Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов

Авторы патента:


Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов
Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов
Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов
Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов
Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов
Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов
Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов
Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов
Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов и способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов

 


Владельцы патента RU 2556958:

Федеральное Бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к иммунологии и представляет собой способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов, отличающееся тем, что при установленном патогенетическом факторе проводят регистрацию степеней нарушения микробиоценоза конкретного биотопа с использованием комплекса методов оценки уровней факторов колонизационной резистентности, а именно нормальной микрофлоры, условно-патогенной микрофлоры, иммуноглобулинов - G, М, А, секреторного иммуноглобулина А и sc компонента; и в зависимости от степени нарушения микробиоценоза оценивают состояние мукозального иммунитета и прогнозируют благоприятный исход с эрадикацией возбудителя или хронизацию с персистированием возбудителя. Также изобретение относится к способу коррекции инфекционно-воспалительных процессов с подключением иммуномодулятора - Кипферон®. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования течения заболевания, а также расширение арсенала способов коррекции инфекционно-воспалительных процессов. 2 н.п. ф-лы, 3 пр., 6 табл., 1 ил.

 

Изобретение относится к микроэкологии и иммунологии и может использоваться для оптимизации диагностики, прогнозирования и лечения инфекционно-воспалительных процессов.

Микрофлора человека является основой его микроэкологии и оказывает непосредственное влияние на жизнедеятельность и состояние макроорганизма. Микробиоценоз открытых полостей макроорганизма - динамическая микроэкологическая система, компонентами которой является макроорганизм, его микрофлора (совокупность типичных для определенного биологического вида и конкретного биотопа ассоциаций микроорганизмов) и окружающая среда, характеризующаяся способностью к саморегуляции, которая является интегральной частью организма («дополнительным органом») хозяина и местного иммунитета, в частности, и выполняет или регулирует многочисленные функции макроорганизма. Показатели состояния микробиоценозов отражают состояние реактивности макроорганизма - способность организма отвечать на воздействия внешней среды изменением своей жизнедеятельности, что обеспечивает его адаптацию к различным условиям обитания. Слизистые открытых полостей макроорганизма представляют собой единую систему. Состояние микробиоценоза и барьерной функции слизистых можно оценивать по выраженности колонизационной резистентности (КР) открытых полостей организма - физиологический феномен - способности микрофлоры и макроорганизма в кооперации защищать экосистему слизистых от патогенных микроорганизмов. КР включает комплекс местных факторов, к которым принадлежат ингибиторы микробной адгезии, биоцидные и биостатические продукты секретов, нормальную микрофлору, механические факторы (мерцательный эпителий, целостность кожи и слизистых), местные факторы врожденного и адаптивного иммунитета. К механизмам феномена КР относятся кожа и слизистые оболочки (формируют физический и экологический барьер для проникновения патологических агентов внутрь организма), движение мукоцилиарного эпителия, перистальтику кишечника, десквамацию мукозных клеток, антимикробный эффект секретов слюны, желчи, желудочного и кишечного содержимого, состав и количество муцина, напряженность кислорода по толщине биопленки, рН среды, скорость обновления мукозного эпителия [1, 2, 3, 4, 5].

В настоящее время накоплено достаточно большое количество информации о роли качественных и количественных изменений микрофлоры открытых полостей организма человека в развитии инфекционно-воспалительных процессов.

Так, начало большинства бронхолегочных заболеваний связано с развитием патологических процессов в слизистой оболочке верхних дыхательных путей и ротоглотке, которая в норме задерживает и элиминирует около 70% поступающего извне инертного и агрессивного антигенного материала. Инициация любого инфекционно-воспалительного процесса зависит от соотношения уровней индигенных и условно-патогенных микроорганизмов, формирующих данный биотоп. (6, 7). Количественные и качественные нарушения в составе микробных симбионтов десневой жидкости, нарушения их взаимодействия с макроорганизмом обуславливают развитие пародонтита (8).

Возбудители урогенитального хламидиоза и уреаплазмоза - облигатные внутриклеточные паразиты, не являющиеся патогенами, но на фоне растущей урбанизации, ухудшения социально-демографической и экологической ситуации, способны вызывать различные осложнения, оказывающие неблагоприятное воздействие как на общее состояние здоровья, так и на репродуктивную функцию. Их патогенный потенциал зависит от концентрации в организме, наличия или отсутствия определенных генов патогенности, состояния микробиоценоза биотопа, ассоциации с другими патогенными бактериями и вирусами, изменения физиологического и иммунного статуса. (9, 10).

К сожалению, до настоящего времени большинство микроэкологических исследований проводились без учета факторов местной и организменной резистентности. Вместе с тем, формирование КР слизистых, течение инфекционно-воспалительных реакций репираторного, урогенитального и желудочно-кишечного трактов определяется как индигенной микрофлорой, так и факторами местной иммунной защиты.

Известен способ оценки биоценоза полового тракта у пациенток, заключающийся в определении лизоцимной активности влагалища, pH влагалища, флоры с подсчетом общего микробного числа (методом посева на кровяной агар) (патент RU №2179849, 2002.02.27, A61K 31/19, 35/74).

Недостатками способа являются:

- невозможность проведения комплексной оценки состояния микробиоценоза влагалища с учетом количественных показателей содержания факультативно-анаэробной и облигатно-анаэробной микрофлоры в отделяемом и в соскобе из влагалища в сочетании с определением компонентов гуморальной резистентности и барьерной функции слизистой оболочки влагалища;

- недостаточная информативность лабораторного обследования для прогнозирования, оценки эффективности и стабильности коррекции состояния микробиоценоза влагалища.

Известен способ оценки микроэкологии влагалища при диагностике вагинальных инфекций, заключающийся в исключении инфекций, передаваемых половым путем, микроскопии вагинального мазка, окрашенного по Граму, и посеве вагинального отделяемого на факультативно анаэробную группу микроорганизмов и микроаэрофилы. На основании микробиологических критериев оценки состояния микроэкологии влагалища диагностируют нормоценоз, бактериальный вагиноз, вагинальный кандидоз, неспецифический вагинит, цитолитический вагиноз, атрофический кольпит или промежуточный вариант микроценоза (11).

Недостатками способа являются:

- невозможность проведения комплексной оценки состояния микробиоценоза влагалища при одновременном исследовании количественных показателей содержания факультативно-анаэробной и облигатно-анаэробной микрофлоры в отделяемом и в соскобе из влагалища в сочетании с определением компонентов гуморальной резистентности и барьерной функции слизистой оболочки влагалища;

- недостаточная информативность лабораторного обследования для прогнозирования, оценки эффективности и стабильности коррекции состояния микробиоценоза влагалища.

Известен способ оценки микробиоценоза полости матки у женщин с полипами эндометрия в постменопаузальном периоде путем определения количественного и качественного состава микрофлоры и количественной оценки показателей локального гуморального иммунитета, включающий взятие соскобного материала из полости матки, проведение посева соскобного материала для выявления видов микроорганизмов условно-патогенной факультативно-анаэробной и облигатно-анаэробной микрофлоры и их чувствительности к антибиотикам, введение в полость матки раствора реополиглюкина, определение в аспирате концентрации иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA, свободного, секреторного компонента (sc) и секреторного иммуноглобулина А (sIgA) методом радиальной иммунодиффузии по Манчини и оценку микробиоценоза: нормоценоз полости матки на фоне атрофии эндометрия при отсутствии условно-патогенной факультативно-анаэробной и условно-патогенной облигатно-анаэробной микрофлоры и определенной концентрации иммуноглобулинов; нарушение микробиоценоза при определенном содержании условно-патогенной факультативно-анаэробной и условно-патогенной облигатно-анаэробной микрофлоры и при определенной концентрации иммуноглобулинов. Вышеописанный способ позволяет повысить эффективность диагностики (патент РФ №2430365).

Известен способ диагностики хронического урогенитального хламидиоза (патент РФ №2327995), при котором определяют в соскобном материале из уретры с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени уровни экспрессии толл-подобных рецепторов: TL-рецептора-2 и TL-рецептора-4 и диагностируют хронический урогенитальный хламидиоз при уровнях экспрессии в соскобном материале из уретры TL-рецептора-2 не более 5 единиц и TL-рецептора-4 не более 5 единиц. Уровни экспрессии TL-рецептора-2 и TL-рецептора-4 определяли с использованием рекомендаций по проведению полимеразной цепной реакции в реальном времени (Абрамов Д.Д., Трофимов Д.Ю., Ребриков Д.В. Точность методов полимеразной цепной реакции «в реальном времени» при определении содержания генетически модифицированных источников в пищевых продуктах // Прикладная биохимия и микробиология. - 2006. - Т. 42, №4. - С. 485-488; RU патент 2294532 C1, G01N 21/64).

