Способ получения арахидоновой кислоты

 

643496 берут в количестве 5-100Ъ от веса гбксана, из полученного концентрата мЕтиловых эфиров выделяют арахидоновую кислоту путем испарения элюента с пОследующим щелочным гидролизом, зкстракцией петролейным эфиром, подкислением полученной реакционной смеси " минеральной кислотой и зкстракцией арахидоновой кислоты петролейным эфиром.

Способ осуществляют следующим образом. 16

250 г липидов надпочечников крупного рогатого скота подвергают щелочному гидролизу с расчетом 20 мл 0,3 н. раствора едкого натра в метаноле на

1 г липидов. Гидролиз проводят в те- 18 чение 2 час при температуре рефлюкса н;перемешивании реакционной смеси в атмосфере аргона. По окончании гидролиэа смесь охлаждают льдом до температуры 0-5 С. В результате охлаждення содержание арахидоновой кислоты в смеси кислот, присутствующих в гндролизате, повышается с 8-10 до

l6-18Ъ (отн. Ъ о хроматограмме) .

Жндкую фазу отделяют через мелкопорйстую пластинку при помощи вакуумного насоса и извлекают неомыляемые липиды 3-4-кратным экстрагированием петролейным эфиром (ПЗ), При т.кип.

40-60 С порциями по 500 мл водноспиртовую Фазу подкисляют соляной кислотой до рН 1 и экстрагируют жирчЫе кислоты тремя-четырьмя порциями

П9 по 500 мл в атмосфере инертного газа. Жирно-кислотные экстракты соединяют и охлаждают 12-15 час при N температуре от -28 до -ЗООС, при этом происходит частичное выкристаллизовывание насыщенных жирных кислот, после чего содержание арахидоновой кислоты в растворе смеси кислот сос- 40 тавляет 24-25Ъ. Маточный раствор отделяют при этой же температуре непосредственно в другой кристаллизациснной цилиндр под действием вакуума через мелкопористую пластинку и под- 45 вергают низкотемпературной кристаллизации (HTK) при температуре от -75 до -78 С над твердой углекислотой в ечение 6-7 час. Содержание арахидоновой кислоты s смеси жирных кислот повышается до 40-45Ъ. После этого петролейный эфир удаляют на роторном испарителе и заменяют там же 700 мл ацетона. Ацетоновый раствор помещают на твердую углекислоту при -78 С на

10-12 час, после чего маточный раствор извлекают приведенным способом в следующий кристаллизационный сосуд (цилиндр), ацетон упаривают в потоке инертного газа (азот или аргон особой

Чистоты) до объема 150 мл и повторяют 60

НТК при -73 С в течение 10 час. Получаемый после упаривания ацетона концентрат арахидоновой кислоты (89 г содержат 65-67Ъ основного компонента) подвергается после метилирования очистке íà Q>O< jAgNO колонке с использованием гексана и/илн диэтилового эфира. Последний берут в количестве 5-100Ъ (от веса гексана), получают концентрат метиловых эфиров кислот в виде смеси с сольвентом .

Гексан и/или диэтиловый эфир испаряют, концентрат эфиров гидролизуют действием метанольного раствора МаОН, после гидролиза щелочную реакционную смесь экстрагируют петролейным эфиром, после этого реакционную смесь подкисляют соляной кислотой и экстрагируют арахидоновую кислоту петролейным эфиром.

После колоночной хроматографии выход составляет 5-6 г 95-97Ъ арахидоновой кислоты. Остальные 3-5Ъ состазляют более ненасыщенные жирнйе кислоты с 4- и 5-кратными связями.

В получаемой арахндоновой кислоте отсутствуют сопряженные полиеновые кислоты. Отсутствие сопряжения кислот проверялось по УФ-спектру на длине волн 233, 268, 278 и 315 нм. При испытании пригодности полученной арахидоновой кислоты для биосинтеза простагландина Е g (ПГЕ) выход последнего составил 33-35Ъ из расчета на свободную кислоту. выход ПГЕ определялся по известному методу щелочной деградации.

Анализы полученной арахидоновой кислоты, а также промежуточных продуктов осуществляют газохроматографическим методом на хроматографе Хром-4 (пламенно-ионизационный детектор, колонка 3,5 м 3 мм, жидкие фазы: 1,4бутандиолсукцинат и ХЕ-60, температура термостата колонки 210-220 С, газноситель- гелий) .

Формула изобретения

Способ получения арахидоновой кислоты из липидов животных тканей путем их омылеиия с использованием низкотемпературной кристаллизации, этерификации и омыления, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения технологии процесса, полученную после омыления смесь высших жирных кислот подвергают кристаллизации при 0-(-)5 С, из жидкой Фазы извлекают неомыляемую часть липидов зкстракцией петролейным эфиром, оставшуюся жидкую фазу подкисляют минеральной кислотой, из по- . лученной реакционной массы зкстрагируют жирные кислоты петролейным эфиром, экстракт подвергают кристаллизации при температуре от -28 до -30 С, а затем при -75 до -78©С, петролейный эфир отгоняют, полученную смесь кислот подвергают криста |лизации в ацетоне при температуре от -77 до -78 C с последующей его отгонкой, полученный при этом концентрат арахидоновой кислоты этерифицируют метиловым спиртом