Способ лечения кризов отторжения почечного аллотрансплантата

 

Изобретение относится к медицине, в частности, к трансплантологии. Цель - повышение обратимости кризов отторжения при уменьшении осложнений гормональной терапии. Для этого перед каждым введением метилпреднизолона определяют NA - K - АТФ - азную активность лимфоцитов, выделенных из крови реципиента, в присутствии метилпреднизолона в различных концентрациях и вводят препарат в минимальной концентрации, рассчитанной с учетом объема циркулирующей плазмы крови, вызывающей максимальное снижение NA - K - АТФ - азной активности лимфоцитов IN VITRO.

СОЮЗ СООЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

О»

4 (ц)

О (л) (21) 4629980/14 (22) 02.01.89 (46) 23.08.91. Бюл. М 31 (71) Донецкий государственный медицинский институт им. А.М.Горького (72) П.С.Серняк, Н.В.Коваленко. А,Г.Лунева, П.А.Чернобривцев и Д.И.Калинин (531 616.085(088.Щ (56) Шумаков В.И. идр. Синдром отторжения при трансплантации почки. — М.: Медицина, 1982, с. 232-237, (54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ КРИЗОВ ОТТОРЖЕНИЯ ПОЧЕЧНОГО АЛЛОТРАНСПЛАНТАТА

Изобретение относится к медицине, в частности к трансплантологии.

Цель изобретения — повышение обратимости криэов отторжения при уменьшении осложнений гормональной терапии.

Способ осуществляют следующим о6разом.

При диагностировании у реципиента криза отторжения почечного трансплантата выделяют из забранной венозной крови реципиента на градиенте плотности фиколлверографин лимфоциты, концентрацию которых доводят до 2 млн. в 1 мл среде, вводят по 1 мл взвеси лимфоцитов в 6 пробиоок, содержащих в качестве среды инку бации состав. содержащий 100 мМ Nacl. 20 мМ

KCI, 2,5 мМ MgCIz 0.5 мМ ЭДТА. 5 мМ НаМЗ, 50 мМ трис-HCI (рН 7,4) и метилпреднизолон в концентрациях 0,036; 0,0712; 0,142;

0,214; 0,285: 0,428 мг в 1 мл среды инкубации, одновременно с этим вводят по 1 мл

„„Я2„„1671303 А1 (я)5 A 61 K 31/56. G 01 N 33/50 (57) Изобретение относится к медицине, в частности к трансплантологии. Цель — повышение обратимости криэов отторжения при уменьшении осложнений гормональной терапии. Для этого перед каждым введением метилпреднизолона определяют

Na — К-АТФ-азную активность лимфоцитов, выделенных иэ крови реципиента, в присутствии метилпреднизолона в различных концентрациях и вводят препарат в минимальной концентрации, рассчитанной с учетом обьема циркулирующей плазмы крови, вызывающей максимальное сниже ние Иа -К-АТФ-азной активности лимфоцитов ill vitro. 1 табл. взвеси лимфоцитов еще в 6 пробирок, содержащих, кроме укаэанных ингредиентов, 0,5 ммоль уабаина, являющегося специфичным блокатором Na-К-АТФазы.

Инкубируют пробирки при 37"С в течение 15 мин. Затем вносят в пробирки 2,5 ммоль АТФ-йа2 и инкубируют при темпера óðå 20"С в течение 20 мин, после чего вносят в пробирки по 1 мл смеси, содержащей

2,5 трис-ацетатного буфера (рН 4,3), содержащего для определения неорганического фосфора 0,2%-ного молибдата аммония и

U,2 мл 1%-ного аскорбата на 5 мМ СиЯО4 и через 20 мин определяют фотокалориметрически оптическую плотность проб при длине волны 735 нм, Рассчитывают содержание неорганического фосфора, образовавшегося при ферментативном распаде АТФ в лимфоцитах по разности оптических плотностей пары пробирок, содержащих одинаковые концентра1671303

10 15

20 мин

55 ции метилпредниэолона с добавлением и без уабаина, которая характеризует активность Na-К-АТФазы инкубируемых лимфоцитов, определяют минимальную концентрацию метилпреднизолона, при которой происходило максимальное снижение выделение неорганического фосфора.

