к присутствию в препарате высокомолекулярных примесей, снижающих активность препарата и проявляющих аллергический эффект.

Известен способ получения иммуностимулирующего препарата из тимуса (патент РФ 1112606, A61K 38/22), заключающийся в очистке сырья, замораживании, измельчении сырья, экстракции 5-6 объемами 3%-ного раствора уксусной кислоты, содержащей хлористый цинк при соотношении хлористого цинка и уксусной кислоты 1:1000 в течение 48-72 ч, отделении надосадочной жидкости и выделении целевого продукта осаждением пятью объемами ацетона при t=(-3)-(-5)°С, экстракции полученного осадка водой при рН 6-7 и комнатной температуре в течение 1-3 ч.

Известен способ получения иммуностимулятора для повышения функции миндалин (патент РФ 1522485, A61K 35/30), включающий очистку сырья, замораживание, измельчение, экстракцию в 20-25 объемах 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, растворение и лиофилизацию целевого продукта, в качестве сырья используют миндалины человека.

Известен способ получения иммуностимулирующего вещества (авторское свидетельство СССР №1103392), заключающийся в том, что ганглии кальмара или каракатицы (нервную ткань) промывают водой и ацетоном, затем помещают в ацетон и выдерживают в ацетоне при температуре 4-10°С, гомогенизируют в воде, содержащей 0,1%-ного раствора хлористого цинка, подкисляют до рН 3,5-4,5 и выдерживают 24-48 ч, затем отделяют надосадочную жидкость, которую обрабатывают ацетоном при соотношении надосадочной жидкости и ацетона 1:6 по объему, при температуре 3-5°С, отделяют осадок, высушивают его, растворяют в воде с рН 6,0-7,0 и фильтруют.

Недостатками этих способов являются использование больших объемов дорогостоящего огнеопасного реактива (ацетона), неполное удаление высокомолекулярных белков и введение дополнительной стадии растворения осадка целевого продукта перед его высушиванием, что приводит к снижению выхода.

Наиболее близким по технической сущности к заявленному способу является способ получения иммуностимулятора из нервной ткани морских гидробионтов (патент РФ 2222337, A61K 35/30, A61K 35/60, A23L 1/333), включающий разморозку замороженного сырья (нервную ткань головоногих моллюсков: кальмаров, каракатиц, осьминогов; мозг морских млекопитающих: белух, кашалотов, китов, моржей, ларги, нерпы, лахтака, акибы; мозг рыб: лососевых, осетровых, сельдевых, тресковых, камбаловых, окуневых), измельчение, экстрагирование 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, центрифугирование, отделение надосадочной жидкости и выделение целевого продукта путем ультрафильтрации и диафильтрации, которые проводят в две стадии на двух мембранах с различным пределом разделения по молекулярной массе. Иммуностимулятор, полученный по предлагаемому способу, имеет четко ограниченные пределы молекулярной массы 1000 - 10000-15000 Да.

Недостатками прототипа - способа являются:

- использование дорогостоящего ультрафильтрационного оборудования;

- отсутствие стадии обезжиривания экстракта и как следствие - конечного продукта, что приводит к снижению срока хранения препарата из-за окисления липидов;

Известно, что ткани мозга различных животных содержат от 5 (серое вещество) до 17 (белое вещество) процентов липидов, часть которых представлены конъюгатами с белками и пептидами и могут легко попасть в концентрат раствора конечного продукта, полученный путем ступенчатой ультрафильтрации.

Аналоги и прототип по БАД.

Известно иммуномодулирующее средство Риботаб (патент РФ 2257216, A61K 35/12, A61K 35/55), имеющее в своем составе препарат полипептидной природы, полученный из тимуса животных (тактивин, или тималин, или тимоген) - 0,15-0,3 мас. %, нуклеинат натрия - 6,0-8,0 мас. %, а также крахмал картофельный, молочный сахар, тальк, желатин, поливинилпирролидон и стеариновую кислоту.

Известен лечебно-профилактический продукт для людей и животных с иммуностимулирующим действием (патент РФ 2065707, A23L 1/305, A23L 1/325), содержащий мясо теплокровных животных, рыб, беспозвоночных и/или отходы их переработки - 99,99965-99,99950 мас. %, иммуностимуляторы пептидной природы, преимущественно ганглиин, тималин, тимоген, Т-активин, вилозен, - 0,00035-0,0005 мас. %.

