Способ получения производных 7-амино3-цефем-4-карбоновой кислоты

 

Союз Соеетснмк

Социалмстммесюи

Реслублмя (!» 622408 (б!) Дополнительный к патенту (И) Заявлено 28.10.74 (2!) 2070786/23-04 (23) Приоритет — (32) 03.11.73 (3!) P 2355078.9 (3Ì ФРГ

2 (5!) М. Кл.

С 07 D 501/04

С 07 .() 501/60

//А 61 К 31/545

Гееудерстееиеий каиитет

Севете Ииииетрев СССР ее декам изееретеиий и еткрнтий (43) Опубликовано30.08.78.Бюллетень № 32 (53) УДК 547.86.07 (088.8) (46) Дата опубликования описания 25.07.78

Иностранцы

Карл Куцбах и Уве Петерсен (ФРГ) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Байер АГ" (ФРГ) (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ 7-АМИНО-3-ЦЕФЕМ-4-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к новому способу получения производных 7-амино-3-цефем-4-карбоновой кислоты, которые явля- от-,.: r,олупродуктами при синтезе цефалосп ори новых антибиотиков. б

Известны способы получения 7-аминоцефалосп орановой кислоты (7-AUK) ферментативным расщеплением цефвлоспори- на (1) или химическим peceleeeeeeeet(2), Деэацетоксииефвлоспорин С может быть аналогично превращен в 7- вминодеэацетоксицефалоспорановуюкнслоту (7-Al3PK) „ которую получают иэ 7-AUK путем каталитического восстановления (3j, хими- !б ческим расщеплением 7-вцилпроизводных

7-AQIiK (41.

Известны также ферментатнвные способы получения 7-A5LlK, основанные на расщеплении 7-фенил-(феноксиметил)— аце тами аодеэацетокси цефал оси оран овой кислоты в присутствии деацилирующего фермента иэ микроорганизма gaqj$ug

ntegatori urrt В=400 (5)и микроорганиз2 мов Ь ЬогоЬас1еи Ыг р1ах /ТСС ОЯ9 и др,(Ь):

Способ (6)заключается в том, что гидролиз водных растворов 7-:фенилацетамидодезвцетоксицефалосп орановой кисл on, (7-ФАДИК) или 7-феноксиметилацетамидодеэацетоксицефал осп оран овой кисл оты (7-ФМЦЦК), взятых в концентрации 110 мг/мл, проводят при рН 7-8 и 20о

45 С в течение 3-80 ч в присутствии деацилируюшего фермента в виде культуральной жидкости, микробной биомассы очищенного фермента, либонерастворимого фермента, полученного вдсорбцией нв носителе-целите. По окончании гидролиза к раствору добавляют равный обьем ацетона, устанавливают рН 4, выдерживают смесь в течение ночи и отделяют осадок 7-AQUK. Выделение 7-A@UK описвпо для:гидролиэа с деацилирующим ферментом — ленициллинацилазой, выде— ленной нз микроорганизмарго!.ець reBgera

АТСС 9250. В атом случае получают

7«АД!1К низкого качества- 93%-ной чиототы.

СЕ,К, (К) 50

При испопьзованни дру.—. ;л ъ:»роuр н»»змов 7-AQUK не еыд:е-п:". ;,г ...:;.; =- екционной смеси, поскольку глубина гидропиэа составляет только 40-60%.

Оцнако в таком способе гидролитическая активность используемых ферментных препвретов низкая, поэтому цпитепьность гицропиза даже дпя малых концентраций субстрата очень велика (80 ч).

Применение дпя получения 7--А,ПЯК малых концентраций субстрата, обусповПенное с одной стороны низкой активностью используемого катализатора, а с другой стороны малой растворимостью

7-ФАДЦК (ипи 7-ФМЩЛК) в воцных растворах с рН 7-8, приводит к .:.ожному методу выделения целевого процукта с использованием органических растворителей (необходимость регенерации растворитепей). Использование органических растворителей цпя выцеления 7-А,ШЯК не- щ сколько увеличивает выход 7-AQk1K, вследствие ее меньшей растворимости в водно-органической среце, по сравнению с водной, однако при этом качество выцеляемого процукте невысокое (93%-ная 25 чистота) .

