Способ получения производных 1,5-бензотиазепина или их фармацевтически приемлемых солей
Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности лучения производных 1,5-бензотиазепина общей формулы 6н СН-СН СН-9-С-.. -I(CH,COOH)-c a -CHl-CHir. где X ь - ЫН-СН СООЮ- СНг1„-СН-СН4-СНг- -NH-CH -CH, , или их фармацевтически приемлемых солей, которые позволяют ингибировать фермент, превращающий ангиотензин, и могут найти применение в медицине при лечении гипертонии, кардиопатии. и церебральной апоплексии. Цель изобретения - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией соединения общей формулы.II CH CH-CH CH-C C-N снг-соок -С Го1 -СИ NHiT-СНг-S, где R - разветвленгг I ный низший алкил, и соединения общей формулы АгООС-СНК СсН -СН-СН -СН,- -NR., где R низший алкил; R-j - галоген или низшая алкилсульфонилоксигруппа, бензилоксикарбонил. Полученное соединение гидролизуют и вьщеляют целевой продукт в свободном виде или в виде соли. Новые вещества малотоксичны и ннгибируют фермент, превращающий ангиотензин I на 98%. 2 табл., § xsfA.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ИЮ (11) щ е
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н IlATKHTY
1 Т.
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3867760/23-04 (22) 27.02.85 (31) РСТ/дР 84/00172 (32) 06.04.84 (33) МС (46) 30.10.88. Бюл. У 40 (71) Такеда Кемикал Индастриз,Лтд (JP) (72) Хиросада Сугихара, Кохеи Нисикава и Катсуми Ито (JP) (53) 547.869(088.8) (56) Houben.-Meyl. Methoden der Organischeri Chemic ° B 11/1, Сапа Thieme
Verlag, Stuttgart, 1957, s. 57. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ
1 5-БЕНЗОТИАЗЕПИНА ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ (57) Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности по лучения производных 1 5-бензотиазепина общей формулыЕ Н=СН-СН=СН-(-—
-Й СН СООН -С (01-СНX-СНй-, где Х =
= — NH-СН(Соон2- (СН, „- Н-СН,-СН,—
1 11 4 С 07 П 281/10//А 61 К 31/55
-NH-СН -СН, n=2-6, или их фармацевтически приемлемых солей, которые позволяют ингибировать фермент, превращающий ангиотензин, и могут найти применение в медицине при лечении гипертонии, кардиопатии и церебральной апоплексии. Цель изобретения— создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией соединения общей формулы II е.е=и.и= - - е; е- Г-СН ННД -СН -S, где R< — разветвленный ниеиий елкил, и соединении общей формулы R бас-снй;Гбила -cH-.СН,-сн, — .
-NR<-СН - Н, где R — низший
R — галоген или низшая алкилсульфонилоксигруппа, R< — бензилоксикарбонил. Полученное соединение гидролизуют и выделяют целевой продукт в свободном виде или в виде соли. Новые вещества малотоксичны и ингибируют фермент, превращающий ангиотензин Е на 987. 2 табл., 1435152 Изобретение относится к способу получения новых производных 1,5-бензотиазепина формулы (сн,)„- ън
1 NHCH — СООн
О сн соон
10 где n=2 — 6, или их фармацевтически приемлемых солей, которые обладают активностью ингибитора фермента, превращающего ангиотензин, и могут найти применение в медицине при лечении гипертонии, кардиопатии и церебральной апоплексии. 20
Целью изобретения является получение производных 1,5-бензотиазепина, обладающих активностью ингибитора фермента, превращающего ангиотензии.
Пример 1. Смесь третбутилового эфира 3()амино-4-оксо-2,3,4,5тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты (3 r), 100 мл ацетонитрила, 4,0 r этилового эфира 6-(1- 30 бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-2хлоргексановой кислоты, 1,0 r триэтиламина и 1,6 г иодистого калия пеЬ ремешивают при 80 С в течение 3 сут.
Добавляют этиловый эфир 6-(1-бензил35 оксикарбонил-4-пиперидил)-2-хлоргексановой кислоты (2,0 r) и 0,8 г иодистого калия и продолжают перемео шивание при 80 С дополнительно в течение суток. Смесь концентрируют в вакууме, разбавляют 100 мл воды и экстрагируют этилацетатом (300 мл).
