Способ получения гуанидиновых производных или их солей с малеиновой кислотой

 

Способ получения гуанидиновых производнъ1х формулы о CF3CH2-NH, N-( (I) где п 4 или 5, или их солей с малеиновой кислотой, отличающийся тем, что осуществляют взаимодействие aN MHaKa X кислотой формулы CF CH -TSIH .0 г-м -1 (СН.гЪ- (IT) /L.-iN - -Naj V им. где п 4 или 5, о I с последуюид м выделением делевого IQ продукта в свободном виде или в виде СО соли с малеиновой кислотой.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (f9) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К РАТЕНТ,Ф

i

l !

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3411500/23-04 (22) 05.03.82 (31) 8107273 (32) 09. 03. 81 (33) GB (46) 23. 11. 86. Бюл. ¹ 43 (71) Империал Кемикал Индастриз, ПЛС (GB) Ай-Си-Ай Америказ Инк.(US) (72) Тобиас Орегон Еллин (US) и Дзвид Джон Гилман (СВ) (53) 547.495.07 (088.8) (56) В1ack. Nature. 1972, 236, 385.

Патент Англии № 2052478 А, кл. С 2 С опублик. 1968. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГУАНИДИНОВЫХ

ПРОИЗВОДН!1Х ИЛИ ИХ СОЛЕЙ С МАЛЕИНОВОЙ

КИСЛОТОЙ ш 4 С 07 С 129/12, С 07 D 231/38 (57) Способ получения гуанидиновых производных формулы

С1,СН -МН

Π— = Л-(CHg)p Ñ-)ЧН, (g)

МИ, Г1 где n = 4 или 5, или их солей с малеиновой кислотой, отличающий с я тем, что осуществляют взаимодействие аммиака с кислотой формулы

СГ СН,- Н 0 1Н М 0Н

С 1 — (СН п-С (ТТ) гдеп=4или 5, с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли с малеиновой кислотой.

1 272

Изобретение относится к гуанидиновым производным, являющимся антагонистами гистамина Н-2 и ингибирующим секрецию кислоты желудочйога сока, формулы (I)

CFgCHg-NH г

NH

10 где п=4 или 5 (Ia и Тб)

Целью изобретения являетея расширение арсенала средств, являющихся антагонистами гистамина Н-2 и проявляющих более сильное подавление действию гистамина Н-2.

П р и м е p 1. Триэтиламин (0,082 r) добавляют к суспензии 5{3-(2-(2,2,2-трифторэтил)гуанидино пиразол-1-ил валериановой кислоты

20 (O,25 г) в тетрагидрафуране (1О мл) при 0 С, добавляют аммиак (0,015 r), этилхлорформиат (0,088 r) и смесь перемешивают в течение 30 мин. Добавляют раствор в тетрагидрофуране (5 мл) и смесь перемешивают в течение

30 мин, при этом температура павьппается до комнатной. Смесь выйаривают в вакууме, добавляют к ней водный раствор бикарбоната натрия (5 мп) и

30 экстрагируют этилацетатом (2 ° 25 мл).

После сушки над HgSO раствор фильтру ют и фильтрат выпаривают, в результате чего получают бледно-желтый твердый продукт, который очищают посредством жидкостной хроматографии умерен-35 нога давления с использованием силикагеля, и элюируют смесью метанола и

CH@Cl в соотношении 1:10 (об/об., в.результате чего получают твердый материал. Этот твердьп материал растворяют в этилацетате (ЭА), содержащем следы этилового спирта, и добавляют избыточное количество раствора малеиновой кислоты в ЭА. Выпавший в результате осадок извлекают путем фильтрации и перекристаллизовывают из этанола, в результате чего получают малеат 5-(3-(2,2,2-трифторэтил)гуаницино !пиразол-1-ил-валерамида, с т.пл.

130 С (выхад 307.). 50

ЯИР в с1 ДМСО".7,39(d, IH); 5,66 (d, IH) 4,03 (q, 2Н); 3,94(t, 2Н);

2,08(t, 2Н); 1,6(m, 4Н).

Пример 2. Проводят испытания по методике примера 1, используя у

6-{3-(2-(2,2,2-трифтарэтил)гуанидино)пиразол-1-ил гексанамид (1б). Получают малеиновую соль с т.пл. 130-131 С.