Недостатком данных патентов является использование в качестве сырья тканей сельскохозяйственных животных без термической обработки, что является риском распространения вирусных заболеваний и бешенства прионовой природы.

Известна иммуностимулирующая композиция (патент РФ №2110254, A61K 9/14, A61K 45/06), включающая препараты в следующем соотношении, мг: иммунокорректор (ганглиин или молокин или гепалин) - 0,5-6, парацетамол 200-500, витамин С - 50-100, антигистаминное средство - 0,5-25, глюкозу - 300-500.

Наиболее близким техническим решением для продукта является пищевая биологически активная добавка «Тинростим-С» (патент РФ 2105504, A23L 1/305, A23L 1/29, A61K 38/17), содержащая в качестве пептидов ганглиин 0,2-0,4%, полученный из нервной ткани кальмара или каракатицы, аскорбиновую кислоту - 9-11%, остальное - глюкоза.

Недостатком прототипа - продукта является ограниченная сырьевая база, небольшое содержание пептидов.

Основной задачей, на решение которой направлены заявляемые способ получения иммуностимулятора пептидной природы (варианты) и БАД на его основе, является увеличение выхода конечного продукта, удешевление и упрощение способа его получения, повышение биологической активности добавок, содержащих конечный продукт.

Единый технический результат, достигаемый при осуществлении заявляемой группы изобретений, состоит в получении БАД с повышенной биологической активностью за счет увеличения содержания в ней пептидов, обладающих иммуностимулирующим действием.

Вариант 1. Указанный технический результат достигается тем, что в известном способе получения иммуностимулятора пептидной природы из нервной ткани морских гидробионтов, включающем размораживание сырья, его измельчение, экстрагирование в 3% уксусной кислоте, получение и отделение надосадочной жидкости, выделение конечного продукта, согласно изобретению, сырье экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч, затем смесь подщелачивают бикарбонатом натрия до pH=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты и выдерживают в течение одного часа, полученную массу центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, к полученной надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до 30% концентрации раствора, смесь выдерживают при помешивании в течение двух часов, снова центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость диафильтруют на кассетной мембране с пределом разделения 1000 Да, при этом диафильтрацию осуществляют четырежды с добавлением к получаемому концентрату дистиллированной воды в соотношении концентрат : вода 1:2 до получения раствора с конечным веществом от 1000 до 15000 Да, концентрат подвергают лиофильной сушке с последующим ультрафиолетовым облучением и стерильно упаковывают.

В качестве сырья используют замороженную нервную ткань морских гидробионтов, а именно: головоногих моллюсков - кальмаров, каракатиц, осьминогов; мозг морских млекопитающих - белух, кашалотов, китов, моржей, ларги, нерпы, лахтака, акибы; мозг рыб - лососевых, осетровых, сельдевых, тресковых, камбаловых, окуневых.

Обработка экстракта раствором хитозана до стадии отделения осадка измельченной ткани позволяет удалить липидные примеси и тем самым обеспечить надлежащую хранимоспособность конечного продукта.

Добавление сульфата аммония способствует удалению высокомолекулярных белков из надосадочной жидкости. Ограничение высокомолекулярных веществ в препарате необходимо не только для получения продукта с наибольшей активностью, но и для обеспечения антиаллергического эффекта.

Применяемый сульфат аммония является веществом нетоксичным, безопасным в пожарном отношении и недорогим.

Этот способ позволяет сконцентрировать раствор целевого продукта (низкомолекулярных пептидов) до небольшого объема, что облегчает последующую сушку. Очищенный концентрат содержит низкомолекулярные пептиды с молекулярной массой от 1000 до 10000-15000 Да. При применении данного способа получения препарата отделяются все балластные вещества с молекулярной массой более 10000-15000 Да, а при диафильтрации - все примеси менее 1000 Да. Выход иммуностимулятора, полученного этим способом, составляет 85-110 г.

Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала(95%), остальное - неорганические соли.

Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.

Как следует из представленных данных, все препараты, полученные по заявленному способу, содержат следовые количества пептидного материала с молекулярной массой более 10 кДа, либо не содержат его совсем.

