Способ моделирования экспериментального изолированного неврита зрительного нерва


 


Владельцы патента RU 2504020:

Государственное бюджетное учреждение "УФИМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЛАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ Академии наук Республики Башкортостан" (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаз. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока на 21 сутки после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения изолированного неврита зрительного нерва. 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии.

При введении вируса простого герпеса в переднюю камеру глаза кролика развивается преимущественно экспериментальный герпетический кератоувеит (у 70-90% животных), редко ретинит, поражение зрительного нерва не наблюдалось (В.Б. Мальханов. Офтальмогерпес: клиника, диагностика, лечение, Уфа, 1994).

При введении вируса простого герпеса в переднюю камеру белых беспородных крыс, также наблюдали развитие герпетического кератоувеита без поражения зрительного нерва, и редко в сетчатой оболочке выявляли периваскулит, в преретинальной зоне - экссудат (там же).

Известен способ моделирования герпетической инфекции глаза при введении вируса простого герпеса в стекловидное тело беспородных белых мышей, однако в этом случае в 100% случаев поражались все оболочки глазного яблока, за исключением зрительного нерва (там же).

Известен способ моделирования экспериментального неврита зрительного нерва на кроликах, включающий введение в орбиту 1,0 мл 10% раствора метилового спирта на фоне аминазин-гексеналового наркоза. По мнению авторов, данная концентрация способна вызвать клинически видимое повреждение зрительного нерва без выраженного общетоксического действия [Н.Э. Темиров, Е.А. Нестеров, С.Н. Панченко (Ростов) Морфологическая характеристика экспериментального неврита зрительного нерва].

Наиболее близким аналогом изобретения является способ моделирования неврита зрительного нерва путем заражения кролика на роговицу вирусом простого герпеса типа I, при котором гистологические и вирусологические исследования позволили обнаружить поражение зрительного нерва при экспериментальном герпетическом кератите (Л.Н. Тарасова, Цитологические и гистологические исследования при герпетической болезни глаз // Автореф. дисс. … канд. мед. наук. - Ашхабад, 1968). Однако при таком способе в 100% случаев происходит поражение роговицы в виде древовидного кератита и значительно редко поражается зрительный нерв.

При моделировании герпетической инфекции глаза экспериментальных животных, чем меньше размер глазного яблока, тем чаще развивается травматическое повреждение оболочек глазного яблока. Более того, во всех экспериментальных исследованиях для введения вируса простого герпеса использовалась инсулиновая игла больших размеров (не менее 22G), которая травмировала оболочки глаза и вызывала неспецифическую воспалительную реакцию.

Кроме того, при моделировании герпетической инфекции глазного яблока вирус простого герпеса предварительно пассировали на первично-трипсинизированной культуре клеток фибробластов эмбриона человека, перевиваемой культуре клеток Vero или путем внутримозговых пассажей на мышах. Это приводило к высокой патогенности вируса и как следствие - поражению всех оболочек глазного яблока и 100% летальности экспериментальных животных.

Задачей предлагаемого изобретения является создание модели изолированного герпетического неврита зрительного нерва с высокой частотой его воспроизведения, наиболее приближенную к указанному заболеванию у человека, когда уменьшается вероятность травмирования оболочек глаза иглой и гибель животных от герпетического энцефалита.

Технический результат при использовании изобретения - повышение частоты и точности моделирования изолированного неврита зрительного нерва, предотвращение развития нежелательного сопутствующего заболевания и гибели экспериментальных животных.

Предлагаемый способ моделирования изолированного неврита зрительного нерва осуществляется следующим образом. Иглой 33 G кроликам породы шиншилла в стекловидное тело глаза через плоскую часть цилиарного тела вводят культуральную жидкость, содержащую вирус простого герпеса (ВПГ) типа 1 штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи в дозе 100000 ТЦЦ50. Проводят гистологические исследования удаленного глазного яблока, начиная с 21-х суток после заражения, которые позволяют изучить течение данного заболевания.

Одиннадцати кроликам (22 глаза) породы шиншилла через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело обоих глаз иглой 33 G вводили по 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 100000 ТЦЦ50 ВПГ типа 1 штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, полученной по стандартной методике [Вирусология. Методы: Пер. с англ. / Под. ред. Б. Мейхи. - М.: Мир, 1988. - С.270-287.]. На 21 день произвели забой животных и проводили гистологические исследования удаленных глазных яблок. В толще зрительного нерва, вокруг сосудов, обнаружен обширный очаг деструкции нервной ткани с гистолизом, сосуды расширены, малокровны. Некротизированная ткань пропитана белковой жидкостью с примесью большого количества нейтрофильных лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов. В ткани зрительного нерва, вокруг очага деструкции, определяется перицеллюлярный отек, сосуды полнокровные. В очаге деструкции нервной ткани видна выраженная воспалительная инфильтрация, представленная большим количество нейтрофильных лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов. В строме замечен межуточный отек, сосуды растянуты, стенки их утолщены за счет плазматического пропитывания, вокруг них - скопление отечной жидкости, пропитанной нейтрофилами, моноцитами, эозинофилами. Мелкие сосуды полнокровные, часть из них с явлениями стаза, в стенках - явления плазматического пропитывания. В участках зрительного нерва, прилежащих к стекловидному телу, имеется очаг деструкции, вокруг которого определяется воспалительная инфильтрация, дистрофические процессы в нейроцитах, а также выраженный отек.