Данный способ оценивает один из факторов мукозального иммунитета - врожденный иммунитет.

Задачей изобретения является разработка способа оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов.

Задача решается таким образом, что при установленном патогенетическом факторе проводят регистрацию степеней нарушения микробиоценоза конкретного биотопа слизистых открытых полостей различной локализации с использованием комплекса методов оценки уровней факторов колонизационной резистентности как интегрирующей составляющей мукозального иммунитета в мазках и соскобном материале со слизистых (нормальной микрофлоры, условно-патогенной микрофлоры, нейтрофилов, цитокинов, иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA, sIgA и sc компонента и TLR-рецепторов) и в зависимости от степени нарушения микробиоценоза оценивают:

- хорошее состояние мукозального иммунитета при второй и третьей степенях нарушения микробиоценозов и прогнозируют благоприятный исход заболевания с эрадикацией возбудителя;

- нарушение мукозального иммунитета при нормоценозе и первой степени нарушения микробиоценозов и прогнозируют хроническое течение инфекционно-воспалительного процесса с персистированием возбудителя.

Под местным (мукозальным) иммунитетом подразумевается комплекс клеточных и секреторных неспецифических и специфических реакций, включающий барьерные функции клеток кожи и слизистых оболочек, фагоцитарную активность нейтрофилов и макрофагов, Т-клеточный иммунитет, антитела, антимикробные белки внешних секретов, ингибиторы ферментов, цитокины. Местный иммунитет не отождествляется с секреторным иммунитетом, но в качестве его центрального звена рассматривается В-клеточный ответ лимфоидной ткани слизистых оболочек с участием железистого эпителия, поставляющего секреторный компонент. Понятие местного иммунитета в настоящее время включает совокупность реагирования всех клеток лимфоидного ряда, заселяющих слизистые оболочки, в кооперации с макрофагами, нейтрофильными и эозинофильными гранулоцитами, тучными клетками и другими клетками соединительной ткани и эпителия [3, 12, 13, 14, 15, 16, 17]. Следовательно, микробиоценозы слизистых открытых полостей и мукозальный иммунитет можно рассматривать как интегральную структурно-функциональную систему организма.

В связи с вышесказанным и на основании проведенных комплексных исследований представляется актуальным выявление взаимосвязи характеристик микробиоценозов и факторов мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации в норме и при инфекционной патологии.

Любой инфекционный процесс в слизистой оболочке, независимо от этиологии, развивается по одному и тому же сценарию. Первый этап - это адгезия микробов в пристеночном муцине или на эпителиальных клетках, которая обеспечивается специальными структурами возбудителя. Закрепившись, микроорганизмы начинают размножаться, что приводит к патологической колонизации слизистой - это второй этап инфекционного процесса (дисбактериоз). Следующий, третий этап инфекционного процесса - это инвазия микроорганизмов, когда они преодолевают защитный барьер слизистой оболочки и проникают в эпителиальные клетки или подлежащую ткань, вызывая при этом местную иммунную реакцию (колит, вагинит, фарингит и др.). При преодолении местного защитного барьера возможна генерализация инфекции. Патогенность отдельных видов бактерий зависит от наличия или отсутствия представителей других видов. Поэтому при оценке микробиоценозов слизистых необходимо учитывать количество и видовой состав как микроорганизмов, свободно располагающихся в просвете, так и адгезированных к эпителиальным поверхностям (пристеночная область).

Известно, что система антиинфекционной резистентности организма определяется качественным и количественным составом биопленки, формируемой индигенной микрофлорой, а также патогенными микроорганизмами на эпителиальных поверхностях, местной и организменной антиинфекционной резистеностью хозяина. Ключевым звеном в распознании макроорганизмом патогенов являются TL-рецепторы (TLR), составляющие основу мембранных комплексов и экспрессирующихся на всех клеточных элементах, участвующих в формировании резистентности (включая КР макроорганизма), в том числе и на поверхности слизистых.

TLR способны распознавать консервативные молекулярные структуры, распространенные среди определенного класса микроорганизмов и отсутствующие у человека. Антиинфекционная защита на местном уровне развивается путем формирования типичной воспалительной реакции после взаимодействия патогенов с TLR, что сопровождается активацией генов цитокинового каскада, ответственного за активацию фагоцитов и других иммунокомпетентных клеток, Ig, что, в свою очередь, определяет уровень мукозальной КР и, в дальнейшем, блокирование жизнедеятельности, дезинтеграцию и удаление инфекционного агента из организма.

Так, при изучении нами урогенитальных хламидиоза и уреаплазмоза, острых инфекционных заболеваний верхних дыхательных путей, в том числе острых и хронических бронхитов, была установлена взаимосвязь толл-подобных рецепторов - TLR (контролируют запуск цитокинового каскада местной антиинфекционной резистентности, через который запускаются иммуноглобулиновое звено и воспалительная реакция) с микрофлорой биотопа, определяющей колонизационную резистентность слизистых, характеризующей течение инфекционного процесса, выраженность клинических и лабораторных проявлений и исход заболевания (излечение, хронизация). Колонизационная резистетность выступает как неотъемлемая часть мукозального иммунитета.

Функцию TLR оценивали оригинальным запатентованным методом определения уровня экспрессии генов (TLR) полимеразной цепной реакцией (ПЦР) в реальном времени с обратной транскрипцией, с использованием специфических праймеров (RU патент 2294532). Установлено, что патогены и условно-патогенные микроорганизмы (УПМ), попадая на слизистые открытых полостей, взаимодействуют с TLR эпителиальных клеток и запускают через активизацию цитокиновой системы воспалительную реакцию. TLR-2 и TLR-4 реагируют на бактериальные патогены, a TLR-3 и TLR-8 - на вирусные. При взаимодействии возбудителя с чувствительными для него клеточными элементами слизистых TLR клеток отвечают экспрессией генов на патоген и УПМ, а при взаимодействии возбудителя с нечувствительными для него клетками эпителия слизистых - только на УПМ. При остром и хроническом инфекционных процессах ведущими этиологическими факторами инфекционного процесса являются ассоциации из бактериальных и вирусных патогенов, а также УПМ. Различные уровни активации экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 зависят от качественного состава микробных сообществ (в частности от превалирования грамположительных или грамотрицательных возбудителей или вирусных патогенов), присутствующих на слизистых оболочках открытых полостей организма. Активация экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 происходит более выражение в ответ на патогены и УПМ и менее выражение - на нормофлору. Показатели уровней обсемененности УПМ прямо коррелируют с показателями уровней экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8. Уровни экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 служат критериями оценки выраженности воспалительного процессса. Повышение экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 коррелирует с тяжестью клинических проявлений, а при выздоровлении их снижение свидетельствует об эрадикации возбудителя. Естественная или приобретенная супрессия генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 обусловливает хроническое течение инфекции. При остром инфекционном процессе выявление низких уровней TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 указывает на начало хронизации инфекционного процесса. Предложенный метод оценки TLR можно рассматривать как дополнительный лабораторный тест, уточняющий клинические формы и прогнозирующий исход заболевания.

При инфекционных поражениях открытых полостей организма родовой и видовой состав микроорганизмов патогенов и УПМ, выделенных от больных, может служить дополнительным объективным критерием тяжести течения инфекционного процесса, а также позволяет дифференцирование судить об эффективности проводимой антибактериальной терапии и вносить в нее необходимые коррективы. Острое течение инфекционного процесса сопровождается достоверным снижением уровней индигенной микрофлоры в пристеночном и просветном биотопах слизистых, повышенной колонизацией их УПМ, многократным повышением уровней экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8, цитокинов IL-1β, IL-8, INF-γ, TNF-α, иммуноглобулинов IgG, IgA, sIgA, IgM и SC и выраженностью местной воспалительной реакции (выявлена достоверная корреляционная зависимость между изменениями уровней перечисленных факторов), что свидетельствует о хорошей местной антиинфекционной резистентности. Хроническое течение инфекционного процесса, по сравнению с острым течением, сопровождается при обострении менее выраженным достоверным снижением уровней индигенной микрофлоры в пристеночном и просветном биотопах слизистых, повышением УПМ, повышением уровней экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8, цитокинов IL-1β, IL-8, INF-γ, TNF-α, иммуноглобулинов IgG, IgA, sIgA, IgM и SC и слабо выраженной местной воспалительной реакцией, что свидетельствует о нарушении и снижении мукозальной антиинфекционной резистентности.

С учетом приведенных выше сведений и положений для оценки колонизационной резистетности слизистых открытых полостей организма была предложена оригинальная методология оценки нарушений их микробиоценозов.

