Срочная флюоресцентная иммуноцитохимическая диагностика метастатического поражения лимфатических узлов


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2582275:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный медицинский исследовательский центр имени П.А. Герцена" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ФМИЦ им. П.А. Герцена" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к флуоресцентной иммуноцитохимической диагностике метастатического поражения лимфатических узлов. Сущность способа состоит в том, что для получения клеточной суспензии клеточный материал помещают в питательную среду накопления, состоящую из растворов: Хенкса, реоплиглюкина и альбумина, смешанных в равных количествах, хорошо перемешанную клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно каждой пробирки с питательной средой, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber ЕР4 FITC и перемешивают 5 с, после этого материал инкубируют 20 мин в холодильнике при t° 2-8 C, полученную взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, полученные препараты окрашивают ядерным флюоресцентным красителем и осуществляют флуоресцентную микроскопию. Использование заявленного способа не требует сложной предподготовки материала и значительных временных затрат и позволяет повысить эффективность флуоресцентной иммуноцитохимической диагностики метастатического поражения лимфатических узлов. 1 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к интраоперационному исследованию раковых клеток в лимфатических узлах с использованием эпителиального маркера.

Причин гиподиагностики при срочном иммунофлюоресцентном исследовании лимфатических узлов несколько. Основные из них связаны с тем, что исследуются не все удаленные лимфатические узлы. И в этой ситуации надо искать «золотую середину»: недостаточно исследовать 1-2 лимфатических узла, но и значительное увеличение срочно исследуемых лимфатических узлов из-за ограниченности времени также может привести к ошибкам. На наш взгляд, оптимальным может быть исследование 5 лимфатических узлов.

Второй причиной ошибок является наличие микрометастазов, эту ошибку преодолеть очень трудно. Необходимо брать соскобы со всей поверхности разрезанного по длиннику лимфатического узла и обязательно из подкапсульной зоны. Неправильный забор материала из разволокненных или мелких неразрезанных лимфатических узлов - частая причина неадекватности оценки состояния лимфатических узлов.

Известен способ мультиплексной детекции опухолевых клеток с использованием панели агентов, связывающихся с внеклеточными маркерами. К образцу добавляют панель меченых агентов, которые связываются с двумя или более маркерами, экспрессируемыми на поверхности клетки, где по меньшей мере один из агентов является специфичным к раку и где панель содержит: один или нескольких агентов, связывающихся с ракспецифичными маркерами, экспрессируемыми на поверхности раковой клетки толстой кишки, где один агент или один из агентов является агентом, связывающимся с СА 19-9, и один или нескольких агентов, связывающихся с тканеспецифичными маркерами, которые являются эпителиальными и/или мезенхимальными экспрессируемыми на поверхности клетки, где один агент или один из агентов является агентом, связывающимся с Ер-САМ. Набор, содержащий один или несколько агентов, связывающийся с внеклеточными ракспецифичными маркерами, где один агент или один из агентов является антителом или фрагментом антитела, связывающимся с СА 19-9, и один или нескольких агентов, связывающихся с внеклеточными тканеспецифичными маркерами, которые являются эпителиальными маркерами и/или мезенхимальными маркерами, где один агент или один из агентов является антителом или фрагментом антитела, связывающимся с Ер-САМ (RU 2489720 С2).

Однако известный способ диагностики занимает много времени и является дорогостоящим, т.к. для исследования используют несколько маркеров.

Самым близким к заявляемому является иммунный гистохимический реагент для обнаружения лимфатических метастазов рака молочной железы. Указанный реагент представляет собой флуоресцентный краситель или HRP-меченого антитела, препарат антитела или антитела-HRP - флуоресцентный краситель-меченых комплексов, титр был измерен путем смешивания конфигурации меченого антитела (CN 1945333 А 20070411).

Однако известный способ диагностики предполагает обнаружение только метастазов рака молочной железы и не предназначен для более широкого исследования.

Задачей изобретения является разработка надежного и быстрого метода диагностики метастатического поражения лимфатических узлов, а также снижение себестоимости данного вида исследования.

Указанная задача достигается тем, что для получения клеточной суспензии клеточный материал помещают в питательную среду накопления, состоящую из раствора: Хенкса, реоплиглюкина и альбумина, смешанную в равных количествах, хорошо перемешанную клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно каждой пробирки, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber ЕР4 FITC и перемешивают 5 с, после этого материал инкубируют 20 мин в холодильнике при t° 2-8 C, полученную взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, полученные препараты окрашивают ядерным флюоресцентным красителем и осуществляют флюоресцентную микроскопию.

Изобретение поясняется подробным описанием, клиническими примерами и иллюстрацией, на которой изображено: микрометастаз рака молочной железы в лимфатический узел. Экспрессия эпителиального маркера Вег-ЕР4 FITS. Флюоресцентная иммуноцитохимия (Ув.×1000).