При этом морфологические исследования не выявили характерных для герпетической инфекции воспалительных изменений в других отделах глазного яблока, повреждения иглой хрусталика и сетчатки. Кролики не погибли от энцефалита.

Пример. Кролику №2 породы шиншилла массой 2,3 кг через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело обоих глаз иглой 33 G вводили 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 100000 ТЦД50 ВПГ типа 1 штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи. На 21 день произвели забой животного и провели гистологические исследования удаленных глазных яблок. В толще зрительного нерва, вокруг сосудов, обнаружен обширный очаг деструкции нервной ткани с гистолизом, сосуды расширены, малокровны. Некротизированная ткань пропитана белковой жидкостью с примесью большого количества нейтрофильных лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов и лимфоцитов. В ткани зрительного нерва, вокруг очага деструкции, определяется перицеллюлярный отек, сосуды полнокровные. В очаге деструкции нервной ткани видна выраженная воспалительная инфильтрация, представленная большим количество нейтрофильных лейкоцитов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов. В строме межуточный отек, сосуды растянуты, стенки их утолщены за счет плазматического пропитывания, вокруг них - скопление отечной жидкости, пропитанной нейтрофилами, моноцитами, эозинофилами. Мелкие сосуды полнокровные, часть из них с явлениями стаза, в стенках - явления плазматического пропитывания. Вокруг очага деструкции зрительного нерва определялась воспалительная инфильтрация, дистрофические процессы в нейроцитах, а также выраженный отек.

Таким образом, предлагаемый способ моделирования изолированного герпетического неврита зрительного нерва позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека. Кроме того, отсутствует гибель экспериментальных животных от энцефалита и травматическое повреждение оболочек глазного яблока и хрусталика, вовлечение в воспалительный процесс других отделов глаза.

Способ моделирования изолированного герпетического неврита зрительного нерва, характеризующийся тем, что через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L2 , адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД50, при этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока на 21 сутки после заражения.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаза. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 10000 ТЦД50.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и предназначено для изучения принадлежности изучаемых лекарственных препаратов к субстратам эффлюксного белка-транспортера Pgp (гликопротеина-Р).

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной стоматологии, и касается моделирования деминерализации эмали зуба. Для этого на удаленный зуб фиксируют брекет.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии и касается моделирования атеросклероза, что может быть использовано для изучения диагностики, профилактики и лечения этого заболевания.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции дефицита оксида азота. Для этого в эксперименте моделируют дефицит оксида азота ежедневным, в течение 7 дней, внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования первичного билиарного цирроза. Для этого в просвет бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки и терминальный отдел подвздошной кишки крысы вводят по 0,08-0,12 мл 45-50% спиртового раствора пикрилсульфоновой кислоты с интервалом 5-10 минут.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано при моделировании хронической гнойной костной раны. Формирование костного дефекта проводят вдоль оси кости, помещают в него смесь культуры музейного штамма Staphylococcus Aureus №5 в количестве 40-45 млн KОЕ на 1 кг массы тела экспериментального животного и 0,1 мл стерильного кварцевого песка.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к офтальмологии, и касается моделирования диабетического макулярного отека. Для этого крысе вводят аллоксан в брюшную полость в дозе 15,0 мг/100 г веса.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине. Лабораторным животным через 9 недель после прекращения воздействия токсиканта проводят стимуляционную миографию.