Экстракт промывают водой, сушат безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме. При хроматографической -45 очистке остатка (масло) на колонке с силикагелем (гексан:этилацетат
2:1) получают третбутиловый эфир
3(R)- f5-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-1(R)-этоксикарбонилпентил)
50 амино-4-оксо-2, 3,4,5-тетрагидро1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты (3,1 r) в виде бесцветного масла и третбутиловый эфир 3(R) — (5-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-1-(S)-этоксикарбонилпентил) амино-4-оксо-2,3,,55
4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазеиин-5уксусной кислоты (2,1 г) в виде бесцветного масла.
Пример 2. Смесь третбутилового эфира 3(R)-амино-4-оксо вЂ,3, 4,5-тетрагидро-1,5-бензотназепин-5уксусной кислоты (2,05 г) и 1,5 r этилового эфира 6-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-2-метансульфонилоксигексановой кислоты нагревают о при 90 С в течение суток. После охлаждения к смеси добавляют 300 мл этилацетата и образовавшийся раствор промывают двумя порциями (но 30 мл)
5%-ного раствора фосфорной кислоты и затем водой (20 мл) . Органический слой сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получая маслянистый остаток, который очищают хроматографически на колонке с силикагелем (гексан:этилацетат
2:1), получая 0,7 r третбутилового эфира 3(R) — 15-(1-бензилоксикарбонил4-пиперидил) — 1(k)-этоксикарбонилпентил1амино-4-оксо-2,3,4,5-тетрагидро1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде бесцветного масла. Из последующей фракции получают 0,55 г третбутилового эфира 3(R)-(5-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-1(S) †этоксикарбонилпентил1амино-4-оксо-2,3,4,5тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде бесцветного масла.
Пример 3, В 150 мл горячего ацетона растворяют 3,7 г 6-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-2-оксигексановой кислоты и 4,4 r хинина. После удаления нерастворившегося вещества посредством фильтрации, раствор помещают выдерживаться в холодильник. Выделившиеся кристаллы собирают посредством фильтрации и перекристаллизовывают их три раза из ацетона, получая 1,9 r хининовой соли в виде бесцветных кристаллов. Эту соль (1,2 г) добавляют к смеси 200 мл этилацетата и 50 мл 1 н. соляной кислоты и образовавшуюся смесь тщательно перемешивают.
Этилацетатный слой промывают 1 н, соляной кислотой (30, 20 мл) и затем водой, сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме. К маслянистому остатку (О,Ь r) добавляют
50 мл толуола, 10 мл этилового спирта и 0,05 r паратолуолсульфокислоты.
Образовавшуюся смесь перемешивают в течение 3 ч при 100 С, охлаждают, разбавляют этилацетатом, промывают дважды водой (по 50 мл) и сушат над безводным сульфатом магния. Выпариванием растворителя получают 0,6 r з 14351 сложного этилового эфира в виде бесцветного масла, которое растворяют в 5 мл пиридина. К перемешиваемому раствору по каплям добавляют 0,5 мл
5 метансульфонилхлорида при температуре ледяной бани. После перемешивания в течение 2 ч при температуре ледяной бани, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин 10 и снова охлаждают в ледяной бане. 3атем добавляют 0 5 мл воды и смесь перемешивают при температуре ледяной бани в течение 30 мин и при комнатной температатуре также в течение 30 мин. 16
Смесь разбавляют водой (20 мл) и экстрагируют этилацетатом (50 мл).
Экстракт последовательно промывают
10Х-ной соляной кислотой, водой, 1 н. раствором гидроксида натрия и водой, сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получают
0,6 г. этилового эфира 6-(1-бензилок сикарбонил-4-пиперидил)-2-металсульфонилоксигексановой кислоты в виде 2б бесцветного масла.(<) -12,8 (в метаноле). Смесь этого сульфоната (0,5 г) и 0,71 г третбутилового эфира 3(R)-амико-4-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной зо
*ислоты нагревают при 80-100 С в течение суток. После охлаждения добавляют 200 мл этилацетата, и образовавшийся раствор последовательно промывают 51-ным раствором фосфорной кислоты (30, 20 мл) и водой, сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получают желтое масло, которое очищают хроматографически на колонке с силикагелем (гексан:
:этилацетат=2:i). Из первой фракции получают 0,45 г третбутилового эфи-! ра 3(R)-j5-(1-бензилоксикарбонил-4пиперидил-1(R) этоксикарбонилпентил)амино-4-оксо-2 3 4 5-тетрагидроФ У S
1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде бесцветного масла. Из второй фракции получают 0,09 г третбутилового эфира 3(R) (5-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-1-(S) этоксикарбонилпентил) амино-4-оксо-2,3, 4,5-тетрагидро-1,5-бензотиаэепин-5уксусной кислоты в виде бесцветного масла.
