Способ получения 7- -/-/- -амино- -(п-оксифенилацетамидо)- дезацетоксицефалоспорановой кислоты, или ее гидрата или ее соли

 

Сеез Советских

Соцналнстнчеовх

Респубпнк (ii 654171 (61) Дополнительный ь патенту (51) М, Кл. (22) 3аянлено 18.11.75 (21) 2143253/ 2189951/23-04 (23) Г1риорнтет 05.06.75 (32) 05,06.74

С 07 2 501/04

С 07 Q 501/60//

А 61 К 31/545 () УЙК 547.86. .07 (088.8 ) Таеударетвеаый пватет

СССР

an делан азабретеаае и етиентий (31) 24848/74 (33) СЩА

ОпубликоВано 25.03.796юллетень № 11

Q,aITà опубликования описания 28.03.79 (72) Автори наобретения

Иностранцы

Даниэль Бозарц и Абрахам Вебер (Франция) Иностранная фирма

"Бристоль Мейера Компани" . (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 7- 2 — (-) - с . -АМИНО- с4.—

-(A -ОКСИФЕНИЛАЦЕТАМИДО) ДЕЗАМИ(ЕТОКСИЦЕФАЛОСПОРАНОВОЙ

КИСЛОТЫ ИЛИ ЕЕ ГИДРАТА, ИЛИ ЕЕ СОЛИ

1 2

Изобретение относится к способам по. пучения,7-3-(-)-Ы.-амино-<-(т! -оксифенипацетамидо) пезацетоксицефалоспорановой кислоты, ее гипрата ипи сопи, которые могут найти применение в медицине. 5 Известен способ получения 7- 0 - (-)- Ы.--амино- ck-(n -оксифенилацетамидо)— дезацетокснцефалоспорановой кислоты ацилированием 7-аминоцезацетоксицефалоспорановой кислоты с(.-амино- Ф.-(!! — !О

-оксифенип)уксусной кислотой или ее реакционноспособными производными в ор. ганическом растворителе при 0 С fl).

Однако выходы целевого продукта не- тб высокие, кроме того, необходимо иметь зашитные группировки по амино- и окснгруппам, а реакцию вести при низких температурах. В качестве аминозашитных групп испопьзуют трет-бутоксикарбонипь- 20 ную, бензипоксикарбонильную, 2,2,2-трихпорэтаксикарбонипьную и др. ! (елью изобретения явпяется увеличение выхода 7- !3 -(-)-сА. -амино-оС. — fn — оксифенипацетамидо) пезацетоксицефапоспорановой кислоты.

Предлагаемый способ получения 7-0— (-)- С -амине- С -(n -оксифенилацетамидо) дезацетокспцефалоспорановой кислоты, ее гицрата ипи сопи, заключается в том, что водный раствор 7-3 -(-)- -амино-о(.» (И -ацет оксифенилацетамид о ) дезацетоксицефалоспорановой кислоты обрабатывают эстеразой, выбранной из группы, включаюшей сыворотку крови человека, сыворотку крови животного, пшеничные отруби, пшеничные завязи и Ьаийл яоо46is при рН 5,0-7,5 и при концентрации 510 мг/мп эстеразы на полный объем водного раствора. Выделяют продукт в виде свободной кислоты ипи ее гипрата или сопи.

Пример 1. Готовят растворы с концентрацией 0,5 мг/мл 7- 3 -(-)-А.-амино- ф -(л-ацетоксифенилацетамипо)дезацетоксицефапоспорановой кислоты (e-ацетоксицефалоксин) в нормальномфизиопогическом растворе и сыворотке крови

654171 человека. Также приготавливают стандартные растворы с концентрацией 0,5 мг/мл

7-Р -(-)- с -амико-с -(n -оксифенилацетамидо)дезацетоксицефалоспорановой кислоты (п -оксипефалоксин) как в физиопогическом сопевом растворе, так и в сыворотке чеповека.

Все приготовленные растворы помешают в термостат при 37 С, встряхивают о и через 0,2, 4,8 и 24 ч отбирают пробы 10 на анапиз. Растворы (примерно 5 мкп.на полоску)наливают на ватман К 1 (1,27 см (0,5 дюйма), полоски хроматографической бумаги, которые сушат и помещают в систему растворитепей, содержащую 80 об.ч. бутипацетата, 15 об.ч. н-бутилового спирта, 40 об. ч. уксусной кислоты и

24 об.ч. воды. Затем полоски дважды хроматографируют на ппастинах, засеянных Вск 1бе эоЫ4 лэ при рН 6,0.

Бисхроматограммы указывают на то, что а-ацетоксицефапоксин быстро гидролизуется до И вЂ” оксицефапоксина в сыворотке крови человека, но явпяется стабипьным в физиологическом сопевом растворе.

Пример 2. Энзиматический гидролиз и -ацетоксицефапексина в И-оксицефапексин (RN -1394 в Bt «578 ).

Дпя реакции готовят 10 г обезжиренных отрубей Shjloe 0,5 r RN — 1394 и воду до объема 1 л.

Эту смесь помещают в термостат при

37 С с перемешиванием и реакцию проспеживают хроматографически. 5 мп смеси наносят в виде пятнышка на полудюймовые 5 попоски хроматографической бумаги через

1,2,3 и 4 ч. Полоски проявляют в системе растворителей, содержащей 80 об. ч. бутилацетата, 15 об.ч. н-бутипового спирта, 40 об.ч. уксусной кислоты и 24 об.ч.

40 воды.