978 2

Я1!Р в d ДМСО: 7,75(d, IH); 6,02 (с1, IH); 4, 3 (q, 2Н); 4, 06 (t, 2Н);

2,03(t, 2Н); 1,5(m, 6Н).

Биологические испытания.

Испытания на морских свинках осуществляют следующим образом.

Правое предсердие морской свинки подвешивают с натяжением г (изометрическое натяжение) в тканевай ванне с термостатическим регулированием о (30 С) емкостью 25 мл, содержащей насыщенн,1и кислородом (95, О>, 5io СО ) ! буфер Krebs-Henseleit (рН=7,4) . Ткань стабилизируют в течение ч и в течение этого времени ее промывают 24 раза. Отдельные сокращения регистрируют посредством датчика силового смещения, с использованием измерителя деформации, мгновенные частоты сокращения регистрируют посредством кардиотахометра. Получают значение контрольной ответной реакции на мкмоль гистамина, после чего ткань промывают три раза и снова приводят в равновесное состояние до основного показателя частоты. После установления равновесия, длящегося 15 мин, вводят испытываемое соединение до желаемой конечной концентрации. Через 10 мин после введения соединения снова вводят гистамин (1 мкмоль) и ответную реакцию на гистамин в присутствии антагониста сравнивают с контрольной ответной реакцией на гистамин (результат выражают в процентах от контрольной реакции на гистамин).

После этого стандартными методами определяют кажущуюся константу диссо-, циации антагониста гистамина Н-2.

Испытание с аминопирином осуществляют следующим образом.

Удаляют слизистую оболочку желудка из мышцы дна желудка и промывают ее в буфере 1, содержащем на 1 л раствора, г: NaCl 8,077, КС1 0,201, Na HP0„O,113, KH PO„ 0,204; СаС1 х х 2 Н О 0,132; 11gCI 0,101, глюкоза

У

1, с регулированием величины рН до

7,4 посредством NaOH. Ткань тонко измельчают, суспензируют в буфере 1 и промывают в нем три раза. Затем ткань суспензируют в диспергирующей среде. коллагеназа (Sigma Chemical

Со, тип V) 100 мг и альбумин коровьей сыворотки (!!iles Laboratories Ltd, фракция V) 100 мг в буфере 1 (100 мп);

50 мл на 10 г чистого веса ткани и термостатируют при 30 С и рН 7,4

1272978

30 (поддерживают при непрерывном регулировании) при перемешивании в ат-. мосфере кислорода. Через 30 мин ткани дают возможность осесть и поверхностный жидкостный слой удаляют. 5

Вводят свежую порцию дйспергирующей среды и продолжают термостатирование с использованием ткани, которая в большей своей части диспергируется в железы и целые клетки через 40- 1О

60 мин. Оставшиеся большие кусочки ткани удаляют путем фильтрации через нейлоновую сетку. Смесь желез и кле— ток извлекают центрифугированием при 200 х g и суспензируют в буфере 15

1, содержащем 17 альбумина коровьей сыворотки (Miles Laboratories Ltd, фракция V). Затем железы и клетки промывают три раза буфером 1 и суспензируют в буфере 2, содержащем 20

Eagles МЕ!! (500 мл), апротин. (Sigma

Chemical Со, 10 мг) и НГРЕ$ (2- (4- (2оксиэтил) пиперазин-1-ил)этансульфокислоты, 150 моль, 20 мл) при поддержании величины рН 7,4 посредством 25

Na0H; 150 мл на !О г чистого веса ткани. Эту тканевую суспензию перемешивают в атмосфере кислорода при ,32 С в течение по меньшей мере 1 ч, после чего ее можно использовать.

Тканевую суспензию. термостатируют вместе с испытываемым соединением и аминопирином (10 мкмоль), меченым

14f

С в диметиламиновой группе (0,1 мкКи/мл) в течение 20 мин. За35 тем поглощение аминопирина стимулируют путем добавления гистамина и ингибитора фосфодиэстеразы (IC1 63197

Bio chem. Soc. Special Pub lucation, 1973, стр. 127-133) до конечных кон-г ао центраций 10 5х10 моль соответственно. Через 18 мин клетки/железы извлекают из термостатированной среды путем фильтрации суспензии через стеклянный микрофибрильный фильтр.