Пример 4. В 50 мл горячего ацетона растворяют 5 r 6-(1-бензил.оксикарбонил-4-пиперидил)-2-оксигексановой кислоты и 4,2 r цинхонидина. После охлаждения раствор раз52
4 бавляют 50 мл диэтилового эфира и выставляют выдерживаться в холодильнике. Осадившиеся кристаллы удаляют путем фильтрации, а фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в 5 мл ацетона и образовавшийся раствор разбавляют 35 мл диэтилового эфира. После выдерживания в холодильнике образовавшиеся кристаллы собирают путем фильтрации и получают
1,4 г цинхонидиновой соли. Эту соль (1,3 г) добавляют к смеси 200 мл этилацетата и 50 мл 1 н. соляной кислоты и образовавшуюся смесь тщательно перемешивают. Этилацетатный слой промывают 1 н. соляной кислотой (50 мл) и водой (50 мл), сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получают маслянистый осадок, который растворяют в смеси 30 мл толуола, 3 мл этилового спират и 0,05 г паратолуолсульфокислоты. Этот раствор перемешивао ют в течение 1 ч при 90-100 С, охлаждают, разбавляют этилацетатом (200 мл) и дважды промывают водой (по 50 мл). Органический слой сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получают сложный этиловый эфир в виде бесцветного масла, которое растворяют в 5 мл пиридина. К перемешиваемому раствору по каплям добавляют 0,4 мл метансульфонилхлорида при температуре ледяной бани. После перемешивания в течение
30 мин в смесь добавляют 1 мл воды, и образовавшуюся смесь перемешивают в течение 30 мин при температуре ледяной бани и разбавляют 150 мп этилацетата. Органический слой промывают последовательно 1 н ° соляной кислотой (2 раза по 50 мл), раствором бикарбоната натрия (50 мл) и водой, сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получают этиловый эфир 6-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-2-метансуль-! фонилоксигексановой кислоты (0,8 r) в виде бесцветного масла.Яр+13,7 (в метаноле). Смесь этого мезилата (0,72 г) и 1,46.г третбутилового эфира 3(R) — àìèíî-4-оксо-2,3,4,5тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксус" ной кислоты перемешивают в течение о ночи при 90-100 С. После охлаждения реакционную смесь растворяют в 200 мл этилацетата и раствор промывают последовательно 5 -ным раствором фос"
5 14351 форной кислоты (дважды по 30 мл) и водой, сушат над безводным сульфатом Магния и выпаривают в вакууме, полу— чают желтое масло, которое очищают хроматографически на колонке с сили5
Магелем (гексан:этилацетат= 2:1). з первой фракции получают 0,12 r ретбутилового эфира 3(R) — 5-(1-бенилоксикарбонил-4-пиперидил)-1(R)— токсикарбонилпентил/амино-4-оксо,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-уксусной кислоты в виде бесцветного масла. Из второй фракции получают
I),52 r третбутилового эфира 3(R) — 5(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил) (S) -этоксикарбонилпентил амино-4ксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде есцветного масла.
Пример 5. В 2 мл уксусной кислоты растворяют 0,6 r третбутил3(К) — L3-(1-бензилоксикарбонил-4-пипеидил) — 1(R)-этоксикарбонилпропил) амико-4-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5бензотназепин-5-ацетата, к раствору рибавляют 2 мл ЗОХ вЂ но раствора бромистого водорода в этилацетате и затем оставляют смесь стоять при комнатной температуре в течение 1 ч.