Сущность изобретения состоит в том, что иммуностимулятор получают следующим образом: сырье размораживают на воздухе до температуры минус 4°С, измельчают на электромясорубке с диаметром пропускающих отверстий 2-3 мм. Измельченное сырье помещают в емкость, заливают 3% уксусной кислотой и экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч, затем смесь подщелачивают бикарбонатом натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% уксусной кислоте (одна часть раствора хитозана на 20 частей экстракта по объему) и выдерживают в течение одного часа. Полученную массу центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, к полученной надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до 30% концентрации раствора, смесь выдерживают при помешивании в течение двух часов, снова центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость диафильтруют на кассетной мембране (установка Pellicon фирмы Millipore, Франция или Т66.00.00.000ПС Научно-производственная фирма «Гелла-ТЭКО», РФ, г. Москва) с пределом разделения 1000 Да, при этом диафильтрацию осуществляют четырежды с добавлением к получаемому концентрату дистиллированной воды в соотношении концентрат : вода 1:2 до получения раствора с конечным веществом от 1000 до 15000 Да. Далее концентрат подвергают лиофильной сушке, а затем стерилизуют ультрафиолетом в течение 15 мин и стерильно упаковывают.

Примеры осуществления способа по данному варианту приведены в примерах конкретного выполнения №1, 2.

Вариант 2. Указанный технический результат достигается тем, что в известном способе получения иммуностимулятора пептидной природы из нервной ткани морских гидробионтов, включающем размораживание сырья, его измельчение, экстрагирование в 3% уксусной кислоте, получение и отделение надосадочной жидкости, выделение конечного продукта, согласно изобретению, сырье экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч, затем смесь подщелачивают бикарбонатом натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты и выдерживают в течение одного часа, добавляют неорганический адсорбент природного происхождения, периодически перемешивая в течение 20 мин, затем отстаивают смесь в течение 4 часов, надосадочную жидкость декантируют и высушивают на вакуумной ротационной или распылительной сушках, в условиях исключающих нагрев выше 30-40°C, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают.

В качестве сырья используют замороженную нервную ткань морских гидробионтов, а именно: головоногих моллюсков - кальмаров, каракатиц, осьминогов; мозг морских млекопитающих - белух, кашалотов, китов, моржей, ларги, нерпы, лахтака, акибы; мозг рыб - лососевых, осетровых, сельдевых, тресковых, камбаловых, окуневых.

Добавление адсорбента в экстракт сразу после раствора хитозана до стадии отделения осадка измельченной ткани обеспечивает удаление высокомолекулярных белков.

В качестве адсорбентов используют сухой фильтроперлит (ГОСТ 30566-98, разрешен к использованию для очистки пищевых продуктов) или 20% суспензию бентонита (ОСТ 18-49-71, для винодельческой промышленности, пищевая добавка Е 558), либо любой пищевой сорбент, адсорбирующий высокомолекулярные белковые фракции.

Надосадочную жидкость декантируют без использования центрифугирования или сепарирования, так как используемые адсорбенты хорошо осветляют раствор, не оставляя в нем мелкодисперсных взвесей. Выход иммуностимулятора, полученного данным способом, составляет 45-100 г.

После высушивания в вышеуказанных условиях конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий из пептидного материала (95%), остальное - неорганические соли. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.

Сущность изобретения состоит в том, что иммуностимулятор получают следующим образом: сырье размораживают на воздухе до температуры минус 4°C, измельчают на электромясорубке с диаметром пропускающих отверстий 2-3 мм. Измельченное сырье помещают в емкость, заливают 3% уксусной кислотой и экстрагируют в течение 40 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч, затем смесь подщелачивают бикарбонатом натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% уксусной кислоте (одна часть раствора хитозана на 20 частей экстракта по объему) и выдерживают в течение одного часа. В смесь добавляют неорганический адсорбент природного происхождения в количестве, зависящем от начального объема экстракта, периодически перемешивая в течение 20 мин, затем отстаивают смесь в течение 4 часов. Надосадочную жидкость декантируют и высушивают на вакуумной ротационной или распылительной сушках, в условиях исключающих нагрев выше 30-40°C, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают.

Примеры осуществления способа по данному варианту приведены в примерах конкретного выполнения №3, 4, 5, 6.

Преимущества вышеуказанных способов по сравнению с прототипом:

1. Применяется раствор хитозана, позволяющий очистить экстракт от липидных примесей;

2. Для удаления высокомолекулярных белков используют:

а) высаливание надосадочной жидкости сульфатом аммония после отделения осадка исходного измельченного сырья с последующей диафильтрацией через мембрану с порогом удерживания 1000 Да (вариант 1):

б) обработку экстракта неорганическими адсорбентами природного происхождения с последующим декантированием надосадочной жидкости (вариант 2).