Объектом цитологического исследования служат интраоперационные соскобы с поверхности разреза лимфатического узла либо тонкоигольные аспирационные биоптаты лимфатических узлов. Соскобы и отпечатки с удаленных лимфатических узлов готовит цитолог. Обязательными условиями адекватного исследования лимфатических узлов являются продольные многоступенчатые разрезы и соскоб со всей поверхности лимфатического узла. Пункцию лимфатических узлов осуществляет хирург.

Соскобы получают с лимфатического узла скальпелем или ребром и углом предметного стекла с последующим равномерным распределением полученного материала на втором предметном стекле.

Все мазки, приготовленные из лимфатических узлов, окрашивают азур-эозиновыми смесями методом срочной интраоперационной окраски.

Для успешного применения ФИЦХ необходимо соблюдение нескольких условий: полнота клинических сведений и достаточное количество опухолевых клеток - оптимально не менее 200 клеток в одном препарате.

С целью выявления опухолевых клеток применяют эпителиальный антиген Ber-EP4 FITC. Данный антиген представляет молекулу адгезии эпителиальных клеток и состоит из двух гликопротеинов молекулярной массой 34 и 39 кД, которые находятся преимущественно на поверхности клеточной мембраны почти всех эпителиальных клеток за исключением некоторых видов плоского эпителия, гепатоцитов, проксимальных отделов эпителия почечных канальцев, желудочных париетальных и миоэпителиальных клеток. Неизмененный мезотелий и элементы лимфатического узла Ber-EP4-отрицательны. Ber-EP4 является маркером клеток эпителиальной природы, его экспрессия отмечается в клетках широкого спектра новообразований эпителиального происхождения, включая мелкоклеточные, недифференцированные раки и нейроэндокринные опухоли.

Для ФИЦХ-исследования лучше использовать жидкостные препараты, приготовленные с помощью центрифуги Cytospin 3, что позволяет получить монослой клеток, обеспечивает сохранность клеточных структур, снижает содержание в препарате элементов воспаления, концентрирует клеточные элементы на ограниченном участке, что экономит дорогостоящие реактивы.

Для получения жидкостных препаратов клеточный материал после пункции или соскоба лимфатических узлов помещают в специальную питательную среду (раствор Хенкса, реоплиглюкин и альбумин, смешивается в равных количествах) накопления, находящуюся в микропробирке (800 мкл).

Затем в случае исследования лимфатических узлов взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги Cytospin 3 и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин. Контроль качества проводят окрашиванием двух цитоспиновых препаратов методом срочной интраоперационной цитологической окраски. При наличии в мазках достаточного количества клеточного материала (200-300 клеток) проводят ФИЦХ-исследование.

Срочную флюоресцентную иммуноцитохимическую диагностику (ФИЦХ) метастатического поражения лимфатических узлов выполняют следующим образом.

Материалом для проведения срочной флюоресцентной иммуноцитохимиии являются клеточные суспензии различных лимфатических узлов. Клеточный материал после пункции или соскоба лимфатических узлов помещают в специальную питательную среду накопления, находящуюся в микропробирке (800 мкл), для получения клеточной суспензии. Хорошо перемешанную клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно каждой пробирки, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber ЕР4 FITC (эпителиального маркера) и перемешивают 5 с на вортексе. Материал инкубируют 20 мин в темноте в холодильнике (2-8°C). В процессе инкубации происходит реакция взаимодействия поверхностных антигенов со специфическим антителом Ber-EP4 FITC, меченным соответствующим флюорохромным красителем с образованием комплексов антиген+антитело. Затем взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги Cytospin 3 и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин. Полученные препараты окрашивают ядерным флюоресцентным красителем Dapi, после чего осуществляют микроскопию полученных препаратов.

Оценка полученных результатов

При добавлении к клеточной суспензии моноклональных антител Ber-EP4 FITC, коньюгированных с флюорохромами, происходит связывание их с поверхностными антигенами клеток, возбуждение флюоресценции и последующая ее регистрация при длине волны 488 нм (в спектре Green) ФИЦХ-реакция оценивается качественно. При проведении реакции с эпителиальным антигеном Ber-EP4 FITC наблюдаем окрашивание мембраны клетки рака (зеленое свечение). При оценке ФИЦХ-реакции принимают во внимание интенсивность и полноту окрашивания. Были отмечены некоторые особенности экспрессии эпителиального маркера Ber-EP4 FITS, выявляемые при флуоресцентной микроскопии. Характерной особенностью является хорошо выраженная четкая мембранная реакция в виде секреторных вакуолей, которые располагаются на поверхности клетки иногда в виде своеобразного кружева. Иногда наблюдается отрыв цитоплазмы в виде секреторных вакуолей. Такой характер экспрессии характерен для клеток аденогенного рака (Фиг.1) Наличие таких клеток не вызывает сомнений в их эпителиальной природе. Для предотвращения гипердиагностики метастазов рака в лиматические узлы следует учитывать, что макрофагальные элементы, присутствующие в лимфатических узлах или экссудате, захватывают частицы красителя и выглядят как светящиеся включения в цитоплазме.