К реакционному раствору прибавляют
150 мл диэтилового эфира и смесь оставляют отстаиваться. После этого
Пример 6. Аналогично примеру 5 0,4 г третбутил-3(К)- (3-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-1(S)— этоксикарбонилпропил)амина †-оксо-2, 3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин5-ацетата обрабатывают бромистым водородом, 0,35 r дигидробромида
3(R)- (1-(S)-этоксикарбонил-3-(4-пипе55 ридил) пропил| амино-4-оксо-2, 3, 4, 5тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде бесцветного порошка .. Ы в- 86 (C = О, б в метаноле) . растворитель декантируют, осадок промывают диэтиловым эфиром, сушат и получают 0,5 r дигидробромида З(В)- $1(R)-этоксикарбонил-3-(4-пиперидил) пропил) амино-4-оксо-2, 3, 4, 5 тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде бесцветного порошка. P<)п — 106 (с = 0,6 в мета—
Z2 о 40 ноле).
Найдено, %: С 41,43, Н 5,39;
N 6,30
С2 Н N>0
Вычислено,%: С 41,96, Н 5„60
N 6,68.
Найдено /: С 40,47; H 5,32, N 6,28.
С2Н N30 $ 2 HBr H20 °
Вычислено, Х: С 40„81; Н 5,76
N 6,49.
Пример 7. В 4 мл 0 1 N водного раствора гидроокиси натрия растворяют 0,15 r дигидробромида 3(R) (1($)-этоксикарбонил-3-(4-пиперидил) пропил| амико-4-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты, полученной в примере 6, и раствор оставляют стоять при комнатной температуре в течение 2 ч. Раствор слабо подкисляют с помощью 1 мл уксусной кислоты и очищают колоночной хроматографией íà Amberliti XAD-2 (метанол:вода=1:1) . Элюат концентрируют при пониженном давлении, остаток лиофильно высушивают и получают
0,06 г 3(R) — P -(S)-карбокси-3-(4-пиперидил) пропил) амино-4-оксо-2, 3, 4,5тетрагидро-1,5-бензотиазепин-уксусной кислоты в виде бесцветного порошка. jot — 128 (с = О, 1 в смеси метанол-вода). Иасс-спектр (m/е):
422 (MH ); при добавлении K3:
450 (M+K)
Найдено Х С 54,05, Н 6 17;N 9,21
С, Н2ЧИ 0,$ Н20
Вычислено, Х: С 54, 65, Н 6, 65;И 9, 56.
Пример 8. Смесь 0,4 г третбутилового эфира 3(R)-амино-4-оксо2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин5-уксусной кислоты, 1 r этилового эфира 4-(i-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-2-хлормасляной кислоты, 0,2 г триэтиламина, 0,9 r иодида калия и 50 мл ацетонитрила нагревают с обратным холодильником в течение
2 суток. После охлаждения реакционный раствор концентрируют при пониженном давлении, и остаток очищают хроматографически ча колонке с силикагелем (гексан:этилацетат = 2:1), получают 0,15 г третбутилового эфира
3(К)- (3-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-1(R)-этоксикарбониппропиламино-4-оксо-2,3,4,5-тетрагидро"1,5бензотиазепин-5-уксусной кислоты и 0,25 г третбутилового эфира
3(R) †3 -бензилоксикарбонил-4-пипериднл)-1($)-этоксикарбонилпропил/ амино-4-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5бензотиазепин-5-уксусной кислоты в вице бесцветных маслянистых продуктов.
Пример 9. В 1 мл уксусной кислоты растворяют 0,5 г третбутило14351
7 вого эфира 3(R) rá-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил)-1-(R)-этоксикарбонилгексил)амино-4-оксо-2,3,4,5тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты и к этому раствору. добавляют 2 мл 30 -ного раствора бромистого водорода в уксусной кислоте, смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч. К реакционному раствору добавляют 200 мл диэтилового эфира и дают смеси отстояться. Жидкость над осадком декантируют и осадок растворяют в 20 мл 1 н, водного раствора гидроксида натрия, после чего дают раствору отстояться при комнатной температуре в течение 30 мин, Этот раствор нейтрализуют, добавляя в него 2 мл уксусной кислоты, и очищают на колонке методом МС1 гель-хроматографии (вода: метанол = 1:2).