С цепью упрощения процесса прецпагеется способ получения производных 7емино-З-пеуем-4-кврбоновой кислоты общей формулы з»

СООХ где Х -воцород или отрицательный заряд, если К -пиридини»"ц руппе;

К» — воцород, ацетокси- ипи пиридинийгруппв, путем деацилирования 7-аципаминоцефалоспорановых производных общей формулы 4О

ОООЙ где R» Х имеют укаэанные значения;

Й вЂ” фенил, фенокси- или тиенипгруппе, 3 — водороц ипи аминогруппа, в водном растворе при 25-40 С или их о солей с неорганическим ипи органическим основанием и цееципировение проводят выдепенной из микрооргенизме E.conj пенициплинецилазой с уцельной активностью 4,5-12 eg./Mã белка, ковепентно связанной с нерастворимым в воде поситепем, полученным на основе сопопимерв диметакрилвте тетразтиленгликопя и ангидриде мепеиновой ипи итеконовой или цитраконовой кислоты, циметакрилата тетразтипенглико я, метекриповой кислоты и енгидри цв мепеиновой кислоты, циметекрилата окиси полипропилена, акриловой кислоты и/ипи ангицриде мвпеиновой кислоты, цнметакрилвта зтиленгпикопя,. ангидриде итвконовой кислоты и акриповой киспоты или ангидриде мапеиновой кислоты, метакриповой кислоты и триметакрилата сопопимера окиси зтипене и окиси пропипе-»е (1:1).

Прецлагаемый способ имеет то преимущество, что бпагоцвря ковапентной свя: ..и енициплине»Б»пазу можно неоцнократ»спользовать без потери активности.

::. роме: ог о., можно НсН DJ»ьз оееть» 0%=-ные растворы цефепоспоринов вместо, 1%-ных растворов в известном способе, Для проведения способа могут быть использованы практически все ферментные см опы (ФС), в к от орых и еницилли нвципаза коввлентно связана с нерастворимым в воце попимериэетом-носителем. В качестве ФС берут такие, в которых пени циппинаципаза при помощи бромцивна ко велентно. связана с полисвхаридами, например декстран ипи сшитые агарозы, Могут быть испопьзоввны также ФС, дпя попучения которых пенициплинацилазу подвергают взаимодействию с бромецетилцеппюпозой или с субстанцией ионообменникв на основе замешенного кврбоксипгруплами трехмерно сшитого декс трапе в присутствии способного к образованию амида соединения, например карбодиимида, причем могут быть использованы и активировенные смолы ионообменника, как хлораигидрид кислоты, смолы акриповой кислоты и сшитые с гидразином смопы из этилена и ангидрида малеиновой кислоты.

Особенно пригодной является ФС, в которой пеницилпинацилаза коввпентно связана сопопимером иэ акриламица, N Я

° метипенбисекриламида и малеиновой кислоты.

ФС может быть получена спедующим образом.

Исходный соп опимер п олучеют извест° ными методами. После сопопимериэации гелеобразную смолу продавливают через сито с отверстиями 0,5 мм, хорошо промывают и высушивают в вакууме, Попимеризованную дикврбоновую кислоту, наго ревая.в течение 2 ч до 180 С, перевоQHT в ангицрид дикврбоновой кислоты.

На 1 r фермента берут 10 r сопопимера.

Из эгой смеси Э-4 г прибввпяют в раствор фермента в 250 мл 0,05 М фосфатного буфера при рН 5,5 интенсивно размешивают и через 2 ч добавляют мвлень622408 кими дозами остальной сопопимер. рН в течение всей реакции поддерживают пос-. тоянным, добавляя разбавленный раствор едкого натра, Если через 5 ч отстоявшийся верхний воцный слоР содержит еще непрореагировавший фермент, добавпяют еще сопопимер. Соотношение 1 ч. фермента к 15-20 ч. сопопимера является обычно достаточным дпя полной реакции.