Оценка выраженности нарушений микробиоценоза влагалища (табл.1):

- нормоценоз влагалища (Вл) определяется при наличии на поверхности эпителиоцитов менее 25 бактериальных клеток, представленных грамположительными палочками, при количестве лейкоцитов менее 10 в поле зрения, при отсутствии ключевых клеток (I степень чистоты мазка), при содержании в отделяемом 6-8 lg КОЕ/г лактобацилл, при содержании в соскобном материале 7-10 lg КОЕ/г лактобацилл, при отсутствии в отделяемом и в соскобном материале условно-патогенной факультативно-анаэробной и облигатно-анаэробной микрофлоры и при концентрации в смыве IgA 0 мкг/мл, sIgA ≤10 мкг/мл, IgM 0 мкг/мл, SC ≤10 мкг/мл;

- промежуточный тип микробиоценоза Вл при наличии на поверхности эпителиоцитов 25-50 бактериальных клеток, представленных грамположительными палочками, единичными грамположительными кокками и грамотрицательными палочками, при количестве лейкоцитов 10-20 в поле зрения, при отсутствии ключевых клеток (II степень чистоты мазка), при содержании в отделяемом 4-5 lg КОЕ/г лактобацилл, 3-4 lg КОЕ/г условно-патогенной факультативно-анаэробной или облигатно-анаэробной микрофлоры и/или при содержании в соскобном материале 5-6 lg КОЕ/г лактобацилл, 1-2 lg КОЕ/г условно-патогенной факультативно-анаэробной или облигатно-анаэробной микрофлоры и при концентрации в смыве IgA≤10 мкг/мл, sIgA 11-15 мкг/мл, IgM≤10 мкг/мл, SC 10-25 мкг/мл;

- дисбиоз Вл при наличии на поверхности эпителиоцитов 50-100 бактериальных клеток, представленных грамположительными палочками, грамположительными кокками и грамотрицательными палочками, при количестве лейкоцитов 20-40 в поле зрения, при наличии ключевых клеток менее 5 в поле зрения (III степень чистоты мазка), при содержании в отделяемом 1-3 lg КОЕ/г лактобацилл, 5-7 lg КОЕ/г условно-патогенной факультативно-анаэробной микрофлоры и 3-4 lg КОЕ/г условно-патогенной облигатно-анаэробной микрофлоры и/или при содержании в соскобном материале 3-4 lg КОЕ/г лактобацилл, 3-4 lg КОЕ/г условно-патогенной факультативно-анаэробной микрофлоры и 5-7 lg КОЕ/г условно-патогенной облигатно-анаэробной микрофлоры и при концентрации в смыве IgA 11-15 мкг/мл, sIgA 16-30 мкг/мл, IgM 11-20 мкг/мл, SC 26-50 мкг/мл;

- бактериальный вагинит при наличии на поверхности эпителиоцитов не менее 100 бактериальных клеток, представленных единичными грамположительными палочками и обильной грамотрицательной и грамположительной палочковой и кокковой флорой, при количестве лейкоцитов не менее 40 в поле зрения, при количестве ключевых клеток не менее 5 в поле зрения (IV степень чистоты мазка), при отсутствии в отделяемом лактобацилл, при содержании в отделяемом 5-6 lg КОЕ/г монокультуры условно-патогенной факультативно-анаэробной или облигатно-анаэробной микрофлоры и/или при содержании в соскобном материале 1-3 lg КОЕ/г лактобацилл, 6-8 lg КОЕ/г монокультуры условно-патогенной факультативно-анаэробной или облигатно-анаэробной микрофлоры и при концентрации в смыве IgA>15 мкг/мл, sIgA>30 мкг/мл, IgM>20 мкг/мл, SC>50 мкг/мл.

Оценка выраженности нарушений микробиоценоза цервикального канала (табл. 2):

- нормоценоз микробиоценоза цервикального канала (Цк) определяется при количестве лейкоцитов<4 в поле зрения, при содержании в соскобном материале 1-2 lg КОЕ/г УПМ и при концентрации в смыве IgG≤8 мкг/г белка, sIgA≤7 мкг/г белка, SC≤8 мкг/г белка;

- промежуточный тип микробиоценоза Цк определяется при количестве лейкоцитов 8-10 в поле зрения, при содержании в соскобном материале 2-3 lg КОЕ/г УПМ и при концентрации в смыве IgG 10-13 мкг/г белка, sIgA 11-14 мкг/г белка, SC 13-19 мкг/г белка;

- дисбиоз микробиоценоза Цк определяется при количестве лейкоцитов 14-40 в поле зрения, при содержании в соскобном материале 3-4 lg КОЕ/г УПМ и при концентрации в смыве IgG 30-40 мкг/г белка, sIgA 20-30 мкг/г белка, SC 30-40 мкг/г белка;

- бактериальный вагинит микробиоценоза Цк определяется при количестве лейкоцитов >40 в поле зрения, при содержании в соскобном материале >4 lg КОЕ/г УПМ и при концентрации в смыве IgG>40 мкг/г белка, sIgA>30 мкг/г белка, SC>40 мкг/г белка.

Оценка выраженности нарушений микробиоценоза ротоглотки (табл. 3):

- нормоценоз, характеризующийся отсутствием микроэкологических нарушений, присутствием индигенной микрофлоры: Streptococcus spp. в количестве 5-6 lg КОЕ/г, Neisseria spp.- 4-6 lg КОЕ/г при концентрации в слюне IgA<20 мкг/мл, sIgA<20 мкг/мл, IgM 0 мкг/мл, IgG<50 мкг/мл, SC<50 мкг/мл;

- промежуточный тип (I степень дисбиотических нарушений), характеризующийся нарастанием нормофлоры {Streptococcus spp.- до 6-7 lg КОЕ/г, Neisseria spp.- 6-7 lg КОЕ/г) и появлением УПМ в количестве до 3-4 lg КОЕ/г при концентрации в слюне IgA 20-50 мкг/мл, sIgA 20-50 мкг/мл, IgM<10 мкг/мл, IgG 50-100 мкг/мл, SC 50-100 мкг/мл;

- дисбиоз (II степень дисбиотических нарушений) ротоглотки, при котором наблюдается повышение количества нормофлоры {Streptococcus spp.- 6-7 lg КОЕ/г, Neisseria spp.- 6-7 lg КОЕ/г), повышение уровня факультативно-анаэробной УПМ до 4-5 lg КОЕ/мл, появление вирулентных вариантов УПМ, характеризующихся выраженными факторами патогенности, при концентрации в слюне IgA 50-100 мкг/мл, sIgA 50-100 мкг/мл, IgM 10-30 мкг/мл, IgG 100-200 мкг/мл, SC 100-200 мкг/мл;

- выраженный воспалительный процесс (III степень дисбиотических нарушений), характеризующийся значительным повышением содержания Streptococcus spp.- 7-8 lg КОЕ/г, Neisseria spp.- 7-8 lg КОЕ/г, УПМ и количества вирулентных микроорганизмов до 6-8 lg КОЕ/мл при концентрации в слюне IgA>100 мкг/мл, sIgA>100 мкг/мл, IgM>30 мкг/мл, IgG>200 мкг/мл, SC>200 мкг/мл.

Оценка выраженности нарушений микробиоценоза кишечника (табл.4):

- нормоценоз: содержание кишечной палочки ≥8 lg КОЕ/г, лактобацилл ≥7 lg КОЕ/г, бифидобактерий ≥9 lg КОЕ/г, отсутствие УПМ при содержании в копрофильтратах IgA <10 мкг/мл, sIgA <10 мкг/мл, IgM 0 мкг/мл, IgG <10 мкг/мл, SC <10 мкг/мл;

- I степень дисбактериоза кишечника характеризуется повышенным или пониженным содержанием кишечной палочки (≥ или ≤8 lg КОЕ/г), снижением содержания лактобацилл (≤6 lg КОЕ/г) и бифидобактерий (≤9 lg КОЕ/г) при содержании в копрофильтратах IgA ≤10 мкг/мл, sIgA ≤10 мкг/мл, IgM ≤5 мкг/мл, IgG 10-20 мкг/мл, SC≤10 мкг/мл;

- II степень дисбактериоза кишечника характеризуется сниженным содержанием кишечной палочки (≤8 lg КОЕ/г), лактобацилл (≤6 lg КОЕ/г) и бифидобактерий (≤8 lg КОЕ/г), появлением УПМ в количестве ≥4 lg КОЕ/г, при содержании в копрофильтратах IgA 10-20 мкг/мл, sIgA 10-20 мкг/мл, IgM 5-10 мкг/мл, IgG 20-40 мкг/мл, SC 10-20 мкг/мл;

- Ill степень дисбактериоза кишечника характеризуется значительным снижением содержания кишечной палочки с неизмененными ферментативными свойствами (≤6 lg КОЕ/г), появлением слабоферментирующей и/или гемолизирующей кишечной палочки (≥4 lg КОЕ/г), значительным содержанием лактозонегативных энтеробактерий, грамотрицательных, глюкозу неферментирующих бактерий, кокковой флоры (≥6 lg КОЕ/г), резким снижением содержания лактобацилл и бифидобактерий ≤5 lg КОЕ/г и ≤7 lg КОЕ/г, соответственно, при содержании в копрофильтратах IgA >20 мкг/мл, sIgA >20 мкг/мл, IgM >10 мкг/мл, IgG >40 мкг/мл, SC >20 мкг/мл.