Реципиенту вводят дозу препарата, рассчитанную по произведению оптимальной концентрации препарата In vitro на объем циркулирующей плазмы реципиента (мл).

Повторяют определение эффективной концентрации метилпреднизолона ежедневно перед каждым введением препарата реципиенту.

Эффективную дозу препарата. которую необходимо ввести для лечения отторжения почечного трансплантата, определяют по формуле. эффективная доза (мг препарата)

=- опти..1альная концентрация !п vitro (мг/мл)х х ОЦП; где ОЦП вЂ” объем циркулирующей плазмы у данного реципиента (мл), определяемый любым доступным методом.

Таким образом, предлагаемый способ в сравнении с известным позволяет достоверно повысить эффективность лечения криэов отторжения и уменьшить частоту развития основных осложнений, связанных с купированием криза. Кроме того, способ позволяет сократить расход стероидов, в данном случае, метилпреда, используемых для лечения криза.

Пример 1. В отделении гемодиализа и трансплантации почки выполнена трансплантация почки больному Б, 40 лет. Диагноз до операции: первично-хронический гломерулонефрит, хроническая почечная недостаточность, терминальная стадия, пролонгированная гемодиализом.

В послеоперационном периоде больной полу ал профилактическую иммуносупрессию метипредом 0,5 мг/кг; аэатиприном

1 мгlкг и сандиммуном циклоспорин А)

8 мг/кг. Функция трансплантата после операции удовлетворительная.

На 12 сут диагностирован острый криз отторжения, Для лечения криза отторжения был выбран метилпредниэолон. Перед назначением препарата произведен забор крови у больчого для определения эффективной дозы препарата. Доза была определена следующим образом: выделили лимфоциты из гепаринизированной (25 ЕД/мл) веноэной крови реципиента путем наслоения на градиент плотности (1076 — 1078) фиколл-верографин.

Полученный пул лимфоцитов дважды отмывали средой 199 и доводили концентрацию клеток до 2 млн в 1 мл.

Лимфоцитарную взвесь в объеме 1 мл вводили в 6 пробирок со средой инкубации, включающей 100 мМ NaCI; 2,5 мМ МдС)2;

0,5 мМ ЭДТА; 20 мМ KCI; 5 мМ йайэ; 50 MM трис-HCI (рН 7,4), и метилпреднизолон в концентрациях 0,036 мг/мл (пробирка 1);

0,0712 мг/мл (пробирка 2): 0,142 мг/мл (пробирка 3); 0,214 мг/мл (пробирка 4);

0,285 мгlмл (пробирка 5); 0,428 мг/мл (пробирка 6).

Одновременно с этим 1 мл лимфоцитарной взвеси вводили еще в 6 пробирок(7 —.12), в которых содержалась аналогичная среда инкубации с такими же концентрациями метилпредниэолона, отличающаяся присутствием 0,5 мМ уабаина, являющегося специфическим блокатором Na-К-АТФаэы.

Инкубировали содержимое пробирок в термостате при температуре 37 С в течение

15 мин, после чего в пробирки вводили по 1 мл раствора Na-АТФ (2,5 мМ) и продолжали инкубацию при температуре 20 С в течение

Тормозили реакцию путем введения в каждую пробирку 1 мл смеси, содержащей

0,2 -ного раствора молибдата аммония на ацетатном буфере (рН 4,3) и 0,2 мл 1 (,-ного

° раствора аскорбата на 5 MM Си04.

Через 20 мин измеряли оптическую

30 плотность содержимого пробирок на фотоэлектрокалориметре ФЭК-56 М (длина волны 735 нм).