После сочетания отфильтровывают связанную с носителем . пеницилпинаципа- 1р зу и интенсивно. промывают водой и 1 М раствором поваренной соли. Особенно предпочтительными в качестве испопьзуемых ФС являются такие, при которых пенициппинацилаза связана с сшитыми 15 сопопимерами, содержащими сопопимерные единицы спецующего состава:

А. О, 1-50, предпочтитепьно 2-20, вес, %0(i Pd -моноопефиновых ненасыщенных ангидрицов дикарбоновой кислоты с 20

4-9, предпочтительно 4 ипи 5, атомами углерода, например ангицриц мапеиновой кислоты, итаконовой кислоты и/ипи цитраконовой кислоты., особенно ангидриц мапеиновой кислоты, и 25

Б. 99,9-50, прецпочтитепьно 80-98, вес. % ди- и/ипи поли-(мет)-акрипатов циопов и/ипи многоатомных спиртов, как ци акрипа ты ипи ди м е такрипа ты ди ол ов с

2-4 атомами углерода и/ипи продукты реакции 1 моль этого циопа с 1-20мопь окиси алкипена с 2 — 4 атомами углерода ипи триметипоппропаитриметакрипат, особенно циметакрипаты этипенгликопя, ди,7 зти пеигпикопя, триэтиленгпикопя, тетра-. этипенгпикопя ипи высших попиапкилен гпикопей с мопярным весом до 1000 или их смеси, Попимеризацию проводят методом оса- 40 дитепьной ипи бисерной попимеризации в растворителях ипи смесях растворитепей, которые являютСя инертными против ангидридных групп, например бензоп, при о о

20-200 С, например при 60-70 С, в 45 присутствии образующих радикалы соединений, например динитрип азоизомаспяной кислоты. Полученные таким образом сопопимеры дпя получения ФС при о рН 5,7-6,8 и 4-30 С вводят в водный 50 раствор пенициппинаципазы (1 вес. ч.. пенициппинацилазы на 1-10 вес. ч. полимерного носителя). Через 2 ч отсасывают ипи центрифугируют и остаток промывают cMIHHblMH растворами выСокой 55 ионной силы, например 1 моль водного раствора хпорида натрия. Особенно предпочтительными ФС являются такие, в ко,торых пеницилпинаципаза связана с сшиTbllvfH сополимерами, содержащими сопопимерные единицы следующего состава:

Указанный состав А, Б. 35-90, предпочтительно 50-85, вес, % ди- и/ипи поли-(мет)-акрипатов диопов и/ипи MHîãoÿòoìttûx спиртов, как диакрипаты ипи диметипакрипаты диопов с 2-4 атомами углерода и/ипи продукты реакции 1 моль этих циопов с 1-10 мо пями окиси апкипена с 2--4 атомами угперода ипи триметипоппропантриметакрич пат, например диметипакрипа ты зтипен.— гликопя, диэтипенгпиколя„. триэтипенгпикопя, тетразтипенгпикопя, ипи BblclllHx попиапкипгпикопей с мспярныл; весом цо

500 ипи смеси их, В. 5 — 60, прецпочтитепьно 10-50, вес.% по меньшей мере одного неназванного в п, Б гицрофипьного мономера, . дредпочтитепьно ненасыщеннь е гицрофипьные мономеры, содержащие по меньшей мере карбоксипьную-, аминокарбонипьную-, сульфо- ипи супьфамоипьную группу, причем аминогруппы аминокарбонипьного ипи супьфамоипьного радикалов в спучае необходимости могут быть замешены С1

С4 -апкипами ипи С -С4, -апкоксиметипом, например акриповая кислота, мет— акриповая кислота, попизфир мапеино— вой кислоты, И -виниппактамы,. как )( виниппиррс лидон, метЯкрипамиц, )1 -замешенные (мет)акрипамиды, как Н -меI тип- и Я -метоксиметип — (мет)- акрипамид и И вЂ” акропоипдиметиптаурнн.