Элюент концентрируют при пониженном давлении, и остаток лиофилизуют, получают 0,23 г 3(R) — t1(R)-карбокси-6(4-пиперидил)гексил.брамино-4-оксо-2,3, 4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5уксусной кислоты в виде бесцветного порошка. (oLJ — 144 (в воде), Пример 10. В 1 мл уксусной кислоты растворяют 0,9 третбутилового эфира 3(R) tá-(1-бензилоксикарбо30 нил-4-пиперидил) -1-(S) этоксикарбонилгексил) амино-4-оксо-2, 3,4, 5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты и к этому раствору добавляют
2 мл 30%-ного раствора бромистого ЗБ водорода в уксусной кислоте, выдерживают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 1,5 ч. В реакционный раствор добавляют 200 мл диэтилового эфира, и дают ему отсто- 40 яться. Жидкость над осадком декантируют и осадок растворяют в 30 мл
1 н. водного раствора гидроксида натрия, после чего оставляют раствор выдерживаться при комнатной темпера- 45 туре в течение 30 мин. В раствор добавляют 3 мл уксусной кислоты и и очищают методом МС1 гель-хроматографии (вода:метанол = 1:2). Элюент концентрируют при пониженном давлении 50 и остаток лиофилизируют, получая
0,43 r 3(R) — (I(S)-карбокси-6-(4-пиперидил)гексил)амино-4-оксо-2,3,4,5тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде бесцветного порошка. (ос) — 121 (в воде), масс-спектр в
+ вторичных ионов (м(е): 464 (МН ).
Пример 11. В 1,5 мл уксусной кислоты растворяют 0,3 г трет52 8 бутилового эфира 3(К)-(6-(1-бензилоксикарбонил-4-пиперидил) -1(S) -этоксикарбонилгептил) амино — 4-оксо-2,3, 4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5уксусной кислоты и к этому раствору добавляют 1 мл 30 -ного раствора бромистого водорода в уксусной кислоте, смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 0,5 ч. В реакционный раствор добавляют 80 мл диэтилового эфира, и дают раствору отстояться. Жидкость над осадком декантируют, осадок растворяют в 10 мл 1 н. водного раствора гидроксида натрия, выдерживают раствор при комнатной температуре в течение 30 мин. Раствор нейтрализуют 2 мл уксусной кислоты и очищают хроматографически на колонке ХРД-2 (вода:метиловый спирт =
1:1). Элюент концентрируют при пониженном давлении и остаток лиофилизируют, получая 0,1 г 3(R) — P (S)-карбокси-7(4-пиперидил)-гептил)-амино4-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде бесцветного порошка. о -116 (в воде). Масс-спектр вторичных ионов (m/e): 478 (NH+).
Пример 12. В 10 мл уксусной кислоты растворяют 5,2 г третбутилового эфира 3(R) — (5-(1-бензилоксикарбонилпиперидин)-1(S) -этоксикарбонилпентил) амино-4-оксо-2, 3, 4, 5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-5-.уксусной кислоты и добавляют 10 мл 30 -ного раствора бромистого водорода в уксусной кислоте. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение
1,5 ч, а затем в смесь добавляют
200 мл диэтилового эфира. После отстаивания жидкость над осадком удаляют посредством декантации, осадок растворяют в 90 мл 1 н. водного раствора гидроксида натрия. После выдерживания смеси при комнатной температуре в те ение 1,5 ч, смесь нейтрализуют уксусной кислотой (10 мл), очищают хроматографически на колонке с МС1-гелем (вода:метанол = 1:1).
Элюат концентрируют при пониженном давлении приблизительно до объема
10 мл и выделившиеся кристаллы собирают посредством фильтрации и сушат, получают 2 1 r 3(В.)-(1(S)карбокси-5-(4-пиперидил)-пентил)амино-4-оксо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5бензотиазепин-5-уксусной кислоты в виде бесцветного кристаллического порошка, плавящегося при температуре
9 1435152 вЫше, чем 270 С (разложение), (<) 1 30 (в воде) .
Найдено, Ж: С 59,59, Н 6,99, N 9,37.
С„н „N,0,8
Вычислено, _#_: С 58,78, Н 6,95:
М 9,35.
ИК-спектр (КВг), g„ „, см :
1 70 (амид), 1635, 1610 (карбокси- 10 л т).
Экспериментальный пример 1 °
Эксперимент по ингибированию фермента, превращающего ангиотензин («ПА), посредством соединений 1 (мет дика эксперимента).