Следующие примеры подтверждают использование заявляемого способа оценки состояния музального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов.

Пример 1.

Обследовано 30 клинически здоровых детей и 77 детей с острыми и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта в возрасте 3-14 лет. Дети были поделены на 3 группы: 1 группа - контрольная (30 клинически здоровых детей), 2 группа - больные с острым бронхитом (51 ребенок), 3 группа - больные с хроническим бронхитом (15 человек). Частота инфицирования аденовирусами была достоверно выше при остром бронхите по сравнению с хроническим бронхитом и клинически здоровыми пациентами. Различия в обсемененности слизистой задней стенки глотки индигенными микроорганизмами в контрольной группе и больных бронхитами детей не достоверны как по количественному содержанию, так и по частоте встречаемости, однако, у больных детей они превышали показатели нормоценоза (табл.5). Это свидетельствует о компенсированной форме дисбиотических нарушений в верхних дыхательных путях. Выявлены достоверные различия по частоте инфицирования S. aureus и грибами рода Candida при остром бронхите по сравнению с хроническим бронхитом и клинически здоровыми пациентами. Интенсивность колонизации задней стенки глотки условно-патогенными микроорганизмами (УПМ) достоверно выше при остром бронхите, а при хроническом бронхите изменения не достоверны по сравнению с клинически здоровыми пациентами. Выявление в слюне повышенных уровней общего IgE при остром и хроническом бронхитах указывает на активизацию и количественное повышение инфекционного компонента. У клинически здоровых детей нормоценоз регистрировался у 48,1% пациентов, промежуточный тип - у 44,4%, дисбиоз - у 7,4% пациентов, что достоверно отличалось от показателей при остром бронхите: нормоценоз - у 21,6% пациентов при p<0,05, промежуточный тип - у 11,8% пациентов при p<0,01, дисбиоз - у 35,3% пациентов при p<0,05, выраженный воспалительный процесс - у 31,4% пациентов при p<0,01; при хроническом бронхите нормоценоз - у 20,0% пациентов при p<0,05, промежуточный тип - у 20,0% пациентов при p<0,01, диебиоз - у 33,3% пациентов при p<0,05, выраженный воспалительный процесс - у 26,7% пациентов при p<0,01; достоверных различий между острым и хроническим бронхитом не выявлено. Следовательно, при остром бронхите нарушения микробиоценоза слизистых сдвигаются в сторону дисбиоза и выраженного воспалительного процесса. Однако высокие уровни нормофлоры в сочетании с высокими уровнями Ig обеспечивают выраженную КР, что подтверждается и высокими показателями индекса естественной колонизации назофаригеального эпителия (ИЕКНЭ). Высеваемость УПМ в титре 6 Ig КОЕ/г и выше может свидетельствовать о приобретении ею фенотипических маркеров вирулентности.

Примечания: ИЕКНЕ - индекс естественной колонизации назофарингеального эпителия.

При остром бронхите в ответ на выраженное бактериально-вирусное воздействие исследованные TLR отреагировали достоверным пятикратным повышением экспрессии генов по сравнению с хроническим бронхитом и контрольной группой. Причем, проявилась специализация TLR: TLR-2 и TLR-4 реагировали, в основном на бактериальные патогенны, а TLR-3 и TLR-8 - на вирусные патогенны. Наиболее высокие значения экспрессии генов имели место при микст инфекции, что объясняется, в определенной степени, перекрестным действием лигандов. При хроническом бронхите уровни экспрессии генов TLR в основном не отличались от контрольной группы.

При остром бронхите в ответ на достоверно высокую инфекционную нагрузку (в виде микстинфекции вирусными патогенами и УПМ) повышаются уровни экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3 и TLR-8, запускающие в верхних дыхательных путях продукцию провоспалительных цитокинов IL-8, TNF-α и IL-1β, приводящих, в свою очередь, к увеличению содержания иммуноглобулинов, что можно расценивать как выраженную местную воспалительную иммунологическую реакцию макроорганизма, отражающую остроту инфекционного процесса и способствующую локализации инфекционного процесса, а также к стимуляции продукции дополнительных цитокинов соседними неинфицированными клетками. В ротоглотке нарастание уровней иммуноглобулинов, sIgA и sc обусловлено их синтезом in situ. Уровни экспрессии TLR прямо коррелируют с показателями уровней sIgA и лизоцима, что свидетельствует об их взаимосвязи как компонентов колонизационной резистентности, отражающих состояние врожденного иммунитета, и не коррелируют с повышенными показателями индекса ИЕКНЕ что свидетельствует о низкой адгезивной способности эпителия ротоглотки в отношениии УПМ. Все вместе указывает на высокий уровень колонизационной резистентности как показателя мукозального иммунитета. Отсутствует связь между TLR и IgE. При хроническом бронхите в ответ на слабую инфекционную нагрузку (в виде микстинфекции вирусными патогенами и УПМ) уровни экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 не повышаются; не выявляется прямая корреляционная связь со сниженными, по сравнению с таковыми при остром бронхите, показателями уровней цитокинов, IgM, sIgA; регистрируется хронический, вялотекущий воспалительный процесс. Уровни экспрессии TLR практически прямо не коррелируют с показателями уровней sIgA и лизоцима; коррелируют с повышенными показателями индекса ИЕКНЕ, что может способствовать повышению адгезии УПМ на клетках эпителия. Все вместе обусловливает нарушение колонизационной резистентности как показателя мукозального иммунитета, способствует прогрессирующему характеру течения инфекционного процесса и дисбалансу в процессах деструкции и репарации, сопутствующих воспалению. Отсутствует связь между TLR и IgE.

При остром и хроническом бронхитах взаимосвязь рецепторов врожденного иммунитета TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 (контролируют запуск цитокинового каскада местной антиинфекционной резистентности, через который запускаются иммуноглобулиновое звено и воспалительная реакция) с микрофлорой биотопа определяет КР слизистых, характеризует течение инфекционного процесса, выраженность клинических и лабораторных проявлений и исход заболевания (излечение, хронизация). Установлена достоверная взаимосвязь TLR с другими факторами врожденного иммунитета лизоцимом, ИЕКНЕ, sIgA и sc. Уровни IgE независимы от TLR. Пятикратное повышение уровней экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 и цитокинов IL-1β, IL-8, INF-γ, TNF-α свидетельствует о хорошей местной антиинфекционной резистентности, а отсутствие повышения указывает на ее нарушение и хроническое течение заболевания (носит диагностический и прогностический характер).

Достоверное повышение медианы экспрессии гена TLR-2 регистрировалось только при остром бронхите и при микст-инфекции по сравнению с хроническим бронхитом и контрольной группой при p<0,0001. Медиана экспрессии гена TLR-4 при остром бронхите достоверно ниже при инфицировании УПМ при сопоставлении с хроническим бронхитом (p<0,0001), достоверно выше при микст инфекции при сопоставлении с хроническим бронхитом и контрольной группой (p<0,0001), а без инфицирования достоверно выше в контрольной группе по сравнению с хроническим бронхитом (p=0,007).

Медиана экспрессии гена TLR-3 при остром бронхите достоверно выше при сопоставлении с хроническим бронхитом (p<0,006) при инфицировании вирусными патогенами и при микст инфекции (p<0,0001). Медиана экспрессии гена TLR-8 при остром бронхите достоверно выше при сопоставлении с хроническим бронхитом (p<0,006) при микст инфекции (p<0,0001); при хроническом бронхите она выше таковой при остром бронхите при инфицировании вирусными патогенами (p<0,0001), а без инфицирования достоверно выше по сравнению с контрольной группой (p=0,001). Следовательно, при остром бронхите в ответ на выраженное бактериально-вирусное воздействие исследованные TLR отреагировали достоверным повышением экспрессии генов по сравнению с хроническим бронхитом и контрольной группой. Причем, проявилась специализация TLR:

TLR-2 и TLR-4 реагировали, в основном на бактериальные патогенны, а TLR-3 и TLR-8- на вирусные патогенны. Наиболее высокие значения экспрессии генов имели место при микст-инфекции, что объясняется, в определенной степени, перекрестным действием лигандов. При хроническом бронхите уровни экспрессии генов TLR в основном не отличались от контрольной группы (Табл.6.)