Изобретение относится к медицине, а именно к регенеративной медицине и тканевой инженерии, и может быть использовано для получения экстрацеллюлярных матриксов кровеносных сосудов малого калибра. Для этого на первом этапе тканей фрагмент кровеносного сосуда отмывают дистиллированной водой в течение 1 часа при температуре +4°С. Затем фрагмент помещают в 0,05% раствор трипсина и 0,02%-ной ЭДТА на 1 час при температуре +37°С. На третьем этапе проводят обработку в 0,075% растворе додецилсульфата натрия в течение 24 часов при температуре 26°С. Далее фрагмент помещают в 0,25%-ный раствор Тритон Х-100 на 24 часа при температуре 26°С. На четвертом этапе данный фрагмент обрабатывают раствором, содержащим РНКазу А 20 мкг/мл и ДНКазу I 200 мкг/мл, в течение 6 часов при температуре +37°С. При этом после каждого этапа обработки фрагмент кровеносного сосуда трижды промывают в фосфатно-солевом буферном растворе по 10 минут. Весь процесс обработки осуществляют при постоянном перемешивании растворов и одновременной вибрации, создаваемой вибромотором, который расположен на наружной стенке емкости. Способ позволяет повысить качество децеллюляризации кровеносных сосудов малого калибра, сохранить их целостность и ультраструктуру для последующей иммобилизации клеток реципиента. 2 пр., 6 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной офтальмологии, и касается моделирования диабетической макулярной неоваскуляризации. У крыс моделируют сахарный диабет путем интрабрюшинного введения аллоксана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель в стекловидное тело по методике интравитреального доступа вводят крысиный VEGF 164 на 1-е, 3-и и 7-е сутки по 1 мкг, в суммарной дозе 3 мкг. Способ обеспечивает неоваскуляризацию макулярной области, типичную для сахарного диабета, что позволяет в дальнейшем изучать эффективность и определять целесообразность проводимой терапии этого заболевания. 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования мелкоочаговых мозговых геморрагий у новорожденных крыс. Для этого новорожденных крыс в возрасте 3-х дней помещают в камеру и подвергают воздействию звука силой 70 дБ, частотой 110 Гц, на протяжении 60 минут. Способ обеспечивает развитие мелкоочаговых мозговых геморрагий в коре головного мозга у 100% новорожденных крыс, без разрыва крупных сосудов, что наиболее близко соответствует клинической картине мозговых геморрагий у новорожденных детей. 7 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Для выявления психотропных свойств изучаемых веществ осуществляют моделирование эмоционально-физической стрессовой ситуации, достигаемой помещением животных в цилиндр с холодной водой. Регистрируют время решения и выполнения задачи покинуть цилиндр при помощи предлагаемых средств спасения (рейка, лестница и веревка), установленных в цилиндре. Рассчитывают процентную вероятность решения задачи. Осуществляют расчет индексов, характеризующих психоэмоциональное и моторно-двигательное воздействие изучаемого вещества по определенным математическим формулам. Способ является технически простым, финансово низкозатратным, имеет высокий уровень воспроизводимости, позволяет с низкими затратами времени и высокой долей вероятности определить психоседативное или психостимулирующее действие изучаемого вещества.1 ил., 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии, и может быть использовано для изучения вопросов патогенеза нефрогенной артериальной гипертензии и для скрининговых и детальных фармакологических исследований. Для моделирования ренопаренхиматозной артериальной гипертензии взрослым крысам-самцам массой производят химическое повреждение паренхимы почек путем введения 0,1 мл 4% параформальдегида в верхний полюс обеих почек. Способ обеспечивает в короткие сроки получение стойкого повышения артериального давления, высокую воспроизводимость результата, простоту выполнения процедуры, ее малую инвазивность, короткий реабилитационный период при формировании значимых морфологических и биохимических перестроек в органах-мишенях, аналогичных клиническим вариантам ренопаренхиматозной артериальной гипертензии. 2 табл., 4 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения механизмов коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней с 14 дня беременности внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. После этого проводят однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности на 21 день беременности путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией. Через 90 минут проводят сосудистые пробы с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции. Способ позволяет изучать NO - не обусловленные механизмы защитного эффекта при коррекции эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней внутрибрюшинным введением L-нитроаргининметилового эфира в дозе 25 мг/кг. После чего на фоне данной модели с 14 по 20 день беременности вводят внутрижелудочно азитромицин в дозе 30 мг/кг однократно в сутки. Способ обеспечивает выраженную коррекцию эндотелиальной дисфункции в особых условиях патогенеза этого состояния у беременных самок при дополнительном устранении остро возникающих инфекционных заболеваний или обострения хронически протекающих инфекционных процессов, которые также могут приводить к формированию гестоза. 1 пр.
Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента. Для коррекции ишемии с первых суток эксперимента внутрижелудочно вводят L-норвалин в суточной дозе 10,0 мг/кг, каждые 46 часов в течение 7 суток эксперимента. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии скелетной мышцы в эксперименте за счет стимуляции неоангиогенеза. 1 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого лабораторным животным на вторые сутки эксперимента моделируют ишемию мышц голени. Никорандил вводят внутрижелудочно в суточной дозе 1,3 мг/кг в 2 приема в первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии скелетной мышцы за счет стимуляции неоваскулогенеза.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии кожного лоскута на питающей ножке. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента. На первые и четвертые сутки эксперимента внутрибрюшинно вводят никорандил в суточной дозе 1,3 мг/кг в 2 приема. Способ обеспечивает увеличение выживаемости кожного лоскута в условиях редуцированного кровообращения за счет открытия АТФ-зависимых калиевых каналов и нитратоподобного эффекта никорандила в специфических условиях проведения эксперимента. 1 пр., 1 табл.
Наверх