3. Технологии не требуют многоступенчатой ультрафильтрации и стерилизующей фильтрации;

4. В варианте 2 не используются центрифуги или сепараторы, что значительно упрощает и удешевляет способ получения иммуностимулятора;

5. Способы исключают добавление хлористого цинка.

6. Получают иммуностимулятор с высокой биологической активностью.

Первый вариант заявляемого способа более длительный, чем второй, но позволяет получить высокий выход конечного продукта, в то время как второй вариант более дешевый и упрощенный с выходом конечного продукта ниже, чем первый вариант.

Указанный технический результат достигается тем, что предлагаемыми вариантами способа получают иммуностимулятор пептидной природы, входящий в состав биологически активной добавки, имеющей две формы выпуска: порошок и таблетки, и содержащей следующие компоненты:

Форма выпуска - порошок (в 1 порошке, %)

Пептиды - 0,1-0,5,

Аскорбиновая кислота - 8-16,

D-глюкоза или

кристаллическая глюкоза - остальное.

Форма выпуска - таблетки (в 1 таблетке, мг)

Пептиды - 1,0-1,5,

Аскорбиновая кислота - 8-10,

D-глюкоза или

кристаллическая глюкоза - 118-125,

Целлюлоза микрокристаллическая или крахмал картофельный - 68,8,

Кальция стеарат - 2,0.

Повышенная биологическая ценность пептида доказана проведением иммунологических исследований иммуностимулятора, сырьем для которого явились оптические ганглии кальмара, полученного по одному из вариантов заявляемых способов. В исследование включали добровольцев из числа студентов 2-го курса ШБМ ДВФУ в возрасте 19-22 лет, не имеющих в анамнезе указаний на гиперчувствительность или аллергические реакции на компоненты препарата, хронические заболевания (сахарный диабет, туберкулез, хронические заболевания печени и почек, онкологические заболевания, ВИЧ, др.), беременность, а также не страдающих острыми инфекционными заболеваниями на момент исследования. Кроме того, в исследование не включали людей, принимавших иммуномодулирующие препараты в течение 4 недель до начала исследования. Проведение исследования было одобрено биоэтическим комитетом ШБМ ДВФУ.

При испытаниях использовались препараты в форме порошка и таблеток.

Добровольцы принимали препараты по одной дозе, содержащей 2 мг иммуностимулятора, в сутки в утренние часы до еды в течение 1 месяца.

Иммунофенотипирование лимфоцитов крови проводили на проточном цитофлуориметре Beckman Coulter Epics XL в соответствии со стандартизированной технологией (Хайдуков СВ., Байдун Л.А., Зурочка А.В., Тотолян Арег А. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлуориметров-анализаторов // Медицинская иммунология.- 2012.- Т. 14.-№3. - С. 255-268). Для оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток крови у добровольцев на фоне применения препаратов использована реакция восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) (Виксман М.Е., Маянский А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия: Методические рекомендации - Казань: КазанскийНИИЭМ. - 2011. - 11 с). Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали Staphilococcus aureus с подсчетом фагоцитарного индекса (процентное содержание фагоцитирующих нейтрофилов) - ФИ и фагоцитарного числа (среднее число микроорганизмов, поглощенных одним нейтрофилом) - ФЧ.

Применение препаратов оказало положительное влияние на количественный и качественный состав периферической крови у лиц на фоне стандартного курса приема препаратов с увеличением абсолютного количества лейкоцитов на 10,8-17,3%, лимфоцитов на 18,8%.

Была установлена способность препаратов стимулировать функциональную активность и поглотительную способность фагоцитирующих клеток крови добровольцев с увеличением фагоцитарного индекса на 16,7-25,3%, фагоцитарного числа на 7,14-28,0%, стимулированного НСТ-теста на 7,3-17,9% (Таблица 2).

При динамическом наблюдении субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у добровольцев после приема препаратов было выявлено достоверное увеличение количества CD3+, CD4+, CD3+HLA-DR+ клеток. Положительная динамика свидетельствует об иммуностимулирующем влиянии препаратов, как в форме порошка, так и в форме таблеток.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что употребление обоих форм препаратов приводит к достоверному увеличению фагоцитарного индекса на 17-25%, фагоцитарного числа на 7-28%, стимулированного НСТ-теста на 7-18%.

Известная БАД «Тинростим-С», выпускаемая также в порошках, имеет в своем составе небольшое количество пептидов, за счет чего снижается ее биологическая ценность.