Сумма компонентов А — В составляет

100 вес. ж. Сшитые сопопимеризаты имеют насыпной объем 2-20 мп/г и удельные поверхности 1-4ОО м /г и пос2 и е омыпени я анги дри цных r руп и с о де ржат 0,02-11 мзкв, кислоты на 1 г.

Попимеризацив проводят методом осацитепьной ипи бисерной попимеризации в растворителях ипи смесях растворитепей, которые являются инертными против ангидридных групп, например бензопе, при о D

20-200 С, прецпочтитепьно 50 н 100 С, например 60-70 С, в присутствии образующих радикалы соединений, например динитрипа азоизомаспяной кислоты. Дпя получения ФС попимеризат ввоцят в воциый раствор пекициппинаципаЬы (предпочтитепьно 1 вес. ч. пениииппинаиипазы о на 4.— 10 вес. ч. смолы) прн 0--30 С, о например 4 -20 С, причем рН путем добавпения основания, например натрового щелока, поддерживают 5,7-6,8. По окончании реакции отсасывают и промывают буферным ипи сопяным раствором, например 1 М раствором хпорица натрия.

622408

Особенно предпоч .:: : использование ФС, в кот- îb.". пеннциллинвцилаза ковалентпо связана с сополимером из диметилекрилвтв тетрвэтиленгликоля, ангидрида мелеиновой кислоты и в случае необходимости метвкриловой кислоты, В качестве растворителя берут воцу или смесь воды и органического растворителя в количестве до 10%, например метанол, этвнол, ацетон или:циметилформ-*10

„о амид. Реакцию проводят при 20-45 С, о предпочтительйо 35-40 С.

Соединение формулы П растворяют в указанном растворителе, причем раствор должен содержать 2-40, лучше 4-.6, 15 вес. ч. соединения формулы П, его можно в любом виде приводить в контакт с

ФС.

ФС может быть, например, суспенцирована в растворе. При нейтрализации 2Î отщепляемого при реакции ацильного ради кала рН и од церживе ют 6-9, лучше

7,5-8,5, добавляя к реакционной смеси пригодное основание, в качестве которого используют неорганические и органические основания, например трет-фосфат натрия, гицроокиси щелочного металле, карбонаты или гидрокврбонаты щелочного металла, первичные, вторичныеи третичные алифвтические и ароматические амины, а также гетероциклические основания.

Скорость реакции зависит от отношения количестве имеющейся связанной с носителем;ценициллинецилазы к количеству взятого соецинения формулы Il u or сцецнфической активности используемой сВязвнной с носителем пенициллинвцилвзы, которая указана в ец./r влажного веса. 1 ед. определена как активность пенициллннацилезы, которая в течение

1 мин гидролизует 1 макромоль пеницило лина G при 37 С и рН 7,8 в 6-вминопенициллановую кислоту и фенилуксусную кислоту. Для расщепления 1 кг 7-.фенил45 .ацетвмидодезвцетоксицефвлоспорановой кислоты в течение 2 ч требуются 70000 ец. связанной с носителем пенициллин— ацилазы, соответственно 1 кг мокрой ФС, 50

При концентрации 64 реакционный обьем составляет 16,6 л. При более продолжительном времени расщепления требуется соответственно меньше связанной с носителем пенициллинецилезы. По оконче)5 нии реакции расщепления связанную с носителем пенициллинацилезу отделяют, например, путем фильтрации или- центрифугироввния и она может быть срезу же использове«е для дальнейшей исхоцной смеси pBc,èi пл -Hii B.

Из прозрачного растворе выделяют соединение формулы Х известными способами, например неорганическими минеральными кислотами„ кек соляная, серная, фосфорная кислоты, или органическими карбоновыми кислотами„как уксусная кислота, у изоалектрической точки или метоцом хроматографии. Выцеленный ипи полученный хроматографией продукт цля полного удаления отщепляемого радикала промывают пригодным растворителемм.. например бутилацетатом или ацето;." о..:,, и сушат в вакууме,, ij м g о 1, Рвсщеп!ение соединений формулы Й.

