Способ выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека



Способ выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека
Способ выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2524668:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине и касается способа выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека из семенной плазмы, заключающегося в том, что выделение проводят сочетая преципитацию сульфатом аммония и аффинную хроматографию на иммобилизованном лектине бодяги речной. Изобретение обеспечивает упрощение и ускорение выделения спермаспецифического ингибитора трипсина, а также увеличение выхода и степени его чистоты. 2 пр., 2 ил., 2 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно биохимии, и может быть использовано, в частности, для выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека из семенной плазмы.

В практике известен прототип - способ выделения спермаспецифического ингибитора трипсина, основанный на сочетании преципитации сульфатом аммония, гель-фильтрации, ионообменной и гидрофобной хроматографии (Николаев А.А., Карасев В'. С. Выделение и свойства специфического ингибитора трипсина из семенной плазмы человека // БИОХИМИЯ - 1990 - т.55. - №6 - с.1065-1071).

Недостатками этого способа являются;

- трудоемкость;

- длительность проведения;

- невысокий выход продукта и недостаточная его чистота. Изобретение направлено на упрощение и ускорение выделения спермаспецифического ингибитора трипсина, а также на увеличение выхода и степени его чистоты.

Указанный технический результат достигается тем, что на первой стадии выделения проводят тепловую обработку семенной плазмы, смешанной с 10 мМ трис-HCl буфером pH 7,4 в соотношении 1:1, при 70 С° в течение 30 мин, а через 1 час полученную смесь центрифугируют в течение 40-45 мин при 10000 g, собирая надосадочную жидкость, к которой добавляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммония, а через 2-4 часа смесь центрифугируют при 10000 g в течение 60 мин и полученный осадок ресуспендируют в трис-HCl буфере pH 7,4, а на заключительной стадии выделения проводят аффинную хроматографию спермаспецифического ингибитора трипсина на иммобилизованном лектине бодяги речной, после чего промывают 1М раствором NaCl, забуференным трис-HCl буфером и элюируют связанный на колонке спермаспецифический ингибитор трипсина 0,1675 М раствором лактозы в боратном буфере с pH=9,0.

Выделение спермаспецифического ингибитора трипсина проводили следующим способом. В работе использовали семенную плазму, которая отделялась центрифугированием от сперматозоидов (5000 g, 15 мин) и хранилась в замороженном виде при - 30 С° без добавления консервантов и ингибиторов протеолиза. Таким образом, было накоплено 800,0 мл семенной плазмы, которая далее использовалась для выделения спермаспецифического ингибитора трипсина.

На первой стадии выделения семенную плазму смешивали с 10 мМ трис-HCl буфером pH 7,4 в соотношении 1:1 и полученную смесь прогревали при 70 С° в течение 30 мин. Через 1 час указанную смесь центрифугировали в течение 40-45 мин при 10000 g в рефрижераторной центрифуге.

На следующей стадии выделения спермаспецифического ингибитора трипсина использовали надосадочную жидкость. К ней добавляли равный объем насыщенного раствора сульфата аммония. Через 2-4 часа смесь центрифугировали при 10000 g в течение 60 мин и полученный осадок ресуспендировали в трис-HCl буфере pH=7,4.

Заключительная стадия выделения спермаспецифического ингибитора трипсина представляет собой аффинную хроматографию спермаспецифического ингибитора трипсина на иммобилизованном лектине бодяги речной. Через колонку (1,5×12 см) лектин-сефарозы, уравновешенную трис-HCl буфером, пропускали весь объем полученной на предшествующей стадии фракции. Далее колонку промывали 1М раствором хлорида натрия, забуференного трис-HCl буфером, а затем элюировали связанный на колонке спермаспецифический ингибитор трипсина 0,1675 М раствором лактозы в боратном буфере с pH=9,0. Полученный элюат диализовали и концентрировали до приемлемого объема (12 мл).

Нами обнаружена способность лектина бодяги речной (Ephydatia fluviatilis) преципитировать спермаспецифический ингибитор трипсина. На рис.1 (преципитация препаратов спермаспецифического ингибитора трипсина лектином бодяги речной) показана преципитация фракций поэтапного выделения спермаспецифического ингибитора трипсина по сравнению со стандартным препаратом, полученным по способу, описанному в прототипе в агаровом геле, содержащем лектин бодяги речной (1 - препарат спермаспецифического ингибитора трипсина (80 мкг/мл); 2 - термостабильная фракция семенной плазмы; 3 - преципитат сульфата аммония из термостабильной фракции семенной плазмы; 4 - фракция, после аффинной хроматографии. Агаровый гель содержит полуочищенный лектин бодяги речной в конечной концентрации 0,50 мг на 100 мл агара. Окраска на общий белок кумаси блю. Образцы №2, 3, 4 стандартизованы по уровню общего белка и приведены по концентрации его к уровню в стандартном препарате спермаспецифического ингибитора трипсина - 80 мкг/мл.