При сравнительном анализе результатов исследований БАД, полученного по способу-прототипу, было установлено, что включение препарата в комплексную терапию обеспечивает увеличение фагоцитарного индекса на 1-10% (Н.Н. Беседнова, Л.М. Эпштейн «Биологически активная добавка к пище ТИНРОСТИМ» (в помощь практикующему врачу), Владивосток: ТИНРО-Центр, 2003, с. 47), а это несколько ниже, чем установлено для заявляемых форм.

Таким образом, иммуностимулятор, полученный заявляемым способом (варианты), в отличие от прототипа, содержит повышенное содержание пептидов, что позволяет усилить иммуностимулирующее действие у продукта и повысить его эффективность.

Кроме того, предложена таблетированная форма выпуска, которая удобна для перорального приема.

Содержание аскорбиновой кислоты в предлагаемой биологически активной добавке соответствует допустимой суточной норме, но увеличено по сравнению с прототипом, усиливая иммуностимулирующий эффект пептидов.

Использовать БАД возможно в качестве профилактического продукта в осенне-весенний период, как вспомогательное средство при лечении простудных и вирусных заболеваний, при вторичных иммунодефицитных состояниях различного генеза.

Изобретение подтверждается примерами конкретного выполнения:

Пример 1

10 кг замороженных ганглий кальмара размораживают до температуры минус 4°C в центре брикета и измельчают на электромясорубке. Экстракцию измельченных ганглий проводят в 50 л 3%-ного раствора уксусной кислоты. Время экстракции составляет 40 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 0,5 л 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Экстракционную массу центрифугируют на центрифуге при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость, которая является раствором с целевым веществом, отделяют и добавляют к ней 3,2 кг сульфата аммония, т.е. до достижения 30% концентрации. Периодически перемешивают смесь в течение двух часов, затем центрифугируют на центрифуге при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость подвергают диафильтрации на кассетной мембране с пределом разделения 1000 Да (установка Pellicon фирмы Millipore, Франция). После того как объем концентрата достигнет 3-4 л добавляют к нему 10 л дистиллированной воды и продолжают диафильтрацию. Процедуру с добавлением воды к концентрату повторяют 4 раза. Раствор с целевым веществом от 1000 до 15000 Да (концентрат) направляют на лиофильную сушку, сухой продукт облучают при перемешивании ультрафиолетом в течение 15 минут для стерилизации. Выход иммуностимулятора составил 110 г.

Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 6% минеральных веществ и 1,5% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 20 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 268±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.

Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в виде порошка следующего состава:

Пептиды - 0,3%,

Аскорбиновая кислота - 10%,

D-глюкоза - остальное.

Пример 2

9 кг замороженного мозга кеты размораживают на воздухе до температуры минус 4°С в центре брикета и измельчают. Экстракцию измельченного мозга проводят в 45 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты. Время экстракции составляет 36 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 450 мл 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Экстракционную массу разделяют на сепараторе и добавляют к фильтрату 3 кг сульфата аммония, т.е. до достижения 30% концентрации. Периодически перемешивают смесь в течение двух часов, затем фильтруют на нутч-фильтре. Надосадочную жидкость подвергают диафильтрации на установке Т66.00.00.000ПС Научно-производственная фирма «Гелла-ТЭКО», РФ, г. Москва) с керамическим мембранным элементом КУФЭ-1, предел разделения 1000 Да. После того как объем концентрата достигнет 3-4 л добавляют к нему 10 л дистиллированной воды и продолжают диафильтрацию. Процедуру с добавлением воды к концентрату повторяют 4 раза. Раствор с целевым веществом от 1000 до 15000 Да (концентрат) направляют на лиофильную сушку, сухой продукт облучают при перемешивании ультрафиолетом в течение 15 минут для стерилизации. Выход иммуностимулятора составил 87 г.

Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 7% минеральных веществ и 1,8% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 20 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 268±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.

Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в таблетированной форме, одна таблетка которой содержит:

Пептиды - 1,3 мг,

Аскорбиновая кислота - 10 мг,

D-глюкоза - 118 мг,

Целлюлоза микрокристаллическая - 68,8 мг,

Кальция стеарата - 2 мг.

Пример 3

10 кг замороженного мозга ларги размораживают на воздухе до температуры минус 4°C в центре брикета и измельчают на электромясорубке. Экстракцию измельченного мозга ларги проводят в 50 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты. Время экстракции 48 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждый час. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 0,5 л 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Затем добавляют 1,5 кг сухого фильтроперлита, периодически перемешивают в течение 20 минут, после чего дают смеси отстояться в течение 4 часов. Надосадочную жидкость декантируют и высушивают на вакуумной ротационной сушке, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают. Выход препарата составил 90 г.

Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 3% минеральных веществ и 3,5% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 20 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 268±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.

Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в виде порошка следующего состава:

Пептиды - 0,4%,

Аскорбиновая кислота - 12%,

Кристаллическая глюкоза - остальное.

Пример 4

5 кг замороженного мозга горбуши размораживают на воздухе до температуры минус 4°С в центре брикета и измельчают. Экстракцию измельченного мозга проводят в 25 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты. Время экстракции составляет 35 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 250 мл 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Затем добавляют 800 г сухого фильтроперлита, периодически перемешивают в течение 20 минут, после чего дают смеси отстояться в течение 4 часов. Надосадочную жидкость декантируют и высушивают на распылительной сушке, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают. Выход препарата составил 45 г.

Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 2,2% минеральных веществ и 3,0% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 18 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 269±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.

Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в виде порошка следующего состава:

Пептиды - 0,2%,

Аскорбиновая кислота - 11%,

D-глюкоза - остальное.

Пример 5

8 кг замороженных оптических ганглиев осьминога размораживают на воздухе до температуры минус 4°C в центре брикета и измельчают. Экстракцию измельченного материала проводят в 40 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты в течение 40 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 2 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 400 мл 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Затем добавляют 4,4 л 20% водной суспензии бентонита, периодически перемешивают в течение 20 минут, после чего дают смеси отстояться в течение 4 часов. Прозрачную часть надосадочной жидкости декантируют и высушивают на распылительной сушке, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают. Выход препарата составил 76 г.

Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 2,7% минеральных веществ и 4% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 18 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 267±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.

Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в таблетированной форме, одна таблетка которой содержит:

Пептиды - 1,5 мг,

Аскорбиновая кислота - 9 мг,

D-глюкоза - 125 мг,

Картофельный крахмал -68,8 мг,

Кальция стеарата - 2 мг.

Пример 6

12 кг замороженных оптических ганглиев кальмара размораживают на воздухе до температуры минус 4°C в центре брикета и измельчают. Экстракцию измельченных ганглиев проводят в 60 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты в течение 40 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 2 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 600 мл 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Затем добавляют 7 л 20% водной суспензии бентонита, периодически перемешивают в течение 20 минут, после чего дают смеси отстояться в течение 4 часов. Прозрачную часть надосадочной жидкости декантируют, остальное отделяют на нутч-фильтре, супернатанты объединяют и высушивают на вакуумной ротационной сушке, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают. Выход препарата составил 110 г.

Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 3% минеральных веществ и 3% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 20 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 268±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.

Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в таблетированной форме, одна таблетка которой содержит:

Пептиды - 1,5 мг,

Аскорбиновая кислота - 10 мг,

D-глюкоза - 120 мг,

Целлюлоза микрокристаллическая - 68,8 мг,

Кальция стеарата - 2 мг.

1. Способ получения иммуностимулятора пептидной природы из нервной ткани морских гидробионтов, включающий размораживание, измельчение сырья, экстрагирование его 3%-ным раствором уксусной кислоты, получение и отделение надосадочной жидкости, выделение конечного продукта, отличающийся тем, что сырье экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 часа, затем подщелачивают раствором бикарбоната натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% уксусной кислоте, выдерживают в течение одного часа, полученную массу центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, к надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до 30% концентрации раствора, выдерживают при помешивании в течение двух часов, снова центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость диафильтруют на кассетной мембране с пределом разделения 1000 Да четырежды с добавлением к получаемому концентрату дистиллированной воды в соотношении концентрат : вода 1:2 до получения раствора с конечным веществом от 1000 до 15000 Да.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что концентрат подвергают лиофильной сушке с последующим ультрафиолетовым облучением.

3. Способ получения иммуностимулятора пептидной природы из нервной ткани морских гидробионтов, включающий размораживание и измельчение сырья, экстрагирование его 3%-ным раствором уксусной кислоты, получение и отделение надосадочной жидкости, выделение конечного продукта, отличающийся тем, что сырье экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 часа, затем подщелачивают раствором бикарбоната натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% уксусной кислоте, выдерживают в течение одного часа, добавляют неорганический адсорбент природного происхождения, периодически перемешивая в течение 20 мин, затем отстаивают смесь в течение 4 часов, надосадочную жидкость декантируют.