Эксперимент проводят используя в к честве субстрата гиппурил-1 -гист дил-1-лейцин (ГГЛ), ФПА ингибирующ я активность определялась в единиц х процента ингибирования от коли— ч ства гиппуровой кислоты - гроизвод мой ФПА при добавлении соединения
Раствор соединения I «« буферном рдстноре 5Х-кого длкетклстльфокскда та
1bO мМ обратной соляной кислоты (Н 8,3,,содержит 300 мМ хлористого нртрия) добавляют к 100 млр ФПА (концентрация белка 200 мг/мл) и 100 мкл
1,25 мМ ГГЛ. В этом эксперименте б ферный раствор„ содержащий диметилс льфоксид в концентрации, равной к нцентрации в испытуемом растворе, спользовался в качестве контрольноо. После нагревания раствора при
37 С в течение 1 ч в него добавляют
150 мкл 1 н. соляной кислоты, для того, чтобы прервать реакцию. После сбавления 0,8 мкл этилацетата растор центрифугируют со скоростью
1!1500 o6/Mèí в течение 2 мин. Из этил.ацетатного слоя отбирают аликвоту в
0„5 мл и сушат ее при температуре не выше 40 С в потоке газообразного с1зота. Остаток тщательно смешивают с, 4,5 мл дистиллированной воды, и с(месь подвергают колориметрическому анализу при длине волны 228 нм.
Результаты испытания, полученные для соединения t представлены в рабл. 1. 58
l0 пе к питьевой воде и пище, Крыс анестезировали, задавая им внутрибрюшинно пентобарбитал натрия (50 мг/кг) за сутки до дня испытания, и в каждую бедренную артерию вставляли полиэтиленовую трубку для измерения давления крови, и в каждую бедренную вену — для введения а««гиотензина I и II. Эти трубки фиксировались.
В день испытания измеряют среднее давление крови в контрольной фазе при помощи электрического гемодинамометра (NPV-0,5-290-0-111 модель, производство фирмы NEC-Саней, Япония) и записывают самописцем фирмы NECСаней (тип 365) или фирмы Ниппон Кохден. (тип RN-45). После этого ангиотензин 1, а затем ангиотензин II инъектируют через бедренную вену в дозировке 300 и 100 мг/кг соответственно, для того чтобы измерить гипертоническую активность. Затем внутривенно вводят 300 мкг/кг соединения
1 в виде изотонического солевого раствора и через 5, 10, 30, 60, 90 и 120 мин после этого введения повторно инъектируют ангиотензин I и II, чтобы проследить гипертонические реакции. При расчете процента ингибирования гипертонической активности ангиотензина I величину процента ингибирования корректировали на основании изменения во времени гипертонической реакции, вызываемой ангиотензином II.
Результаты испытания, полученные для соединения 1, представлены в табл. 2 .
Соединения 1 относятся к малотоксичным соединениям и могут найти применение в медицине.
Формула изобретения
Способ получения производных
1,5-бензотиазепина формулы
СБ 2СО()Н
55 где n = 2-6, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что соединение общей формулы
Экспериментальный пример 2.
Влияние соединений 1 на ги«ерто«1ическую активность ангиотенэина I. (Методика эксперимента).
В качестве экспериментальных жи« отных применяли самцов. крыс (Спрагуe-Ауолей) весом от 300 до 400 r, «которых кормили при свободном досту(сн )„-4 ú««
1 ИБСЕН- COOH
12
1435152
Таблица
10 Соединение по примерам
Концентрация, мкМ
ФПА ингибирующая активность, Ж
0,1
0,1
Таблица 2
Ингибирование гипертонической реакции, вызванной ангиотензином Х, 7.
Соединение по примеру
Доза, мкг/кг внутривенно
Продолжительность периода после введения соединения, мин
ГТ
100
79
300
100 100
100
Составитель Г.Жукова
Техред М. Ходанич
Корректор В.Бутяга
Редактор 10.Середа
Подписное
Тираж 370
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4(5
Заказ 5567/58
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Пр:earmark, еН RCOOR1 где R1 — разветвленный низший алкил, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы
/ (сн,)„-(м-R, 1, R,— — СН-COOR где R — низший алкил, R — галоген или низший алкилз сульфонилоксигруппа;
R4 — бенэилоксикарбонил, полученное соединение подвергают гидролиэу и выделяют целевой продукт в виде фармацевтически приемлемой
5 соли или в свободном виде.