Определяли активность Na-К-АТФазы лимфоцитов (мг фосфора/мл ч) по разности оптических плотностей (концентрации фосфора, образовавшегося в процессе ферметативного гидролиза АТФ) в каждой паре пробирок с одинаковыми концентрациями в, них метилпредниэолона с и без уабаина (пробирки 1 и 6, 2 и 8, 3 и 9,4 и 10, 5 и 11, 6 и 12).

Находили минимальную концентрацию метилпреднизолона, которая приводила к максимальному снижению Na-К-АТФазы лимфоцитов. Оптимальная концентрация метилпредниэолона, при которой наступило максимальное снижение ферментативной. активности лимфоцитов реципиента, составляла 0,285 мг/мл.

Рассчиты вал и эффекти в ную дозу для купирования реакции отторжения аллотрансплантата в первые сутки развития криза по произведению найденной оптимальной концентрации метилпреднизолона in vitro на объем циркулирующей плазмы реципиента, который определяли по методу разведения красителя (синий Эванса).

Эффективная доза = 0,285 х 3250 (мл) 922,5 мг метилпреднизолона.

1671303

Формула изобретения

Составитель Н.Шульгина

Техред М.Моргентал Корректор М. Куче ря в а я

Редактор М.бланар

38кзэ 2784 Тираж 458 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета Ilo изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

В водили реци пиен ту в н утри вен но эффективную дозу препарата метипред.

Через сутки повторяли определение NaK-АТФазной активности лимфоцитов периферической крови для нахождения эффективной дозы препарата. Установили, что минимальная концентрация метилпреднизолона, при которой происходило максимальное снижение ферментативной активности лимфоцитов. составляла in vitro

0,214 мг/мл, объем циркулирующей плазмы

2890 мл. Эффективная доза метипреда

618,5 r. Провели внутривенную инфуэию препарата метипред в данной дозировке.

В течение последующих 2 сут оптимальная концентрация метилпреднизолона In

vitro составляла 0,142 мг/мл, Объем циркулирующей плазмы на 3 сут лечения криза отторжения составил 2900 мл, а на 4 сут

2800 мл. Соответственно этим показателям больному был инфузирован метипред в дозе

411,8 и 397, 6 мг, На 5 сут купирования криза оптимальная концентрация метилпреднизолона in

vitro составила 0,0712 мг!мл, При объеме циркулирующей плазмы 2950 мл больному был введен внутривенно метипред в дозе

209, 0 мг.

На 6 сут от начала лечения криза отторжения отмечено восстановление функциональной активности трансплантата. Решено лечение криза метипредом прекратить. Осложнений, связанных с применением стероидов, не регистрировали. Больной был выписан из отделения через 60 сут после трансплантации с удовлетворительной функцией аллотрансплантата (мочевина крови

8,9 ммоль, креатинин 0,1 ммоль, клубочко5 вая фильтрация по клиренсу эндогенного креатинина 30 мл/мин).

Распределение основных осложнений, связанных с применением стероидных препаратов (метипреда) при лечении кризов от10 торжения в контрольной и опытной группах, представлены в таблице, Таким образом, предлагаемый способ позволил снизить частоту развития основных осложнений, связанных с купировани15 ем кризов отторжения стероидами, в сравнении с известным с 80,7 до 42,1;(,.

20 Способ лечения кризов отторжения почечного аллотрансплантата, включающий введение метилпреднизолона, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения обратимости кризов отторжения при умень25 шении осложнений гормональной терапии, перед каждым введением препарата определяют Na-К-АТФ-азную активность лимфоцитов, выделенных из крови реципиента, в присутствии метилпреднизолона в различ30 ных концентрациях и вводят препарат в минимальной концентрации, рассчитанной с учетом объема циркулирующей плазмы крови, вызывающей максимальное снижение

Na-К-АТФ-аэной активности лимфоцитов.