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что концентрат высушивают на вакуумной ротационной или распылительной сушках, в условиях, исключающих нагрев выше 30-40°C, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой.

5. Биологически активная добавка, содержащая природный пептид, аскорбиновую кислоту, глюкозу, отличающаяся тем, что в качестве пептида используют иммуностимулятор пептидной природы, полученный способом по пп. 1 и 3.

6. Биологически активная добавка по п. 5, отличающаяся тем, что биологически активная добавка имеет форму выпуска порошок при следующем соотношении компонентов (в 1 порошке, %):

Пептиды - 0,1-0,5,

Аскорбиновая кислота - 8-16,

D-глюкоза или кристаллическая глюкоза - остальное.

7. Биологически активная добавка по п. 5, отличающаяся тем, что биологически активная добавка имеет форму выпуска таблетку при следующем соотношении компонентов (в 1 таблетке, мг):

Пептиды - 1,0-1,5,

Аскорбиновая кислота - 8-10,

D-глюкоза или кристаллическая глюкоза - 118-125,

Целлюлоза микрокристаллическая

или крахмал картофельный - 68,8,

Кальция стеарат - 2,0.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для получения композиции для предупреждения или лечения аутоиммунного заболевания.

Изобретение относится к соединениям общей формулы I: а также к фармацевтическим композициям на их основе и применению для лечения воспалительных или аутоиммунных заболеваний, ассоциированных с аберрантной пролиферацией В-клеток.

Изобретение относится к соединению формулы (I) или к его фармацевтически приемлемой соли, а также к лекарственному средству или фармацевтической композиции, которая содержит данное соединение в качестве действующего вещества, обладающего ингибирующим эффектом в отношении ксантиноксидазы.

Изобретение относится к соединению, представленному формулой (Ia): в которой кольцо Аа представлено следующей формулой (IIa-1), где Т1а является атомом азота, U1a является атомом азота, Ха является CR9a (где R9a представляет собой атом водорода), Ya является CR10a (где R10a представляет собой атом водорода), R1a является атомом водорода, кольцо Ва является С4-7 циклоалканом, бензолом или 4-6-членным неароматическим гетероциклом, содержащим 1 гетероатом, выбранный из атома азота, L1a является одинарной связью, L2a является одинарной связью, C1-3 алкиленовой группой (С1-3 алкиленовая группа не замещена или замещена цианогруппой) или C1-3 галогеналкиленовой группой, L3a является одинарной связью или представлен любой из следующих формул: ,na является 0 или 1, R3a является гидроксигруппой, атомом галогена, цианогруппой или метильной группой, значения остальных радикалов представлены в формуле изобретения.

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармацевтической промышленности, и описывает фармацевтическую композицию, выполненную в виде диспергируемой таблетки, включающую дезлоратадин и способ ее изготовления.

Изобретение относится к биологически активным пептидам. Предложен пептид формулы H-Gly-Ala-Ile-Pro-Leu-Arg-Lys-Leu-Lys-Thr-Trp-Tyr-OH, обладающий способностью ингибировать миграцию клеток, стимулированную хемокином TARC, и способ его получения.

Изобретение относится к новым бициклическим соединениям пиперазина формулы I, , а также к их фармацевтически приемлемым солям. Технический результат: получены новые соединения формулы I, обладающие модулирующей активностью в отношении тирозинкиназы Брутона (Btk), которые могут быть использованы для приготовления фармацевтических композиций, а также для лечения иммунных расстройств, таких как воспаление, опосредованное киназой.

Изобретение относится к соединению, имеющему систематическое название 4-(4-{[2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-ен-1-ил]метил}пиперазин-1-ил)-N-({3-нитро-4-[(тетрагидро-2Н-пиран-4-илметил)амино]фенил}сульфонил)-2-(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-илокси)бензамид (соединение 1) в форме ангидрата свободного основания кристаллической формы, гидрата свободного основания кристаллической формы, сольвата кристаллической формы, гидрохлоридной соли кристаллической формы или сульфатной соли кристаллической формы.

Настоящее изобретение относится к новым пиридазинамидам формулы I, где все переменные заместители определены в формуле изобретения, и их фармацевтически приемлемым солям, а также к фармацевтической композиции на их основе.