Снижение диаметра колец преципитации обусловлено повышением степени очистки спермаспецифического ингибитора трипсина и уменьшением количества балластных белков, способных преципитироваться лектином бодяги речной.

В таблице 1 показаны стадии выделения спермаспецифического ингибитора трипсина. Обращает на себя внимание увеличение общей активности ингибитора трипсина в семенной плазме после ее температурной обработки. Мы считаем, что этот феномен обусловлен инактивацией многочисленных протеиназ семенной плазмы и поэтому мы сочли возможным расчитывать выход спермаспецифического ингибитора трипсина на последующих стадиях, принимая ингибиторную активность термостабильной фракции за 100% - цифры в скобках.

В таблице 2 приведена сравнительная характеристика предлагаемого способа выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека с прототипом.

На рис.2 (электрофорез в полиакриламидном геле), где А - семенная плазма человека; В - фракция спермаспецифического ингибитора трипсина после аффинной хроматографии, показано, что препарат спермаспецифического ингибитора трипсина гомогенен при электрофоретическом контроле чистоты.

Предлагаемый способ был успешно апробирован на кафедре общей и биоорганической химии ГБОУ ВПО АГМА, с апреля 2011 года до ноября 2012 года на 217 образцах семенной плазмы, собранных в центре планирования семьи г.Астрахань и ООО «Техномед».

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример №1. В работе использовали семенную плазму, которая отделялась центрифугированием 1 от сперматозоидов (5000g, 15 мин) и хранилась в замороженном виде при - 30 С° без добавления консервантов и ингибиторов протеолиза. Таким образом, было накоплено 300,0 мл семенной плазмы, которая далее использовалась для выделения спермаспецифического ингибитора трипсина.

На первой стадии выделения семенную плазму смешивали с 10 мМ трис-HCl буфером pH 7,4 в соотношении 1:1 и, полученную смесь прогревали при 70 С° в течение 30 мин. Через 1 час указанную смесь центрифугировали в течение 40 мин при 10000 g в рефрижераторной центрифуге.

На следующей стадии выделения спермаспецифического ингибитора трипсина использовали надосадочную жидкость. К ней добавляли равный объем насыщенного раствора сульфата аммония. Через 2 часа смесь центрифугировали при 10000 g в течение 60 мин и полученный осадок ресуспендировали в трис-HCl буфере pH=7,4.

Заключительная стадия выделения спермаспецифического ингибитора трипсина представляет собой аффинную хроматографию спермаспецифического ингибитора трипсина на иммобилизованном лектине бодяги речной. Через колонку (1,5×12 см) лектин-сефарозы, уравновешенную трис-HCl буфером, пропускали весь объем полученной на предшествующей стадии фракции. Далее колонку промывали 1М раствором хлорида натрия, забуференного трис-HCl буфером, а затем элюировали, связанный на колонке спермаспецифический ингибитор трипсина 0,1675 М раствором лактозы в боратном буфере с pH=9,0. Полученный элюат диализовали и концентрировали до приемлемого объема (8,0 мл).

Пример №2. Для выделения использовали семенную плазму, отделенную центрифугированием от сперматозоидов (5000g, 15 мин) и хранившуюся в замороженном виде при - 30 С° без добавления консервантов и ингибиторов протеолиза. Таким образом, было накоплено 200,0 мл семенной плазмы, которая далее использовалась для выделения спермаспецифического ингибитора трипсина.

На первой стадии выделения семенную плазму смешивали с 10 мМ трис-HCl буфером pH 7,4 в соотношении 1:1 и, полученную смесь прогревали при 70 С° в течение 30 мин. Через 1 час указанную смесь центрифугировали в течение 45 мин при 10000 g в рефрижераторной центрифуге.

На следующей стадии выделения спермаспецифического ингибитора трипсина использовали надосадочную жидкость. К ней добавляли равный объем насыщенного раствора сульфата аммония. Через 4 часа смесь центрифугировали при 10000 g в течение 60 мин и полученный осадок ресуспендировали в трис-HCl буфере pH=7,4.