В отделении МНИОИ им. П.А. Герцена методом ФИЦХ исследовано 70 лимфатических узлов: 19 - при раке молочной железы, 7 - при перстневидноклеточном раке желудка, 5 - при аденокарциноме кишки, 2 - при серозном раке яичников, 12 - при плоскоклеточных раках, 14 - при аденокарциноме легкого, 6 - при раке щитовидной железы, 1 - при раке простаты, 1 - при раке мочевого пузыря, 1 - при раке поджелудочной железы, 2 - при неопухолевых заболеваниях.

Экспрессия эпителиального маркера Ber-EP4 отмечена в 12 наблюдениях при раке молочной железы.

Из 7 исследованных лимфатических узлов при перстневидноклеточном раке желудка опухолевые клетки выявлены в 6.

При аденокарциноме кишки метастазы рака с помощью ФИЦХ установлены в 5 наблюдениях.

В 14 наблюдениях у пациентов при раке легкого (12 - низкодифференцированными аденокарциномами, 2 - мелкоклеточным раком) подтверждены метастазы рака. Дифференциальный диагноз проводился с лимфомами и гиперплазированными лимфатическими узлами.

Клетки серозного рака яичников установлены в двух наблюдениях, причем опухолевые клетки были немногочисленными.

В 5 наблюдениях при раке щитовидной железы был подтвержден метастатический характер процесса.

При 12 плоскоклеточных раках различных локализаций (гортань, шейка матки, носоглотки) в 10 случаях подтверждены метастазы рака, причем в 2 случаях клетки были малочисленны. В одном случае при низкодифференцированном плоскоклеточном инвазивном раке шейки матки с тотальным ее поражением методом ФИЦХ обнаружены немногочисленные клетки рака в лимфатическом узле, гистологически не подтверждены.

В 1 наблюдении при раке простаты, 1 - мочевого пузыря, 1 - поджелудочной железы подтверждены метастазы рака.

В 2 случаях установлен саркоидоз и туберкулез - Ber-EP4 FITS не экспрессировался.

Клинические примеры

Клинический пример 1

Больная М. 42 года. Клинический диагноз - рак молочной железы справа. По данным УЗИ - рак правой молочной железы, подозрение на наличие метастазов рака в лимфатические узлы правой подмышечной области. Во время операции на молочной железе проводилось срочное цитологическое исследование сигнального лимфатического узла правой подмышечной области. Лимфатический узел разрезали по длиннику несколько раз (в виде «книжки»). Соскобы брали со всей поверхности лимфатического узла. При интраоперационном цитологическом исследовании методом световой микроскопии соскобов, взятых из лимфатического узла, было дано заключение о гиперплазии лимфатического узла с синус-гистиоцитозом. Часть клеточного материала соскоба поместили в специальную питательную среду накопления в микропробирку, содержащую 800 мкл питательной среды. К взвеси клеток добавляли эпителиальный маркер Ber-EP4 FITS и оставляли на 20 мин в темном месте для прохождения флюоресцентной иммуноцитохимической реакции. Затем взвесь клеток распределяли по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги системы Cytospin (Shandon, UK) и центрифугировали в режиме 1000 об/мин в течение 5 мин. Готовили жидкостные цитологические препараты. Для визуализации ядер клеток препараты окрашивали DAPI. Микроскопию осуществляли на флуоресцентном микроскопе Imager M1 фирмы «Karl Zeiss».

При проведении нтраоперационной флюоресцентной иммуноцитохимии с эпителиальным маркером Ber-EP4 в этом лимфатическом узле были обнаружены клетки рака с положительной экспрессией эпителиального маркера, что определили при исследовании с помощью флюоресцентного микроскопа. В метастатических лимфатических узлах в спектре эмиссии FITC (520-524 нм) хорошо видна мембранная экспрессия эпителиального маркера Ber-EP4 на клетках рака. Отмечается четкая выраженная мембранная реакция, характеризующая экспрессию эпителиального маркера Ber-EP4 FITS, выявляемая при флуоресцентной микроскопии на клетках метастаза рака молочной железы. Диагноз - метастаз умереннодифференцированного протокового рака молочной железы, что было подтверждено последующим гистологическим исследованием, где был обнаружен микрометастаз рака молочной железы.