Изобретение относится к новому соединению - (5-бром-2-гидроксифенил)метилиденгидразиду 2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]уксусной кислоты формулы I. Соединение обладает антиоксидантной активностью и обладает стимулирующей защитной активностью фагоцитов.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно для регуляции гемостаза и заживления ран. Группа изобретений включает гемостатический материал, содержащий пептид, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1 или его последовательность аналогов аминокислот, и каркас, в котором упомянутый каркас представляет собой натуральный полимер желатин, где желатин содержит абсорбируемую гемостатическую порошкообразную матрицу, губкообразную матрицу, пастообразную матрицу, гелеобразную матрицу или их комбинации, и указанный желатин является сшитым и находится в форме частиц с жидким носителем, а также материал для заживления тканей аналогичного состава и способ обеспечения кровоостанавливающего лечения или заживления тканей в месте раны, включающий формирование гемостатического материала или материала для заживления тканей аналогичного состава и нанесение гемостатического материала или материала для заживления тканей на место раны.
Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии, в частности к способу получения активной фармацевтической субстанции рекомбинантного бисметионилгистона Н1.3.

Предложенное изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению ингибиторов ангиогенеза, и может быть использовано для лечения заболеваний, вызванных ангиогенезом, таких как опухоль или возрастная дегенерация макулы, диабетическая ретинопатия или хориоретинопатия.

Изобретение относится к способу повышения частоты имплантации эмбриона в материнской матке млекопитающих. Способ осуществляют путем введения в матку млекопитающего эффективного количества бета-галактозид-связывающего лектина или его алкилированной формы перед предимплантационным периодом.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к способу выделения рекомбинантного белка, содержащего в своем составе последовательности миелопептидов и представленного последовательностью SEQ ID NO:1.

Изобретения касаются способа получения липопротеинового комплекса, использования совокупности полученных липопротеиновых комплексов в получении фармацевтической композиции и применении для лечения и/или предупреждения дислипидемических расстройств.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к ветеринарной иммунологии. Предложен способ получения трансфер-фактора для профилактики вирусных болезней птиц, включающий приготовление экстракта лимфоцитов, гидролиз ДНК-азой, диализ с последующей консервацией или лиофилизацией целевого продукта, где в качестве источника лимфоцитов используют селезенки вакцинированных против одной или нескольких инфекций или переболевших цыплят или кур.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для специфической пассивной профилактики вирусных инфекций бройлеров. Способ включает введение птице трансфер-фактора.

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармакологии, и описывает способ получения пленочных материалов из натурального шелка, а именно из фиброина, покрытых лекарственным препаратом.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуносупрессивным средствам, и может быть использовано для лечения системной красной волчанки (SLE).

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины и касается фармацевтической композиции для предупреждения и лечения неалкогольной жировой болезни печени (НЖБП), включающей конъюгат, полученный путем ковалентного связывания инсулинотропного пептида и Fc-фрагмента иммуноглобулина посредством непептидильного полимера, в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель, где неалкогольная жировая болезнь печени выбрана из группы: простого стеатоза, жировых заболеваний печени, вызванных недостаточностью питания, голоданием, ожирением и диабетом, стеатогепатита, фиброза печени и цирроза печени. Раскрыт также способ лечения. Группа изобретений обеспечивает сохранение in-vivo активности пептида на относительно высоком уровне и заметно увеличивает период полувыведения из крови, предупреждая тем самым накопление триглицеридов, которое является характерной особенностью неалкогольной жировой болезни печени. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области пищевой и медицинской промышленности и может быть использовано для получения иммуностимулятора пептидной природы из нервной ткани морских гидробионтов. Для этого проводят размораживание, измельчение сырья, экстрагирование его 3-ным раствором уксусной кислоты, получение и отделение надосадочной жидкости, выделение конечного продукта. При этом сырье экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 часа, затем подщелачивают раствором бикарбоната натрия до рН8,0-8,5, добавляют 0,3 раствор хитозана в 3 уксусной кислоте, выдерживают в течение одного часа, полученную массу центрифугируют на центрифуге 5000 обмин в течение 20 мин, к надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до 30 концентрации раствора, выдерживают при помешивании в течение двух часов, снова центрифугируют на центрифуге 5000 обмин в течение 20 мин, надосадочную жидкость диафильтруют на кассетной мембране с пределом разделения 1000 Да четырежды с добавлением к получаемому концентрату дистиллированной воды в соотношении концентрат : вода 1:2 до получения раствора с конечным веществом от 1000 до 15000 Да. Также предложена биологически активная добавка. Группа изобретений обеспечивает получение иммуностимулятора пептидной природы с повышенной биологической активностью за счет увеличения содержания в нем пептидов, обладающих иммуностимулирующим действием. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 6 пр.

Наверх