2 ммоль соединения фоомулы )I растворяют в 20 мл воцы (в случае необходимости путем добавления едкого нвтрв) и при рН 7,5 к размешанному раствору о

| в нагретом до 37 С сосуде прибавляют

5 r (влажный вес) ФС (полученной по методу A), поддерживая рН 7,5 10 М едким натром. По окончании реакции связанную с носителем пенициллинацилазу отсасывают через слой спекшихся частиц стекла и промывают воцой. Фильтрвт и промывную воду сгущают в вакууме при о

30 С цо объеме 5 мл цефвлоспорановую кислоту осаждают, добавляя 5 н. соляную кислоту до изоэлектрической точки

3,7, выдерживают 2-3 ч в холоцильнике, г отфильтровывают, промывают 10 мл воцы и ацетона и сушат в вакууме, Содержание продуктов нвхоцят фотометрическим методом определения освобожденной 7-аминогруппы после реакции с и-диметилеминобензельдегидом в измененном виде методе Свотекв, Зкстинкцию при 415 нм сравнивают со стандартными кривыми для чистой 7AUK и 7-ALUlK, Кроме того, ицентичность продуктов доказана ИК- и ЯИРспектрометрией и хроматографии на бумаге в системе бутвнол-ледяная уксусная кислоте-вода (12:3:5).

A. Б качестве исходного соединения берут 908 мг 7-(2-тиенил) -вцетемидоцефвлоспорановой кислоты (натриевая соль). Продолжительность реакции 42 мин.

Получают 7-AI1K, выхоц 520 мг (88%), чистота 989o, Rg 0,27 (не обнаружено дезецетил-7-аминоцефвлосп орановой кислоты с К 0,10).

Б. В качестве исхоцного соединения берут 866 мг 7-(2-тиенил)-ацетвмидо3-пиридинийметил-3-цефем-4-карбоксилата. Продолжительность реакции 35 мин.

622408

Получают 7-амино-3-пиридинийметил-3цефем-4 — карбоксилат, Vg 0,05, Из-эе наличия пиридинового кольца в молекуле целевой продукт нельзя выделить у изоэпектрической точки. Полнота разложения и идентичность продукта доказана хроматографией на бумаге.

B. В качестве исходного соединения берут 687 мг 7-ФАЛИК. Продолжительность реакции 27 мин. Получают 7-AQUK, выход 350 мг (84%), чистота 99%, Ig о т, пл. 238-240 С (резл.).

Г. В качестве исходного соединения берут 696 мг 7-феноксиацетамидодеэацетокснцефалоспорановой кислоты, получают -А/ШК, выход 350 мг (82%), чистота 96%, т. нл. 238-240 С (рвзл.). о

Д. В качестве исходного соединения берут 696 мг (ао -вминофенилецетил)дезацетоксицефвлосноряновой кислоты, получают 7-AjlUK, выход 364 мг (85%), рй чистота 98%, П р и м e p 2. 1 кг 7-ФАДЦК растворяют в 12,5 л воды и в течение 2 ч о полностью расщепляют при 38 С, добавляя 1 кг связанной с носителем пеницил- 25 линацилязы (по методу А) и поддерживая рН 7,5 путем непрерывного добавления триэтиляминя, По окончании реакции свя— занный с носителем фермент отфильтровывают и промывают 2 л воды, Фильтрет ЗО и промывную воду сгущают в вакууме до д объема 3 л при 30-40 С, добавляют

2 л бутилецетата и 5 н. соляной кислотой нри рН 3,7+О,l осаждают 7-АДЦК.

Через 2 ч кристеллй отсасывают, про- З мывеют 1 л воды и ацетона и сушат в вакууме при 40 С. Выход 574 г (89%), чистота 98%. Таким образом используют одну и ту же связан» ю с носителем пенициллинацилазу 25 рвз. Выход из 25 40 расщеплений 90,3%.