Клетки/железы быстро (в течение менее чем 1О с) промывают три раза охлажденным льдом буфером 1. Аминопирин,меченый С", удерживаемый тканью, измеряют с помощью сцинтил50 ляционного счетчика, степень инги бирования поглощения испытываемым соединением рассчитывают путем сопротивления с контрольным образцом.

Затем с помощью графиков, полученных в ряде испытаний, проводимых при раз-SS личных концентрациях, рассчитывают концентрацию испытываемого соединения, дающую ингибирование на 507.

Соединения испытывают либо .в экспериментах с предсердием морских свинок, либо в экспериментах с аминопирином. Все соединения, подвергнутые испытанию в экспериментах с предсердием морских свинок, являются активными при концентрации в тканевой ванне !

О мкмоль или ниже этой концентрации и более активные соединения показывают полное ингибирование ответной реакции при этой концентрации. Все соединения, подвергнутые испытанию в экспериментах с аминопирином, показывают 507-ное ингибирование поглощения аминопирина при концентрации

3 мкмоль или менее.

Ингибирование секреции кислоты желудочного сока может быть продемонстрировано стандартными испытаниями, например, но способоности соединения предлагаемой формулы при вводе

era путем внутривенной инъекции, через желудок или через рот ингибировать секрецию кислотного желудочного сока, например, у крыс или, у собак, у которых имеется желудочный свищ или денервированные углубления дна желудка и у которых секреция желудочного сока. стимулируется путем ввода секретогенного агента, например гистамина, пентагастрина, бетанехола или пищи, Испытание на крысах проводят следующим образом.

Самок крыс (весом 200-230 г) анестезируют путем внутримышечного уретана (1,5 г/кг) и в трахею вводят полную хирургическую иглу. Гибкую трубку пропускают через пищевод в желудок и укрепляют ее путем стягивания, в области шеи. 1!ногодырочную пластмас4 совую трубку (диаметром 3 мм) пропускают в полостную зону желудка через надрез и в двенадцатиперстной кишке закрепляют, привязывая ее посредством хирургической нити к привратнику желудка. Солевой раствор (9 г/л БаС1) пропускают через желудок (посредством вставленной в пищевод полой иглы со скоростью 7 мл/мин, извлекают его из пилорического отвода через каждые 10 мин и собирают в химических стаканах. Секреция кислоты стимулируется путем подкожного ввода специфического антагониста Н-2 димаприта, вводимого дозой 10 мг/кг, с последующим вливанием 30 мг/кг/ч. Выделение кислоты рассчитывают путем титрования 20 ммоль гидрата окиси натрия

1272978

10 мин образцов до конечного значения рН 6,4 (выделяемых в течение 10 мин).

Когда секреция достигает постоянного значения (плато на кривой, три последовательных показания с расхождением в пределах 5X), испытываемое соединение вводят путем внутривенной инъекции через полую иглу, введенную в левую наружную яремную вену. Затем измеряют секрецию в течение последующих 2 ч. Приготавливают основной раствор каждого испытываемого соединения (!О мг/мл в диметилсульфоксиде) и разбавляют соответствующим образом соленым раствором так, чтобы обеспечивалась возможность ввода в организм дозы 1 мг/кг (диметилсульфоксид (2X), Испытание на собаках с хроническим свищем осуществляют следующим образом.

Испытания проводят на самках собак чистой бельгийской породы весом 9-12 кг, имеющих хронический желудочный свищ. В течение ночи их не кор-25 мят, при желании дают воду. В ходе эксперимента собаки слегка сдержанны в стоячем положении. При вводе испитываемого соединения путем внутривенной инъекции свищ открывается и после пол g ного убеждения в том, что баэальная секреция не происходит в течение 30 мин, начинают осуществлять непрерывное внутривенное вливание секретогенного агента (гистамина, 0,5 мкмоль/

/кг/ч). Пробы желудочной кислоты собирают каждые 15 мин. Измеряют объем каждой пробы. мл аликвотную пробу титру!от до нейтральной 100 ммоль NaOH с целью определения концентрации кис о лоты. Когда достигается постоянная секреция (плато кривой, 1-2 ч) путем внутривенной инъекции вводят испытываемое соединение в солевом растворе, пробы кислоты желудочного сока Собира ют в течение дальнейших 2-3 ч, в ходе чего непрерывно продолжается вливание секретогенного агента.