Таким образом, при верифицированном патогенитеческом агенте третья степень нарушения микробиоценоза ротоглотки - выраженный воспалительный процесс отражает выраженную воспалительную реакцию при бронхитах и свидетельствует о полноценности мукозального иммунитета; вторая степень нарушения микробиоценоза ротоглотки - биоценоз является промежуточной между первой и третьей степенями и указывает на нормально протекающую реакцию мукозального иммунитета; первая степень нарушения микробиоценоза ротоглотки - промежуточный тип свидетельствует о нарушении мукозального иммунитета.

Пример 2.

Клинико-анамнестические и лабораторные данные 228 больных с урогенитальным хламидиозом (УГХ) позволили отобрать 100 пациенток, которые были разбиты на 3 группы. Группу I составила 41 пациентка - первично инфицированные больные в острой стадии инфекционного процесса. Группу II составляли 29 пациенток с хроническим течением хламидийной инфекции. В III (группа сравнения) вошли 30 пациенток - ранее переболевшие (с давно перенесенной хламидийной инфекцией). Контролем служили 32 клинически здоровые женщины (группа IV, контрольная, группа сравнения).

УПМ во влагалище (Вл) при остром урогенитальном хламидиозе (УГХ) определялись в количестве 8,1±0,4 lg КОЕ/мл, при обострении хронического УГХ - 4,6±1,0 lg КОЕ/мл, у переболевших - 2,5±1,2 lg КОЕ/мл, у клинически здоровых пациентов - 2,74±0,94 lg КОЕ/мл. Уровни выявления УПМ при остром УГХ отличались (при p<0,05) от таковых других сравниваемых групп пациентов. По частоте выявляемое™ УПМ во Вл достоверные различия выявлены между I и II (p<0,01), I и III (p<0,001), I и IV (p<0,001), II и III (p<0,01), II и IV (p<0,001), III и IV группами (p<0,01), а между группами I и II различия не достоверны. Чем выраженное патологический процесс, тем шире набор микроорганизмов и в более высоких титрах они высеваются. Косвенным свидетельством приобретения патогенных свойств УПМ может быть выделение из Вл штаммов облигатных анаэробов при остром УГХ в титре 7 lg КОЕ/г, а при обострении хронического УГХ в титре 5 lg КОЕ/г. В I группе у 43,9% пациенток выявлен бактериальный вагинит и у 56,1% - дисбиоз, во II группе у 27,5% пациенток - бактериальный вагинит и у 72,4% - дисбиоз, в III и IV группе у всех пациенток -нормоценоз. УПМ в цервикальном канале (Цк) в группе I определялись в количестве 3,70±1,56 lg КОЕ/мл, в группе II - 3,80±0,27 lg КОЕ/мл, в группе III - 1,36±0,37 lg КОЕ/мл, в группе IV - 1,94±0,73 lg КОЕ/мл. По частоте выявляемости УПМ в Цк различия выявлены между I и III (p<0,01), I и IV (p<0.001), II и IV (p<0,001), III и IV (p<0,01) группами, а между I и II, II и III группами различия не достоверны. В I группе у 19,51% пациенток регистрировался бактериальный цервицит и у 80,48% - дисбиоз, во II группе у 13,79% пациенток - бактериальный цервицит, у 51,7% - дисбиоз и у 34,48% - промежуточный тип, в III и IV группа у всех пациенток - нормоценоз. Косвенным свидетельством приобретения патогенных свойств УПМ может быть выделение из Цк штаммов облигатных анаэробов в титре 4 lg КОЕ/г. УПМ в уретре (Ур) в группе I определялись в количестве 4,20±0,51 lg КОЕ/мл, в группе II - 2,3±0,5 lg КОЕ/мл, в группе III - 2,50±0,83 lg КОЕ/мл, в группе IV - 1,32±0,37 lg КОЕ/мл. По частоте выявляемости УПМ в Ур достоверные различия выявлены между I и IV (p<0,001), II и III (p<0,01), II и IV группами (p<0,001), а между группами I и II, I и III, III и IV различия не достоверны. Косвенным свидетельством приобретения патогенных свойств УПМ может быть выделение из Ур штаммов факультативных анаэробов или облигатных анаэробов в титре 4 lg КОЕ/г.

При УГХ показатели уровней обсемененности УПМ Цк, Ур и Вл прямо коррелируют с показателями уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4. Повышение экспрессии генов TLR-2 и TLR-4, как в Цк, так и в Ур, коррелирует с тяжестью клинических проявлений, зависящей как от хламидий, так и от ассоциантов (возбудителей инфекций передаваемых половым путем - ИППП и УПМ). Во Вл имеет место экспрессия генов TLR-2 и TLR-4 в ответ на УПМ, а в Цк и Ур - на УПМ и возбудителей ИППП. Активация экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 происходит более выражение в ответ на УПМ и менее выражение при контакте с нормофлорой. Впервые установлена определяющая роль TLR-2 и TLR-4 слизистых УГТ в ответе макроорганизма на инфицирование хламидиями и УПМ при УГХ. Уровни экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 служат критериями оценки выраженности УГХ и наличия воспалительного процесса у больных, а при выздоровлении их снижение может свидетельствовать об эрадикации возбудителя. При УГХ выявление в соскобном материале из Ур уровней экспрессии генов TLR-2 более 14 ОЕ и TLR-4 более 10 ОЕ, а в соскобном материале из Цк TLR-2 более 19 ОЕ и TLR-4 более 14 ОЕ указывает на острый УГХ;

выявление в соскобном материале из Ур уровней экспрессии генов TLR-2 не более 5 ОЕ и TLR-4 не более 5 ОЕ, а в соскобном материале из Цк TLR-2 не более 6 ОЕ и TLR-4 не более 9 ОЕ указывает на хронический УГХ или начало хронизации инфекционного процесса. Однотипные изменения показателей уровня экспрессии TLR-2 и TLR-4 в Цк и Ур пациенток с хронической формой хламидиоза указывают на развитие "феномена рецепторной депрессии", сопровождающегося дисбалансом между развитием инфекционного процесса и воспалительной реакцией. Повышение уровня экспрессии mRNA TLR-2 и TLR-4 и активности локального синтеза цитокинов в ответ на хламидийную инфекцию способствует благоприятному исходу заболевания, а низкие уровни являются плохим прогностическим признаком.

При остром хламидиозе в ответ на высокую инфекционную нагрузку (хламидий в виде моно- или микстинфекции с возбудителями ИППП и/или с УПМ) повышаются уровни экспрессии генов TLR-2, TLR-4, запускающие в Цк выраженную продукцию IL-8, TNF-α и IL-1β, приводящих, в свою очередь, к увеличению содержания лейкоцитов, белка и Ig у пациенток, что можно расценивать как выраженную местную (преимущественно по клеточному типу) иммунологическую реакцию макроорганизма, отражающую остроту инфекционного процесса и способствующую развитию воспалительной реакции и локализации распространения инфекции за пределы шейки матки, а также стимуляции продукции дополнительных цитокинов соседними неинфицированными клетками. При хроническом хламидиозе сочетание сниженной экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 с подавлением активности локального синтеза IL-8, IL-6, TNF-α, относительно слабо выраженной лейкоцитарной реакцией, пониженными уровнями sIgA и sc, повышенным содержанием общего белка и IgG, обусловливает хронический, вялотекущий воспалительный процесс, способствует прогрессирующему характеру течения инфекционного процесса и свидетельствуют о дисфункции механизмов мукозального иммунитета Цк, дисбалансе в процессах деструкции и репарации, сопутствующих воспалению.

Таким образом, при верифицированном патогенитеческом агенте третья степень нарушения микробиоценоза слизистых урогенитального тракта - выраженный бактериальный вагинит (бактериальный цервицит) отражает выраженную воспалительную реакцию при урогенитальном хламидиозе и свидетельствует о полноценности мукозального иммунитета; вторая степень нарушения микробиоценоза ротоглотки - биоценоз является промежуточной между первой и третьей степенями и указывает на нормально протекающую реакцию мукозального иммунитета; первая степень нарушения микробиоценоза ротоглотки - промежуточный тип или нормоценоз свидетельствует о нарушении мукозального иммунитета.

Следующей задачей изобретения является разработка способа коррекции инфекционно-воспалительного процесса с учетом состояния мукозального иммунитета и прогноза течения инфекционно-воспалительного процесса.

Известен способ лечения инфекционных заболеваний (патент РФ №2146531), включающий применение антибиотиков и иммуномодуляторов, отличающийся тем, что при низком титре специфических антител в крови и с учетом принадлежности антител к классам иммуноглобулинов при подостром, стертом, инапарантном, медленном или хроническом течении инфекции ежедневно или через день применяют иммуномодулирующие средства в сочетании с пероральным и/или ректальным введением препаратов бифидумбактерина и/или ацилакта, затем при повышении титра антител в крови и с учетом принадлежности антител к классам иммуноглобулинов назначают в течение 5-14 дней антибиотикотерапию и в конце лечения повторно применяют иммуномодулирующие средства в сочетании с пероральным и/или ректальным введением препаратов бифидумбактерина и/или ацилакта.