Заключительная стадия выделения спермаспецифического ингибитора трипсина представляет собой аффинную хроматографию спермаспецифического ингибитора трипсина на иммобилизованном лектине бодяги речной.

Через колонку (1,5×12 см) лектин-сефарозы, уравновешенную трис-HCl буфером, пропускали весь объем полученной на предшествующей стадии фракции. Далее колонку промывали 1М раствором хлорида натрия, забуференного трис-HCl буфером, а затем элюировали связанный на колонке спер-маспецифический ингибитор трипсина 0,1675 М раствором лактозы в боратном буфере с pH=9,0. Полученный элюат диализовали и концентрировали до приемлемого объема (6,0 мл).

Предложенный нами способ упрощает (в прототипе выделение состоит из 4 стадий, а в предложенном нами способе - из 3), ускоряет в 3,5 раза выделение спермаспецифического ингибитора трипсина человека из семенной плазмы по сравнению с прототипом и тем самым повышается эффективность способа (повышается выход конечного продукта на 30% по сравнению с прототипом).

Главное преимущество нашего способа заключается в применении аффинной хроматографии на малоизученном лектине животного происхождения из бодяги речной. Этот лектин обладает высоким сродством к галактозосодержащим гликопротеинам. По нашим данным константа диссоциации лактозы с этим лектином составляет 1,34×10-4 мМ. Это позволяет однократно повысить степень очистки в 144 раза (по сравнению с предыдущей стадией очистки). Самое главное, в отличие от прототипа, наш способ позволяет связать всю массу спермаспецифического ингибитора трипсина, а не повторять многократно операцию хроматографии, выделяя за один сеанс не более 1 мг препарата.

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СПЕРМАСПЕЦИФИЧЕСКОГО ИНГИБИТОРА ТРИПСИНА ЧЕЛОВЕКА

Таблица 1
Выделение спермаспецифического ингибитора трипсина человека
Стадия выделения Белок, мг/мл Общий белок, мг Удельная активность, ИЕ/мг белка Общая активность, ИЕ Выход, % Степень очистки
Нативная семенная плазма 59,0 47200,0 0,006 283,2 100 1
Тепловая обработка 22,0 16720,0 0,025 418,0 147,6 (100) 4,2
Преципитация сульфатом аммония 4,75 5370,0 0,068 367,5 129,8 (87,9) 11,3
Аффинная хроматография 1,8 21,7 9,76 211,75 74,8 (50,7) 1626,7
Таблица 2
Сравнительная характеристика предлагаемого способа выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека с прототипом
Сравниваемые показатели Прототип Предлагаемый способ
Общее количество стадий выделения 4 3
Общее время проведения выделения, часов не менее 76 часов не более 20 часов
Степень очистки 184,3 1626,7
Выход, % 21,2% 50,7%

Способ выделения спермаспецифического ингибитора трипсина человека из семенной плазмы, заключающийся в том, что выделение проводят сочетая преципитацию сульфатом аммония и хроматографию, отличающийся тем, что на первой стадии выделения проводят тепловую обработку семенной плазмы, смешанной с 10 мМ трис-HCl буфером pH 7,4 в соотношении 1:1, при 70 С° в течение 30 мин, а через 1 час полученную смесь центрифугируют в течение 40-45 мин при 10000 g, собирая надосадочную жидкость, к которой добавляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммония, а через 2-4 часа смесь центрифугируют при 10000 g в течение 60 мин и полученный осадок ресуспендируют в трис-HCl буфере pH 7,4, а на заключительной стадии выделения проводят аффинную хроматографию спермаспецифического ингибитора трипсина на иммобилизованном лектине бодяги речной, после чего промывают 1М раствором NaCl, забуференным трис-HCl буфером, и элюируют связанный на колонке спермаспецифический ингибитор трипсина 0,1675 М раствором лактозы в боратном буфере с pH=9,0.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине. Сущность способа оценки детоксикационной функции организма у работающих в условиях химического комплекса включает определение активности супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в лизатах эритроцитов, глутатионредуктазы в эритроцитах, рассчитывают показатель детоксикационной функции организма (ПD) по формуле.

Изобретение относится к способу ранней детекции мышечных дегенеративных заболеваний и к способу прогнозирования и/или определения терапевтической эффективности терапевтического средства и/или способа терапии заболеваний посредством измерения тетранор-PGDM (11,15-диоксо-9α-гидрокси-2,3,4,5-тетранорпростан-1,20-диовой кислоты) в образце мочи субъекта и сравнения его содержания относительно образца, выделенного у здорового индивидуума.

Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой способ идентификации соединения, пригодного для лечения гингивита, включающий: взаимодействие первого гингивального образца, полученного от млекопитающего, страдающего от гингивита, с исследуемым соединением; взаимодействие второго гингивального образца из ротовой полости млекопитающего с положительным контролем - соединением, подавляющим экспрессию одной или более матриксных металлопротеиназ (галогенированный дифениловый эфир); измерение степени, с которой экспрессия одной или более матриксных металлопротеиназ подавляется с помощью исследуемого соединения; измерение степени, с которой экспрессия одной или более из матриксных металлопротеиназ подавляется с помощью положительного контроля; и сравнение степени, с которой экспрессия одной или более из матриксных металлопротеиназ подавляется с помощью исследуемого соединения, со степенью, с которой экспрессия одной или более из матриксных металлопротеиназ подавляется с помощью положительного контроля; в котором исследуемое соединение, которое подавляет экспрессию одной или более из матриксных металлопротеиназ в равной или большей степени, чем положительный контроль, является соединением, пригодным для лечения гингивита; где одна или более матриксных металлопротеиназ, для которых измеряют экспрессию, включают, по меньшей мере, ММР-9 и ММР-13.

Изобретение относиться к области микробиологии. Сущность способа обнаружения и идентификации микроорганизма на твердой и полутвердой среде состоит в том, что осуществляют a) сканирование твердой или полутвердой ростовой среды, о которой известно, что она содержит или может содержать одну или более чем одну колонию микроорганизма, для локализации любых колоний, присутствующих на среде; b) непосредственное исследование на указанной ростовой среде одной или более чем одной колонии, локализованной на стадии (а) с диаметром возбуждающего пучка менее чем приблизительно 1000 мкм, с получением измерений собственной флуоресценции (СФ), характеристических для микроорганизма в колонии; c) идентификацию микроорганизма в колонии на основании измерений СФ, где микроорганизмы характеризуют на уровне семейства, рода, вида или на уровне штамма.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе у больных стабильной стенокардией напряжения на фоне приёма бета-адреноблокаторов (ББ) без дополнительных вазодилатирующих свойств.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к гепатологии, и может быть использована в диагностике заболеваний печени при формулировке предварительного диагноза.
Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой способ диагностики гигиенического состояния полости рта у субъекта, в соответствии с которым у субъекта берут пробу жидкости десневой борозды и определяют в указанной пробе содержание одного или нескольких метаболитов.
Изобретение относится к медицине. Более подробно изобретение относится к диагностике ревматоидного артрита.

Изобретение относится к области медицины, кардиологии и может быть использовано для прогнозирования риска развития рестеноза после коронарного стентирования. Сущность способа: определяют значения дополнительных факторов риска - измерения толщины эпикардиальной жировой ткани, уровней лептина, липопротеина «a» и глюкозы в крови, после чего осуществляют математическую обработку числовых значений факторов риска с получением вероятности возникновения рестеноза по формуле: Р= [ехр(-8,0248+0,0893·X1+0,00354·X2+0,1397·X3+1,1194·X4+0,3286·Х5+0,0665·X6)]/ [1+ехр (-8,0248+0,0893·X1+0,00354·X2+0,1397·X3+1,1194·X4+0,3286·X5+0,0665·X6)], где P - вероятность возникновения рестеноза в %, X1 - значение лептина пациента в нг/мл; X2 - значение липопротеина «a» в мг/л; X3 - толщина эпикардиальной жировой ткани в миллиметрах; X4 - значение холестерина липопротеидов высокой плотности в ммоль/л; X5 - значение глюкозы крови в ммоль/л; X6 - значение интерлейкина-6 в пкг/мл; -8,0248 - свободный член уравнения.