При исследовании испытываемого соединения путем внутрижелудочного вво-® да после полной убежденности в отсутствии базальной секреции в течение

30 мин испытываемое соединение, содержащееся в 25 мп 0,57.-ной (вес/об.) оксипропилметилцеллюлозы и 0,1Х-но о, (вес./об.) Твина 80 в воде (Твин-торговая марка), вливается по каплям в желудок через дозирующую трубку, г вставленную в свищ. Через ч свищ снова открывается и сразу же начинает вливание секретогенного агента аналогично описанному выше. Пробы кислоты желудочного сока измеряют аналогично описанному и приближение секреции кислоты к постоянному значению сравнивают с приближением секреции кислоты к по< тоянному значению для контрольного животного, в организм которого не вводят испытуемое соединение.

При изучении испытываемого соединения, вводимого через рот, оно используется в форме желатиновых капсул вместе с. !5 мл воды. Через 1 ч после ввода свищ открывается и сразу же начинается внутривенное вливание секретогенного агента. Пробы желудочной кислоты измеряют аналогично описанному и приближение секреции кислоты к постоянному значению (к плато кривой) сравнивают с приближением секреции для контрольного животного, в которое не вводят испытываемое соединение.

Испытание на собаках с денервированным углублением дна желудка осуществляют следующим образом.

Испытания проводят на самцах собак коротконогой гончей весом 14-22 кг.

Денервированные углубления в области железы дна желудка у этих собак получаются при подготовке их к испытаниям способом Rudick и др. В течение

4-6 недель животным дают возможность оправиться от операции и затем еще в течение 2-3 мес до обычного использования, чтобы позволить им привыкнуть к процедуре испытаний и секреторным реакциям. Собак не кормят в течение 23 ч перед экспериментом (но они имеют свободный доступ к воде) и в процессе эксперимента они слегка поддерживаются тканевой повязкой. После промывки углубления теплой водой путем подкожной инъекции вливают гистамин со скоростью 10 мкг/мин. Такая доза приводит к менее чем максимальному (60-907. от максимального) увеличению выделения кислоты при всех используемых собаках. Выделения желудочного сока из углубления собирают через кажщле 15 мин в градуированные стеклянные пробирки и измеряют объем секреторных выделений, прибли-: жающийся к 0,1 мл. Пробу в количест7 l2 ве 500 мкл разбавляют 5 мл .солевого раствора и величину рН доводят до

7,0 посредством 100 ммоль NaOH. Общее выделение кислоты рассчитывают как произведение концентрации кислоты на объем выделенногО желудочного сока. Испытываемые соединения вводят внутривенно (0,1 мл/кг) через лучевую подкожную вену или через рот в виде желатиновой капсулы после достижения постоянной секреции (расхождение в трех последовательных показаниях в пределах lOX) Секрецию измеряют в течение 3 ч после ввода испытываемого соединения.

Составитель В.Сапунов

Техред Л.Сердюкова Корректор О. Луговая

Редактор Н.Гунько

Тираж 379 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 6352/58

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная,4

Результаты, полученные при испытании на предсердии и с использованием аминопирина, позволяют предска72978 8 зать активность данных соединений для испытываемых крыс и собак.

Результаты биологических испытаний.

Соединения испытывают аналогично описанному методу для аминопирина по сравнению с 2-гуанидин-4-(2-(2-циан3 — метилгуанидин)-этилтиометил1тиазолом (соединение A), аналогом по

1р структуре. Соединение А дает 507-ное подавление действия гистамина Н-2 при концентрации 0,057 мкмоль. Соединения la и lб дают 502-ное подавление при 0,0036 и 0,0087 мкмоль со15 ответственнр, что на порядок меньше, чем сравнительное соединение и свидетельствует о более высокой активности данных соединений как антагонистов гистамина Н-2 °