Недостатки способа заключаются в том, что при назначении данной терапии учитывались только титры специфических антител в крови с учетом принадлежности антител к классам иммуноглобулинов при подостром, стертом, инапарантном, медленном или хроническом течении инфекции.

Задача решается таким образом, что больным с хорошим состоянием мукозального иммунитета, определенного в соответствии с заявленным способом оценки состояния мукозального иммунитета и с учетом прогноза течения инфекционно-воспалительного процесса в слизистых различной локализации назначают коррегирующую терапию с использованием общепринятых антибактериальных препаратов с подключением иммуномодулятора до момента излечения и исчезновения воспалительной реакции, а больным с нарушением мукозального иммунитета после первого курса упомянутой терапии повторно через месяц назначают второй аналогичный курс терапии до момента излечения и исчезновения воспалительной реакции.

Следующие примеры подтверждают эффективность использования заявляемого способа коррекции инфекционно-воспалительного процесса с учетом состояния мукозального иммунитета и прогноза течения инфекционно-воспалительного процесса.

Пример 1. У детей с острым и хроническим бронхитами верифицирована патогенетическая ассоциация из аденовирусов, S. aureus и грибов рода Candida. При этом при остром и хроническом бронхитах (стадия обострения), по сравнению с клинически здоровыми пациентами, достоверно чаще и с одинаковой частотой встречались вторая (дисбиоз - в 35,3% и 33,3% случаев, соответственно) и третья (выраженный воспалительный процесс - в 31,4% и 26,7% случаев, соответственно) степени дисбактериоза ротоглотки; при этом, при остром бронхите в сопоставлении с хроническим бронхитом выявлены более высокие уровни показателей экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета TLR и воспалительной реакции, что в совокупности свидетельствовало о высоком уровне мукозального иммунитета, наиболее выраженном при остром бронхите. Это подтвердилось эффективностью курса проведенного лечения с использованием общепринятой антибактериальной терапии с подключением иммунобиологического препарата Кипферон®: снижение показателей обсемененности вирусными патогенами, S. aureus и грибми рода Candida и отсутствие рецидива в течение полугода (срок наблюдения) у пациентов с острым бронхитом, а пациентам с хроническим бронхитом через месяц после первого курса терапии потребовалось проведение повторного курса для достижения указанного эффекта. В то же время при остром и хроническом бронхите у пациентов с нормоценозом - в 21,6% и 20,0% случаев, соответственно) и первой (промежуточный тип- в 11,8% и 20,0% случаев, соответственно) степенями дисбактериоза ротоглотки, сопровождающиеся достоверно более низкими уровнями показателей экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета TLR и воспалительной реакции и указывающими на нарушение мукозального иммунитета, потребовалось повторное применение курса терапии через месяц после первого для достижения лечебного эффекта - снижение показателей обсемененности вирусными патогенами, S. aureus и грибами рода Candida и отсутствие рецидива через полгода; у 11,8% пациентов с острым бронхитом и 66,7% пациентов с хроническим бронхитом через полгода выявлен рецидив заболевания. Во всех случаях выздоровление сопровождалось снижением уровней экспрессии генов TLR и выраженности воспалительной реакции на слизистых; сохранение выраженных экспрессии генов TLR и воспалительной реакции после первого курса терапии требовало его повторения.

Пример 2. При остром и хроническом (в стадии обострения) урогенитальном хламидиозе (УГХ) у пациентов в цервикальном канале верифицирована патогенетическая ассоциация из хламидий, возбудителей инфекций, передаваемых половым путем (ИППП) и условно-патогенной микрофлоры (УПМ). При этом при остром и хроническом УГХ, по сравнению с клинически здоровыми пациентами, достоверно чаще и с одинаковой частотой встречались вторая (дисбиоз - в 80,5% и 51,7% случаев, соответственно) и третья (цервицит - в 19,5% и 13,8% случаев, соответственно) степени дисбактериоза урогенитального тракта (УГТ); при этом, при остром УГХ в сопоставлении с хроническим УГХ выявлены более высокие уровни показателей рецепторов врожденного иммунитета TLR и воспалительной реакции, что в совокупности свидетельствовало о высоком уровне мукозального иммунитета, наиболее выраженном при остром УГХ. Это подтвердилось эффективностью курса проведенного лечения с использованием общепринятой антибактериальной терапии с подключением иммунобиологического препарата Кипферон®: регистрировалась эррадикация хламидий и рецидив не регистрировался в течение полугода (срок наблюдения) у пациентов с острым УГХ, а пациентам с хроническим УГХ через месяц после первого курса терапии потребовалось проведение второго курса для достижения указанного эффекта. В тоже время у пациентов с нормоценозом - (в 0% и 0% случаев,соответственно) и первой (промежуточный тип - в 80,5% и 51,7% случаев, соответственно) степенями дисбактериоза УГТ, сопровождающиеся достоверно более низкими уровнями показателей экспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета TLR и воспалительной реакции и указывающими на нарушение мукозального иммунитета, потребовалось повторное применение курса терапии через месяц после первого для достижения лечебного эффекта - эррадикация хламидий и отсутствие рецидива заболевания через полгода; у 0% пациентов с острым УГХ и 60% пациентов с хроническим УГХ через полгода выявлено обострение заболевания. Во всех случаях выздоровление сопровождалось снижением уровней экспрессии генов TLR и выраженности воспалительной реакции на слизистых; сохранение выраженных экспрессии генов TLR и воспалительной реакции после первого курса терапии требовало его повторения.

Пример 3. При остром уреаплазмозе у пациентов во влагалище верифицирована патогенетическая ассоциация из уреаплазм, возбудителей инфекций, передаваемых половым путем (ИППП) и условно-патогенной микрофлоры (УПМ). При этом при остром уреплазмозе, по сравнению с клинически здоровыми пациентами, достоверно чаще встречались вторая (дисбиоз - в 44,0% случаев) и третья (вагинит - в 46,0% случаев) степени дисбактериоза влагалища; при этом, при остром уреаплазмозе выявлен высокий уровень показателей воспалительной реакции, что подтверждало высокий уровень мукозального иммунитета. Это также подтвердилось эффективностью курса проведенного лечения с использованием общепринятой антибактериальной терапии с подключением иммунобиологического препарата Кипферон®: у 68,0% пациентов с дисбиозом и у 88,0%

пациентов с вагинитом наступило клиническое выздоровление с эррадикацией уреаплазм после первого курса лечения, рецидив не регистрировался в течение полугода (срок наблюдения); у 32,0% пациентов с дисбиозом и у 12,0% с вагинитом через месяц после первого курса терапии потребовалось проведение второго курса для достижения указанного эффекта. В тоже время у пациентов с нормоценозом - в 0% случаев) и первой (промежуточный тип - в 10,5% случаев) степенями дисбактериоза влагалища, сопровождающиеся достоверно, по сравнению с дисбиозом и вагинитом, более низкими уровнями показателей воспалительной реакции и указывающими на нарушение мукозального иммунитета, потребовалось повторное применение курса терапии через месяц после первого для достижения лечебного эффекта - эррадикации уреаплазм и отсутствие рецидива через полгода; у 68,0% пациентов с нормоценозом и 76,0% пациентов с вагинитом через полгода выявлено обострение заболевания. Во всех случаях выздоровление сопровождалось снижением воспалительной реакции слизистых; сохранение выраженной воспалительной реакции после первого курса терапии требовало его повторения.

Таким образом, научно обоснована и подтверждена концепция о том, что взаимодействие микробиоценозов слизистых открытых полостей макроорганизма носит динамический характер, обеспечивает жизненно необходимый оптимальный уровень реактивности макроорганизма и его антиинфекционную резистентность. Тем самым, достоверно подтверждена роль микроорганизмов в обучении защитных систем макроорганизма в онтогенезе. Изменение антиинфекционной резистентности к гетерологичным патогенам на организменном и местном уровнях определяется набором факторов патогенности микроорганизмов, являющихся неотъемлемой патогенетической характеристикой возбудителей инфекций, обусловливающей, в конечном счете, прогноз и исход заболевания.