Проявпенные поносы дважды хроматографируют на Bacillus subt fis„ высеянную ри рН 6,0 на; агаровых пластинах, кото45 рые выдерживают в термостате при 28 С в течение ночи. На хроматограмме также попучают стандартную линию ЬЬ -578 рядом с реакционными образцамв, Анализ, пойученный измерением зон В1 -578 на

50 хроматограмме, показывает, что реакция завершилась. Проба ВЬ-578 в 4-часовом образце дает 440 мг продукта, теоретический выход составляет 450 мг ю-оксицефапексина.

Через 4 ч реакционную смесь центрифугируют и доводят рН споя до 4,0 с помощью НСР . Проба реакционной смеси показывает, что это 4НО мг В1. -578, который отделяют, лиофипиэируют и термостатируют.

Выделение BL -578. Все 2,8 г пиофилиэата суспендируют в 75 мп воды при быстром перемешивании, одновременно добавляют втечение 2 мин 150 мл ацетона., Смесь перемешивают в течение 20 мин и образовавшийся осадок отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр. 2 ипи 3 капли насьпценного водного раствора хлористого бария добавляют к фильтрату при тщательном перемешивании, чтобы завершить осаждение протеинов. Суспензию снова отфильтровывают через такой же фипьтр, как упоминапось раньше, и фипьтрат концентрируют в вакууме при 30чС до объема окопо 25 мп. Этот раствор снова отфипьтровывают, чтобы удалить небопьшое количество осадка, и фипьтрат концентрируют до объема около 2 мп при

22 С под уменьшенным давлением. К этоо му концентрату добавляют 10 мл ДМФА (диметипформамид) .и при царапании и перемешивании начинают кристалпизацию.

Смесь перемешивают в течение 20 мин и продукт отфипьтровывают, промывают

3 раза по 2 мп ДМФА и 4 раза по 20мл ацетона. Высушенный на воздухе продукт далее высушивают при давпении1 ммрт.ст. над цятиокисью фосфора в течение 2 ч, чтобы получить 500 мг сопьвата ДМФА.

ИК-спектр попностью соответствует требуемой структуре сопьвата BL -578 с

ДМФА.

500 мг понученного вещества перекристаппизовывают путем перемешивания в течение 5 мин в 2 мл воды с добавлением по каппям 6 мп ДМФА в течение

3 мин (кристадпизация начинается, когда добавлено окопо 3 мп ДМФА). Смесь перемешивают в течение 10 мин и фипьтруют,Белые кристаппъг промывают 3 раза (по 1 мл ДМФА) и 4 раза (по 10 мп) ацетоном. Продукт высушивают на воздухе и затем в вакууме над пятиокисью фосфора. Конечнь|й вес поспе сушки в вакууме составпяет 370 мг (выход 74%).

ИК- и ЯМР-спектры этого вещества полностью соответствуют спектрам

BL - 578, хотя обнаружено,что оно содержит некоторое количество бария.

Чтобы попытаться удапить сопи бария, указанную пробу перекристалпизовывают следующим образом. 200 мг полученного

BL - 578 растворяют и 6 мп теплой (40©С) воды, разбавляют ацетонитрилом

go точки помутнения и через 10 мин филвгруют. В фипвграт вносят затравку о 65417 1 б моногидрата Вь -578. После отстаивания Температура разложения (этанол в течение 30 мин при 25-30 С и в тече- В -578) образца 211оС, образца, полуние 30 мин при 22 С кристаллы отфилвг- ченного по предлагаемому способу н перовывают, промывают ацетонитрилом и су- рекристаплизованного, 208оС. шат на воздухе. Выход 53 г.

Аналитические данные. Банные ИКспектра перекристаллизованного BL -578, Ф о р м у и а и з о б р е T е н и s моногидрата, приведены в таблице. Спектр чистый, хорошо выраженный, идентичный эталону. ta

35001

3420 j

2600-3100

ОН

NH

NH

С-О, -лактама

С-О амида

С-С

С0

1560

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Швейцарии l4497463, кп. С 07 d 99/24, 15.10.70. э

ЯМР-спектр .хорошо выраженный и соответствует структуре.

Элементарный анализ перекристаллизо- ванного BL -578, монагидрата.

Найдено,%: С 50,46> 50,18> 50,36>

Н 5i03 iН. 5 04 4 96 5*00i Я 1 1з05

11,27; 11,03; кристаппизационная вода

5,21; Ва 0,11, 39

Вычиспено,%: С 50,39; Н 5 03;

М 1 1,02; кристаппизационная вода 4,74 .

Способ попучения 7- 2 -(-)- с .амино-о -(n-оксифеницацетамидо) дезацетоксицефапоспорановой кислоты ипи ее гидрата или ее соли, отличающийся те.:, что, с цепью увепичения выхода целевого продукта, водный раствор 7-Р-(-)- а -амино-Ы. вЂ,(f2 -ацетоксифенипацетамидо) дезацетоксицефалоспорановой кислоты обрабатывают эстеразой, выбранной из группы, вкйючающей сыворотку крови человека, сыворотку крови животного, пшеничные отруби, пшеничные завязи и 3aeiLPus оМЖа при рН 5,07,5 и при концентрации 5-10 мгlмл эстеразы на полный объем водного раствора с последующим выделением продуктов в свободном виде или в виде гидрата или сопиСоставитель E Зинченко

Редактор О. Кузнецова Техред Э. Чужик Корректор П. Макаревич

Заказ 1329/46 Тираж 512 П одписнсе

11НИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиап ППП Патент, г. Ужгород, уп. Проектная, 4