Пример 3. 2 г (6 ммоль) 7ФЬДЦК суспендируют в 190 мл воды, растворяют, добавляя 1 н. раствор едкого калия до рН 7,8, нагревают до 37 С1 и добавляют 3,2 r ФС, полученной но методу А, поддерживая рН 7,8+0,3 триэтиламином.. Через 1,5 ч реакция зекенчивеется, ФС отфильтровывают, IIpомы вают водой и фильтрат сгущают в вакуо уме нри 50 С до четверти обьемя. Пос ле добавления 160 мл метилизобутилкетона разбавленной соляной кислотой устанавливают рН 4,3 и выкристаллизовавшийся осадок выдерживают 1 ч, отсасывают и промывают небольшим количеством смеси вода-метипизобутилкетон, Получают 7-AQLLK, выход 1,01 r (78,8%), т. пл. 238-240 С (рязл.).

Пример 4. 500 г 7-ФАДЦК растворяют в 8,3 л воды и полностью рао сшепляют при 38 С, добавляя в течение

4 ч 220 г связанной с носителем пенициллинацилязы (но методу Б), далее обрабатывают аналогично примеру 2, получая 7-АДЦК. Выход 294 r (91%), чистота 97%. Аналогично проводят 25 расщеплений с такой же связанной с носителем пенициллинацилазой. Средний выход из 25 расщеплений 90,5%.

Пример 5, 500 r 7- ФАДЦК растворяют в 8,3 л воды и при 38 С полностью расщепляют, добавляя 1,1 г связанной с носителем пенициллиняципаэы (по методу В). Ло окончании поглощения триэтилямине перерабатывают аналогично примеру 2. Получают 7-AQL(K, выход

265 г (86%), чистота 98%.

Метод A. Получение ФС.

80 г диметакрилятв тетраэтипенгликоля, 20 г ангидрида малеиновой кислоты и 1 г нитриле аэоизомасляной кислоты растворяют в 1 л бенэола и, размео шивяя, нагревают 4. ч до 60 С. Зятем добавляют 1 r нитрила азоизомвсляной кислоты и 200 мл петролейного эфира (т. кип. 100-140 С) и нолимеризуют 5ч о при 70 С; Порошкообраэный продукт отсасывают, взмучивают один раз в бензоле, три реза внетропейном эфире (т. кип.

30-50 С) и сушат в вакууме. Выход 94г, насыпной обьем 3,5 мл/г, объем набухания в воде 4,7 мл/r, удельная поверхность 5 м /г, содержание кислоты после омыпения ангидридных групп 3,5 мэкв/г.

lOO r полученной смолы-носителя суспендируют в 3,5 л всдного раствора

48000 ед. пенициллинвцнлазы (специфическая активность 12 ец/мг протеина (тест с Пиуретом)1, поппереивеи рн 6,3 н. едким нетром, суспенэию раэмешивяо ют 20 ч при 25 С, затем отсасывают через большую перегородку спекшихся частиц стекла и промывают 5 л 0,05 М фосфатного буфера нри рН 7,5, содержащего

1 М хлорид натрия, и затем тем же буфером без хлорида натрия.,Получеют500г влажной ФС с специфической активностью 58 еп/г, что составляет 29000 ед, связанной с носи телем пени циллинацилазы или 60%.

Получение ненициллинацилазы.

Сырой экстракт, содержащий пеницилпинеципезу, получают, выращивая E. co I по известному способу. Культуру центрифугируют, концентрируют в густую суспензию и известными- механическими способами открывают клетки, в случае необхо-

622408

12 ; . КСАН !

И О М

50 нр, (rj

COO+

ЦНИИПИ Заказ 4716 Тираж 559 Подписное

Филивл ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная 4 димости путем добавления 3% метилизо бутилкетоне. 610 л полученного сырого экстракте, содержащего 5,2 10 Е.