Расширены представления о механизме формирования запуска инфекционного процесса, который является следствием взаимодействия микроорганизмов биотопов слизистых и возбудителей инфекционных заболеваний с TL-рецепторами, уровень экспрессии которых взаимосвязан с выраженностью показателей местного иммунитета (секреторных иммуноглобулинов и цитокинов). Таким образом, TLR являются первым звеном в ответе организма на патоген, определяющим дальнейшее развитие инфекционного патологического процесса. Создание быстрой и неспецифической защиты против инфекций определяется способностью TLR распознавать практически все патогенассоциированные молекулярные структуры на патогенах, запускающих инфекционный процесс. Нарушение механизмов функционирования TLR приводит к развитию иммунопатологических процессов и сказываются как на развитии, так и на исходе инфекционных заболеваний.

Впервые представлен алгоритм функционирования КР слизистых открытых полостей как интегральной составляющей местной антиинфекционной резистентности и мукозального иммунитета в целом. (Рис.1.)

Техническим результатом настоящего изобретения является разработка способа комплексной оценки КР слизистых как метода оценки их мукозального иммунитета. Регистрация показателей уровней TLR, цитокинов и Ig слизистых имеет диагностическое и прогностическое значение и как результат позволяет использовать определенную схему коррекции при нарушении мукозального иммунитета.

Список литературы

1. Бондаренко В.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. - М., Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа», 2007. - 300 с.

2. Воропаева Е.А., Байракова А.Л., Бичучер A.M. и др. Протеазная активность микрофлоры ротовой полости больных пародонтитом // Биомедицинская химия. - 2008. - Т.54, Вып.6. - С.706-712.

3. Иммунобиологические препараты, перспективы применения в инфектологии. Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев, В.В. Поспелова (ред.). - М., ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. - 608 с.

4. Кочеровец В.И., Бунятян Н.Д. Нормальная микрофлора женских мочеполовых органов и препараты для ее коррекции. - М., Издательский дом «АКТЕОН», 2011. - 72 с.

5. Лахтин М.В., Алешкин В.А., Лахтин В.М. и др. Поведение Candida tropicalis и Candida krusei в присутствии пробиотических пектинов. // Астраханский медицинский журнал. - 2011. - Т.6, №3. - С.97-101.

6. Самсыгина Г.А. Острый бронхит у детей и его лечение // Педиатрия. - 2008. - №2. - С.25-32.

7. El Feghaly R.E., McGann L., Bonville C.A. et al. Local production of inflammatory mediators during childhood parainfluenza virus infection // Pediatr. Infect. Dis. - 2010, V.29. - P.26-31.

8. Козлов Л.В., Бичучер A.M., Мишин А.А. и др. Определение активности протеиназ крови и микроорганизмов // Биомед. химия. - 2008. - Т.54, №3. - С.314-321.

9. Фидров А.А., Скрипкин Ю.К., Кулагин В.И. и др. Некоторые актуальные вопросы урогенитальной хламидийной инфекции // Журн. "Успехи современного естествознания". - 2006 - №2. - С.24-26.

10. Donatella Pellati, loannis Mylonakis, Giulio Bertoloni et al. Genital tract infections and infertility // European J. of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology. - 2008. - Vol.140. - P.3-11.

11. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии /Под ред. Г.Г. Онищенко, С.С. Афанасьева, В.В. Поспеловой. М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. С.162-169,

12. Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Воробьев А.А. и др. Влияние препаратов цитокинов на устойчивость бактерий к антибиотикам in vitro. // Журн. микробиол. - 2005. - №3. - С.95-97.

13. Интерфероновый статус, препараты интерферона в лечении и профилактике инфекционных заболеваний и реабилитация больных. С.С. Афанасьев, Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкин и др. (ред.). - М., Триада-Х, 2005. - 767 с.

14. Караулов А.В., Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Лапин Б.А. (ред.) Хламидийная инфекция. Новые аспекты патогенеза, иммунологии, верификации и лечения инфекции у человека и приматов. - М., изд-во Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, 2012. - 256 с.

15. Серебрянский Ю.Е., Афанасьев С.С., Алешкин В.А. и др. Проблемы цитокинотерапии инфекционных заболеваний. - М., 2000. - 106 с.

16. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. - М., ВИНИТИ РАН, 2001. - 224 с.

17. Шварцман Я.С., Хазенсон Л.Б. Местный иммунитет. - Л., Медицина, 1978. - 224 с.

1. Способ оценки состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных процессов, отличающийся тем, что при установленном патогенетическом факторе проводят регистрацию степеней нарушения микробиоценоза конкретного биотопа слизистых открытых полостей различной локализации с использованием комплекса методов оценки уровней факторов колонизационной резистентности как интегрирующей составляющей мукозального иммунитета в мазках и соскобном материале со слизистых, а именно нормальной микрофлоры, условно-патогенной микрофлоры, иммуноглобулинов - G, М, А, секреторного иммуноглобулина А и sc компонента; и в зависимости от степени нарушения микробиоценоза оценивают:
- хорошее состояние мукозального иммунитета при второй и третьей степенях нарушения микробиоценозов и прогнозируют благоприятный исход заболевания с эрадикацией возбудителя;
- нарушение мукозального иммунитета при нормоценозе и первой степени нарушения микробиоценозов и прогнозируют хроническое течение инфекционно-воспалительного процесса с персистированием возбудителя.

2. Способ коррекции инфекционно-воспалительных процессов, отличающийся тем, что проводят оценку состояния мукозального иммунитета слизистых открытых полостей способом по п. 1 и назначают:
- больным с хорошим состоянием мукозального иммунитета курс лечения с использованием общепринятой антибактериальной терапии с подключением иммуномодулятора - Кипферон® до момента излечения и исчезновения воспалительной реакции
- больным с нарушением мукозального иммунитета курс лечения с использованием общепринятой антибактериальной терапии с подключением иммуномодулятора - Кипферон® и повторно через месяц второй аналогичный курс терапии до момента излечения и исчезновения воспалительной реакции.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области спортивной медицины, а именно к методам лабораторной диагностики уровня физической нагрузки на организм спортсмена. Для этого определяют содержание кальция и белка в ротовой жидкости до и после физической нагрузки, а также через день после физической нагрузки.
Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для диагностики наличия патологического влияния железодекстрана на печень поросят. Сущность способа заключается в проведении морфологического системного пошагового анализа гистологических срезов печени с описанием ее гистологической структуры, измерением среднего количества двуядерных гепатоцитов, апоптозных телец и клеток мононуклеарно-макрофагальной системы.
Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования тимомегалии в трехмесячном возрасте у доношенных новорожденных с внутриутробным гриппом В, осложненным плацентитом.

Изобретение относится к областям животноводства, экологии и ветеринарии, предлагается для использования в качестве прижизненного неинвазивного теста оценки степени содержания меди в мышечной ткани рыб.
Изобретение относится к медицине, в именно к гематологии, и может быть использовано для морфометрической оценки прогноза течения апластической анемии после спленэктомии.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и касается выбора тактики лечения пациентов с олигоменореей и ожирением. Для этого у девочек-подростков с установленным диагнозом «олигоменорея» и «ожирение» утром натощак определяют концентрацию адипонектина и лептина в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки контроля рН желудочного содержимого у пациентов отделения реанимации и интенсивной терапии. Проводят динамическую оценку рН желудочного содержимого с использованием назогастрального зонда, определяют суммарную рН желудочного содержимого и эффективность антисекреторных препаратов в течение суток, а при необходимости - более длительное время, с интервалом 3 ч.

Изобретение относится к портативному анализатору для исследования пробы биологической жидкости на предмет значимой с медицинской точки зрения составляющей и может быть использовано в медицине.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству. Изобретение представляет способ прогнозирования плацентарной недостаточности во 2 триместре беременности путем иммунно-ферментного исследования сыворотки крови беременных, отличающийся тем, что предварительно известным методом УЗИ определяют пол плода, затем в венозной крови беременных определяют уровни ангиогенных факторов и цитокинов и если установлено повышение уровня ИЛ-12 более 3,2 пг/мл, ЭФР более 310 пг/мл, снижение уровня ФРП менее 40,0 пг/мл у беременных, вынашивающих плоды мужского пола, и повышение ЭТ-1 более 0,42 пг/мл, ИЛ-1β более 17,6 пг/мл, ФНО-α более 6,5 пг/мл у беременных, вынашивающих плоды женского пола, то прогнозируют у данных беременных развитие плацентарной недостаточности.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования ответа на противовирусную терапию при хроническом гепатите C. На 12-й неделе лечения определяют уровень интерферона в плазмоцитоидных дендритных клетках крови. При его приросте у взрослых и детей в 20 раз и более по сравнению с исходным уровнем, определяемым перед началом терапии, или в 2,6×102 раз у взрослых, а у детей в 1,2×102 по сравнению с нормальными показателями прогнозируют стабильный положительный ответ на противовирусную терапию. Способ позволяет повысить точность прогнозирования для выбора оптимальной тактики лечения у каждого пациента. 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, и может быть использовано для раннего прогнозирования кистозной перивентрикулярной лейкомаляции (ПВЛ) у новорожденных с очень низкой (ОН) и экстремально низкой массой тела (ЭНМТ). Сущность способа: у новорожденных с ОН и ЭНМТ на 3-7 сутки жизни оценивают данные перинатального анамнеза, а именно наличие хориоамнионита и характер околоплодных вод, оценку новорожденного по шкале Апгар на 5-й минуте, отсутствие продленной ИВЛ, тяжесть респираторного дистресс-синдрома, наличие пневмонии, сепсиса, судорожного синдрома, анемии, лабораторных признаков системной воспалительной реакции, усредненные показатели углекислого газа, анионного бикарбоната и дефицита оснований в капиллярной крови, уровни интерлейкина-6 и рецепторного антагониста интерлейкина-1 в сыворотке венозной крови. При этом каждому показателю устанавливается прогностический коэффициент (ПК). После чего определяют сумму ПК и принимают решение о прогнозе в пользу кистозной ПВЛ, если сумма ПК не менее (+)9,5, и отсутствии прогноза развития кистозной ПВЛ, если сумма ПК равна или меньше (-)9,5. Изобретение обеспечивает раннее, в первые 7 суток жизни, прогнозирование кистозной перивентрикулярной лейкомаляции (ПВЛ) у наиболее подверженной данному осложнению категории пациентов - детей с ОН и ЭНМТ при рождении. 6 табл., 5 пр.