Изобретение относится к фармацевтике и представляет собой способ идентификации соединения, пригодного для лечения заболевания пародонта, включающий: получение первого гингивального образца у млекопитающего, страдающего от заболевания или состояния ротовой полости; получение второго гингивального образца из ротовой полости млекопитающего; взаимодействие первого образца с исследуемым соединением; взаимодействие второго образца с положительным контролем - соединением, известным для подавления экспрессии одного или более биомаркеров, выбранных из группы, состоящей из DEFB4, CTSS, BGN, BF и IL-12А (галогенированный дифениловый эфир); измерение степени, с которой экспрессия одного или более биомаркеров подавляется с помощью исследуемого соединения; измерение степени, с которой экспрессия одного или более из биомаркеров подавляется с помощью положительного контроля; и сравнение степени, с которой экспрессия одного или более из биомаркеров подавляется с помощью исследуемого соединения, со степенью, с которой экспрессия одного или более из биомаркеров подавляется с помощью положительного контроля; в котором исследуемое соединение, которое подавляет экспрессию одного или более из биомаркеров в равной или большей степени, чем вышеуказанный положительный контроль, является соединением, пригодным для лечения пародонта.
Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для персонифицированного прогнозирования эффективности терапии хронического гепатита С пегилированным интерфероном-альфа и рибавирином. Определяют показатели стадии фиброза печени от F0 до F4, количество тромбоцитов, генотипа полиморфного локуса rs12979860 гена IL28B, уровня анти-ВГС IgM, наличия aнти-NS5a IgG и отношения титров анти-NS4ab IgG к анти-NS3 IgG, после чего данным показателям присваиваются баллы. Далее баллы суммируются, и при значении суммарного балла критерия-предиктора от +9 до +6 определяют очень высокую вероятность достичь устойчивого вирусологического ответа (УВО). При значении от +5 до +2 определяют хорошую вероятность достичь УВО, но впоследствии возможен рецидив. При значении +1 определяют умеренную вероятность достичь УВО, впоследствии очень возможен рецидив. При значении от 0 до -9 УВО не будет достигнут. Предлагаемый способ позволяет эффективно выбрать пациентов для стандартной двойной противовирусной терапии хронического гепатита C на фоне новых схем лечения. 3 табл., 10 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии и касается способа получения белков, выделенных при лизисе клеток Vero, включающего следующие стадии: культивирование и сбор клеток Vero; разрушение и лизис клеток Vero; очистку выделенных при лизисе клеток Vero белков путем гидрофобной хроматографии на фенилсефарозе 6FF, эксклюзивную хроматографию на сефарозе, элюцию, концентрирование, выделенные белки представляют собой смесь белков с молекулярными массами 11 кДа, 17-34 кДа, 55 кДа и 72-170 кДа. Выделенные при лизисе клеток Vero белки, полученные по настоящему изобретению, имеют широкий спектр применения. Они могут быть использованы для контроля и анализа качества в ходе получения вакцин с применением клеток Vero при высокой чувствительности и хорошей воспроизводимости метода. В настоящем изобретении также предусмотрен набор для анализа НСР клеток Vero, характеризующийся высокой специфичностью, высокой чувствительностью и хорошей воспроизводимостью. Набор может быть использован для контроля и анализа качества в ходе получения не только не секретируемых вирусных вакцин против таких вирусов, как вирус гепатита А, но и других вакцин, получаемых с применением клеток Vero. 4 н. и 14 з.п. ф-лы, 14 табл., 14 пр., 6 ил.
Изобретение относится к медицине. Способ прогнозирования риска возникновения переломов заключается в том, что выделяют ДНК из лейкоцитов периферической венозной крови, методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией, генотипируют 3 полиморфных варианта -1997G>T (g.3011T>G, rs1107946), -1663IndelT (g.3344_3345delTT, rs2412298) и +1245G>T (c.104-441G>T (rs1800012), расположенных в регуляторном регионе гена COLIA1. При идентификации сочетания генотипов: 1997∗G∗T/-1663∗I∗D/ +1245∗G∗T прогнозируют категорию лиц с повышенным риском развития возникновения переломов. Использование заявленного способа позволяет получить критерии оценки риска возникновения переломов с высокой прогностической значимостью. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения биологического возраста у беременных женщин. Сущность способа состоит в том, что используют данные общего и биохимического анализов крови, показателей коагулограммы крови, массы тела, окружности живота (ОЖ) по формуле для I, II, III триместра беременности, затем определяют должный биологический возраст по формуле для I, II, III триместра беременности. Из величины биологического возраста вычитают величину должного биологического возраста и при значении разницы от -15,00 до -5,00 лет определяют замедленное старение, от -4,99 до +4,99 лет - физиологическое старение, от +5,00 до +15,00 лет - ускоренное старение. Использование заявленного способа позволяет точно определить биологический возраст у беременной женщины. 9 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и представляет собой способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень липопротеинов высокой плотности и при величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз. Изобретение позволяет повысить точность и упростить процедуру диагностики наружного генитального эндометриоза. 3 пр.