6 со », разбавляют дейонизировэнной во- дой до объема 2 100 л, серной кисло той устанавливают рН 5 и центрифугируют. В прозрачном остатке находятся 5,7к

О х 10 Е, cot. со специфической активностью 1,7 eg./Mr. При рН 5 прибавляют при перемешивании 13,8 кг бетонита (тип Б 11, фирма Эрбсле) и через 30мин 0 отделяют в проточной центрифуге, Отцеленный бетонит элюируют 90 л 0,5 М раствора ецетвта натрия при рН 8 и отфильтровывают. Получают 92,5 л пенициллинацилезы, содержащей 4,5 10 E. 15 со1» (86%), со специфической ектив— н остью 6, 5 ед/ мг.

Метод Б. Получение ФС.

60 г диметакрилетв тетреэтиленгликоля, 30 г метакриловой кислоты, 10 г 20 ангидрида малеинбвой кислоты и 1 г нитрила аэоизомвсляной кислоты растворяют в 300 мл ецетонитрила, раствор суспендируют в 1 л бензине (т. кип. 100140 С), содержащего 5 г смеси глицерин-моно- и диелеат, и полпмеризуют

22 ч при 60 С, Полимерные бисеры отфильтровывают, суспендируют три раза в бензоле и двв разе в петролейном эфио ре (т, кип. 30-50 С) и сушат в вакууме. Выход 94 г, насыпной объем 44 мл/г, объем нвбухания в во»е 5,5 мл/г, удельная поверхность 6,6 м /r, содержание кислоты после омыления ангидридных групп 4,3 мэкв/г. 100 r полученного полимера обрабатывают аналогично методу А су51 000 ед. пенициллинацилезы (специфическая активность 4,5 ед./мг протеина), Получают 480 г влажной ФС со специфической активностью 69 eg/r, что соответствует 33000 ед. связанной с носителем пенициллинвцилаэы или 65%.

Ф ормулв из обре тени я

1. Способ получения производных 7амино-3-цефем-4-карбоновой кислоты общей формулы где Х вЂ” водороц или отрицательный заря д, если К -пн ри динийгруппа;

Rg — водород, вцетокси- или пиридинийг руппа, путем дезвцилирования 7-ациламиноцефел осп оран овы х пр оизв одных в в одн ом о растворе при 25-40 С пенициллинацилвзой, выделенной из микроорганизма, нанесенной на носитель, о т л и ч в ю— шийся тем, что, с целью упрощения процессе используют в качестве 7-ециламидоцефелоспорановых производных соединения общей формулы

СООХ где R и Х имеют указанные значеа»я

Р -фенил, фен окси- ияи ти енилгруппа;

К вЂ” водород или еминогруппа, или его соли с неорганическим или органическим основанием, деацилирование проводят выделенной из микроорганизма E. со3» пенициллинацилазой с удельной активностью 4,5-12,0 ед./мг белка, ковалентно связанной с нерастворимым в воде носителем, полученным на основе сополимера диметакрилате тетрвэтиленгликоля и ангидрида малеиновой или итаконовой или цитраконовой кислоты, диметакрилатв тетраэтиленгликоля, метакриловой кислоты и ангидрида малеиновой кислоты, диметакрилата окиси полипропилена, акриловой кислоты и/или ангидрида малеиновой кислоты, диметакрилвта этиленгликоля, ангидрида итаконовой кислоты и акриловой кислоты или ангидрида малеиновой кислоты, метвкриловой кислоты и триметакрилата сополимера окиси этилена и окиси пропилена (1:1).

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.

1. Патент США N 3239394, кл.

195-36, 1966.

2. Патент США N 3272809, кл.

260-243, 13.09.66.

3. Патент США % 3124576, кл, 260-243, 1 О. 03. 66.

4. Патент Бельгии No 717741, кл. С 07 +, 1968.

5. Патент Бельгии И 737761. кл. С 07 F 23.02.70.

6. Патент IQP No 97213, кл. 12 р, 4/Ol, 20.04.73.