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для мониторинга состояния пациента. Способ предоставления сигнала предупреждения о меняющемся во времени физиологическом параметре включает мониторинг контролируемого параметра пациента, сравнение контролируемого параметра с начальным пороговым критерием, временное изменение начального порогового критерия на пороговый критерий ухудшенного состояния после проведения терапии, а затем, после определенного периода времени, на пороговый критерий после введения. Во время отведенного периода времени проводят сравнение контролируемого параметра с пороговым критерием ухудшенного состояния, а после отведенного периода времени - с пороговым критерием после введения. В ответ на нарушение контролируемым параметром одного или более из начального порогового критерия, порогового критерия ухудшенного состояния и порогового критерия после введения инициируют сигнал тревоги. Группа изобретений относится также к машиночитаемому носителю с программным обеспечением для осуществления способа и к системе предупреждения пользователя об изменении контролируемого параметра. Группа изобретений обеспечивает повышение точности и скорости оценки состояния пациента с учетом проводимой терапии. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска раннего развития микрососудистых осложнений у детей с сахарным диабетом 1 типа. Сущность способа состоит в том, что определяют длительность заболевания в годах, возраст больного в годах, содержание десквамированных эндотелиальных клеток, уровень холестерина липопротеидов высокой плотности, общего холестерина, триглицеридов, коэффициент атерогенности, уровень гликированного гемоглобина, среднесуточный уровень гликемии, проводят линейный регрессионный анализ и рассчитывают коэффициент риска раннего развития микрососудистых осложнений у детей с сахарным диабетом 1 типа (P) по формуле. При значении коэффициента ≥1 прогнозируют высокий риск развития микрососудистых осложнений заболевания в течение года, а при значении коэффициента < 1 прогнозируют низкий риск развития микрососудистых осложнений заболевания в течение года. Использование заявленного способа позволяет повысить точность прогнозирования микрососудистых осложнений у детей с сахарным диабетом 1 типа. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и может быть использовано для дооперационного определения объема операции у больных диффузным токсическим зобом. Для этого у больных до операции натощак забирают 1 мл венозной крови при температуре в помещении 20-24°C в вакуумную систему (пробирку) без антикоагулянта. Доставляют в лабораторию для иммуноферментного анализа в течение 2-х часов в герметичном контейнере с температурой 2-8°C и определяют уровень антител к рецепторам ТТГ. При уровне антител больше или равно 1,5 Ед/л больному выполняют тиреоидэктомию, при уровне антител меньше 1,5 Ед/л больному выполняют субтотальную резекцию щитовидной железы по стандартным методикам. Изобретение позволяет снизить вероятность рецидива тиреотоксикоза у пациентов после субтотальной резекции щитовидной железы. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно акушерству и может быть использовано для прогнозирования веса новорожденного у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России. Для этого у пациентки выделяют ДНК из периферической венозной крови и проводят анализ полиморфизмов генов VII фактора коагуляции 10976G/A FVII. У женщин, рожающих не в первый раз, вес тела новорожденного при рождении на сроке 37 и более недель беременности определяют по уравнению: y=6123,431-25,579x1+0,267x2+205,739x3, где y - прогнозируемый вес новорожденного, x1 - рост женщины в сантиметрах; x2 - вес ребенка в предыдущих родах в граммах, x3 - генетический вариант локуса 10976G/A FVII, при этом x3=1 для генотипа 10976 GG FVII, x3=2 для генотипов 10976 GA и 10976 AA FVII. У первородящих женщин вес тела новорожденного при рождении на сроке 37 и более недель беременности определяют по уравнению: y=6278,037-21,739x1+232,170x2, где x1 - рост женщины в сантиметрах; x2 - генетический вариант локуса 10976G/A FVII, при этом x2=1 для генотипа 10976 GG FVII, x2=2 для генотипов 10976 GA и 10976 AA FVII. Изобретение позволяет улучшить профилактику и лечение осложнений беременности. 2 табл., 4 пр.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для использования при экспериментальных паразитологических исследованиях в лабораторных условиях. Способ включает отбор только живых, половозрелых самок Trichuris vulpis из толстой, слепой кишок спонтанно зараженных трихоцефалами при исследовании гельминтологическими методами на вскрытии диких или/и домашних хищных в отдельные пробирки с официнальным изотоническим раствором (0,9%) хлорида натрия (solutio Natrii chlorati isotonica) и экспозицией пробирок с самками Trichuris vulpis при t=37,5°C - 39°C в течение 5 часов в условиях термостата. Заявленный способ позволяет отобрать в большом количестве оплодотворенные яйца Т. vulpis, не загрязненные частицами непереваренного корма, частицами разрушенных тканей половых органов самок Т. vulpis и секундарной бактериальной микрофлорой. 2 пр.

Изобретение относится к высокочувствительному способу определения количества глицирризина, глицирретиновой кислоты и их фармакологически приемлемых солей, присутствующих в плазме крови человека. Высокочувствительный способ определения количества глицирризина, глицирретиновой кислоты и их фармакологически приемлемых солей характеризуется тем, что смесь плазмы крови человека с метанолом или раствором аммиачной воды с определенной концентрацией вводят в твердую фазу, обладающую обращенно-фазовой распределительной функцией и функцией анионного обмена, затем промывают твердую фазу очищающей жидкостью, представляющей собой однокомпонентную жидкость или жидкую смесь, по меньшей мере, двух компонентов, выбранных из группы, включающей воду, щелочь, спирт и ацетонитрил. Далее проводят элюирование из твердой фазы кислым спиртом, выбранным из муравьиной кислоты-метанола или муравьиной кислоты-этанола, после чего проводят стадию количественного определения глицирризина, глицирретиновой кислоты и их фармакологически приемлемых солей методом ЖХ-МС или ЖХ-МС/МС. Высокочувствительный способ позволяет обнаружить и количественно определить глицирризин, глицирретиновую кислоту и их фармакологически приемлемые соли в плазме крови человека. 4 ил., 17 табл., 7 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике бесплодия женщин. Для этого проводят определение цитотоксичности сыворотки женщин к мужским лимфоцитам, включая их совместное культивирование с контрольной мужской и исследуемой женской сывороткой в лунках 96-луночного планшета в присутствии питательной среды RPMI 1640 в СО2-инкубаторе. Через сутки в камере Горяева подсчитывают количество лимфоцитов в лунке с мужской сывороткой (контроль) и женской (опыт). Далее определяют цитотоксический индекс (ЦИ), который представляет собой частное от деления количества клеток в опыте на количество клеток в контроле. Нормальный показатель ЦИ составляет примерно 0,7 и ниже. Изобретение позволяет проводить исследование реакции гуморальных фактором иммунной системы женского организма на мужские антигены и оценить степень риска невынашивания беременности, ранних выкидышей и неразвивающейся беременности. 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики биполярного аффективного расстройства. Сущность способа состоит в том, что выявляют достоверные различия в спектре распределения белков сыворотки крови без белков альбумина, иммуноглобулина G, иммуноглобулина А, антитрипсина, трансферина и гаплоглобина у больных эндогенным психозом. При выявлении у больного эндогенным психозом на электрофоретическом геле белковых пятен в областях с молекулярной массой 200, 84, 75, 49, 40 кДа, диагностируют биполярное аффективное расстройство. Использование заявленного способа позволяет увеличить точность постановки диагноза, и при этом он прост в осуществлении. 2 пр.
Наверх