Способ выделения липазы
Союз Советских
Социалистииеских республик
О П И С А Н И Е „„ в,овв
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено19.11.76;(21) 2191880/18 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано05.06.77.Бюллетень №21 (46) Дата опубликования описания 07.09.77 (51) М, Кл.е
С 07 С 7/026
Государстаенный коннтет
Совета Мнннотроа СССР по делю нзобретеннй н открытнй (53) УДК 612.015.32 (088.8) ГЛ, Ямпольская, А.В. Еленский, В.К. Мазо, В.Н. Измайлова и В.А, Шатерников (72) Авторы изобретения (71) 3
) Заявитель Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М.В. Ломоносова (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛИПАЗЫ
Изобретение относится к способам полу; чения медицинсхих препаратов.
Йзвестен способ выделений ферментов глицеро-липндного цикла методом афинной хроматографии, где в качестве адсорбента и субстрата используют полимер с гидроксильными группами, этерифицированными длинноцепочечными. жирными кислотами. Фермент элюируют растворами поверхностноактивных вешеств, а затем очншают ацето- Я иом (lj.
Однако известный способ является трудоемким и многосталкийнцм процессом, а также не обеспечивает высокой степени чистоты и интактности конечного продукта, )5
Белью изобретения является упрошение процесса, а также повышение степени чистоты и интактности конечного продукта.
Эта цель достигается тем, что в отличие от известного ранее способа выбран но- 20 вый носитель - силикагель с оливковым масломм — высокоселективный к данному липолитическому ферменту, а также другой элюент
- хлористый натрий. Применение этих двух новых компонентов позволяет избежать про- 2а цесса дополнительной очистки конечного продукта в ацетоне, который вызывал инактнваQHlo фермента.
Способ пригоден для выделения и очист ки липазы из поджелудочной железы, а также для дополнительной очистки коммерчвс» ких препаратов, На чертеже представлены хроматограммы выделения липазы по предлагаемому способу. г
Способ поясняется следуюшими приме,рами, I
Пример 1. Оливковое масло наносят на порошок силикагеля, птдрофобизованный лецитином. Предварительно хроматографический силикагель активируют при 120-160оС в течение 2 час, смешивакл 8 г оклика» геля, 0,5 мл лецитина и 6 мл оливкового масла в эфире.
Колонку диаметром BO мм и длиной 25 мм наполняют суспенэней носителя в буфере рН 8,0 {5 ° 10 М трис-НС, с добавкой
Э,З 10 М "аС. е). Уравновешивают колонку тем же буфером до рН 7,8-8,0, что достигается пропусканием буфера через колои560888 дб
100
Фа((Составитель С. Малютина
Редактор О. Иванова Техред Я. Аидрейчук Корректор Е. Папп
Заказ 1657/138 Тираж 553, Подписное
11НИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ПГ1П "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 ку, в течение 10 час. Скорость элюировання через колонку 10 мл/час.
На колонку наносят 10 мл раствора комм фческого препарата липаэы t оптическая плотность раствора 2 при дл««е волны
280 им равна 2,6; удельная активность A в условных единицах равна 16). Элюирование проводят при комнатной температуре буфером трис-HC t рН 8,0, отбирая фракции объемом 2 мл. После прекрашения выхода «о с колонки белковых фракций при пропусканйи буфера липазную активность элюируют 0,4
МйаС,Й (хроматограмма 1). Происходит эффективное отделение липазы от сопутствующих белков. Легко получается узкая фракция, l5 содержашая высокую липолитическую активность (4 мл, 9 -0,1, А =190 у.е,), Кривая 3 на чертеже показывает липолитическую активность белковых фракций. Активность по сравнению с исходным препаратом воэ- 20 росла в 12 раз, Пример 2. На колонку длиной 188 мм и диметром 20 мм, пригото вленную аналогичным образом, наносят 3 мл водного экстракта иэ делипидиэованной поджелудочной желе- 2S зы свиньи (Э 26, A=0,4 у,е.). Получают
2 фракции, содержашие лнпазную активность (4 мл, Э 0,02, А320 у.е.). Активность по сравнению с исходным экстрактом возросла в 800 раэ, по сравнению с коммерческим Олаинским препаратом в 20 раз (хрома тограмма 2 ) .
Растворы ".охраняют липаэную активность в течение длительного времени при хранении растворов при 4оС.
Предлагаемый способ позволяет повысить с,епень чистоты липазы в 12 раэ, исходя из коммерческого препарата, в 800 разиэ экстракта поджелудочной железы, Использование предложенного носителя позволяет проводить элюирование носителя хлористым натрием вместо детергентов или желчных солей, которые нарушают нативную структуру белка.
Формула изобретения
Способ выделения лнпазы методом афинной хроматографии, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что, с целью упрошения процесса, а также повышения степени чистоты и интактности конечного продукта, в качестве носителя используют силикагель с оливковым маслом, а в качестве элюента — хлористый натрий.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:
1. Патент Франции N. 2.220.538, С 07
7/02, 04. 1 О. 7 4, Д