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой способ прогнозирования развития пороговой стадии ретинопатии недоношенных у детей без офтальмоскопических признаков заболевания, отличающийся тем, что на сроке по 33 неделю гестационного возраста в сыворотке крови определяют содержание фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и при уровне VEGF, равном или превышающем 1300 пг/мл, прогнозируют развитие пороговой стадии ретинопатии недоношенных. Изобретение обеспечивает возможность коррекции тактики ведения недоношенных детей на этапах выхаживания. 2 ил., 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, и описывает способ оценки эффективности тромболитической терапии у больных острым инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST. Способ включает контроль состояния пациента, при котором пациенту исходно и каждые 60 минут после начала тромболизиса в течение до 4-х часов определяют концентрацию тропонина I в крови, и при увеличении концентрации тропонина I в 10 и более раз по сравнению с предыдущим показателем судят об эффективности тромболитической терапии. Изобретение может быть использовано в неотложной кардиологии для оценки эффективности тромболитической терапии у больных острым инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST и позволяет оценить эффективность тромболитической терапии в короткие сроки и с высокой точностью, при этом на результаты исследования не влияют повторные инфаркты в анамнезе, интервенционные процедуры на сердце и кардиохирургические операции. 3 ил., 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для лечения некротического энтероколита у новорожденных и детей младшего грудного возраста. Для этого проводят антибактериальную, инфузионную, посиндромную, иммунозаместительную терапии, хирургическое лечение с учетом тяжести состояния ребенка и стадии процесса. При этом дополнительно определяют наличие внутриутробной инфекции. Определяют наличие и выраженность гнойно-септических показателей: прокальцитонина, С-реактивного белка, лейкоцитарного индекса интоксикации Кальф-Калифа и иммуноглобулина А. При наличии не менее одной внутриутробной инфекции и повышении гнойно-септических показателей более чем в 1,5 раза выше нормы назначают лимфотропную терапию один раз в сутки в течение 7-10 дней в виде разовой подкожной инъекции антибактериального препарата широкого спектра действия в правую паховую область на 1 см выше пупартовой связки и два внутривенных введения другого антибиотика. Изобретение позволяет сократить лекарственную нагрузку на пациентов, снизить риск развития осложнений и уменьшить летальность у новорожденных и детей младшего грудного возраста. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для исследования всасывания аминокислот из пищеварительного тракта. Для этого проводят исследование крови утром натощак и после приема аминокислотной смеси. При этом сначала утром натощак определяют объем циркулирующей крови, гематокрит и суммарное расчетное содержание азота аминокислот в крови. После этого перорально вводят 100,0 мл раствора аминокислот, транспортируемых по одному из вариантов всасывания с известной концентрацией раствора и содержания в нем азота аминокислот. Через 30, 40, 50, 60 и 70 минут после введения аминокислотной смеси повторно определяют объем циркулирующей крови, гематокрит и суммарное расчетное содержание азота аминокислот. Рассчитывают в пробах крови коэффициент всасывания аминокислот по формуле: К = N n × О Ц К n × ( 100 − H t n / 100 ) − N 1 × О Ц К 1 × ( 100 − H t 1 / 100 ) N , где К - коэффициент всасывания аминокислот, N - содержание азота в аминокислотной смеси, N1 - показатели азота аминокислот в крови до приема аминокислот, Nn - показатели азота аминокислот в крови после приема аминокислот, ОЦК1 - объем циркулирующей крови до приема аминокислот, ОЦКn - объем циркулирующей крови после приема аминокислот, Ht1 - гематокрит до приема аминокислот, Htn - гематокрит после приема аминокислот, n - время после перорального введения аминокислот. После этого с учетом результатов показателя коэффициента К и времени, прошедшего после приема раствора аминокислот, строят график, отражающий скорость всасывания аминокислот в пищеварительном тракте. Способ позволяет оценить скорость суммарного всасывания аминокислот из пищеварительного тракта с учетом особенностей транспортной системы. 1 пр.
Изобретение относится к медицине и касается диагностики острого токсического повреждения печени крыс. Способ заключается в выделении липидов, а именно в том, что добавляют 25 мкг 10% раствора тезита при одновременном перемешивании смеси с помощью шейкера при 20°C и частоте колебаний 120 в минуту в течение 30 минут с последующим определением в растворе общих фосфолипидов и триглицеридов. При их соотношении, равном 1,01-1,19, при росте активности в крови аланинаминотрансферазы 0,50-0,62 ммоль/л и более диагностируют острое токсическое повреждение печени крыс. Использование способа позволяет повысить эффективность и точность диагностики острого токсического повреждения печени крыс. 2 табл.
Наверх