Клинический пример 2

Больная П., 64 года. Клинический диагноз - рак молочной железы слева. По данным УЗИ - рак левой молочной железы, подозрение на наличие метастазов рака в лимфатические узлы левой подмышечной области. Во время операции на молочной железе проводилось срочное цитологическое исследование сигнального лимфатического узла левой подмышечной области. Лимфатический узел разрезали по длиннику несколько раз (в виде «книжки»). Соскобы брали со всей поверхности лимфатического узла. При интраоперационном цитологическом исследовании методом световой микроскопии соскобов, взятых из лимфатического узла, было дано заключение о подозрении на метастаз рака в лимфатический узел. Часть клеточного материала соскоба поместили в специальную питательную среду накопления в микропробирку, содержащую 800 мкл питательной среды. К взвеси клеток добавляли эпителиальный маркер Ber-EP4 FITS и оставляли на 20 мин в темном месте для прохождения флюоресцентной иммуноцитохимической реакции. Затем взвесь клеток распределяли по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги системы Cytospin (Shandon, UK) и центрифугировали в режиме 1000 об/мин в течение 5 мин. Готовили жидкостные цитологические препараты. Для визуализации ядер клеток препараты окрашивали DAPI. Микроскопию осуществляли на флуоресцентном микроскопе Imager M1 фирмы «Karl Zeiss». При проведении интраоперационной флюоресцентной иммуноцитохимии с эпителиальным маркером Ber-EP4 в этом лимфатическом узле не было обнаружено клеток рака, что определили при исследовании с помощью флюоресцентного микроскопа. Диагноз - гиперплазированный лимфатический узел с синус-гистиоцитозом, что было подтверждено последующим гистологическим исследованием.

Применение предлагаемой диагностики в МНИОИ им. П.А. Герцена показало, что ФИЦХ является новым надежным и быстрым методом диагностики метастатического поражения лимфатических узлов. Особенно перспективно применение этого метода при срочных интраоперационных исследованиях лимфатических узлов, так как не требует сложной предподготовки материала и значительных временных затрат: исследование занимает 20 минут. Эпителиальный маркер Ber-EP4 является гликопротеином и находится на поверхности клеточной мембраны. ИЦХ-реакция прямая: флуорохром непосредственно коньюгирован с антителом. Все это способствует сокращению времени инкубации антитела с антигеном и применению эпителиального маркера Ber-EP4 в срочной интраоперационной диагностике экссудатов и метастазов рака в лимфатические узлы.

Таким образом, показана высокая эффективность и быстрота ФИЦХ при срочных интраоперационных исследованиях лимфатических узлов с целью установления распространенности опухолевого процесса.

Срочная флюоресцентная иммуноцитохимическая диагностика метастатического поражения лимфатических узлов, включающая флуоресцентный краситель, отличающаяся тем, что для получения клеточной суспензии клеточный материал помещают в питательную среду накопления, состоящую из растворов: Хенкса, реоплиглюкина и альбумина, смешанную в равных количествах, хорошо перемешанную клеточную суспензию вносят по 100 мл на дно каждой пробирки, добавляют 5 мкл моноклонального антитела Ber EР4 FITC и перемешивают 5 с, после этого материал инкубируют 20 мин в холодильнике при t° 2-8 C, полученную взвесь клеток распределяют по 50-100 мкл в контейнеры центрифуги и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, полученные препараты окрашивают ядерным флюоресцентным красителем и осуществляют флюоресцентную микроскопию.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биохимии. Описан набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации генетического материала риккетсий методом ПЦР в реальном времени.

Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярно-генетической диагностики и молекулярной биологии. Предложен набор, содержащий два олигодезоксирибонуклеотидных праймера и флуоресцентно-меченый ДНК-зонд.

Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургии, и может быть использовано для прогнозирования эндогенной интоксикации у больных острым перитонитом.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей. В крови заболевших детей в период с 1 по 7-й день болезни определяют X- значение уровня лимфоцитов, на поверхности которых находятся СD3+IL4+ маркеры, рассчитывают значение Y по формуле 1,12+9,32*X.

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики рака желудка. В сыворотке крови определяют концентрации фактора роста эндотелия сосудов, раково-эмбрионального антигена и пепсиногена-1.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности процедуры радиочастотной симпатической денервации почечных артерий у пациентов с медикаментозно-резистентной артериальной гипертензией, характеризующийся тем, что пациенту в условиях стационара проводят измерение β-адренореактивности эритроцитарных мембран периферической крови до и через 7 дней после процедуры, и при снижении значения β-адренореактивности мембран на 10 условных единиц и более процедуру оценивают как эффективную.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования риска развития осложнений ХИЭ у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ, отличающийся тем, что способ включает выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ генетического полиморфизма лимфотоксина α(+250A/G Ltα) в сочетании с такими предикторами, как наличие очагов хронической инфекции и уровень лейкоцитов, прогноз риска развития осложнений по уравнениям линейной дискриминантной функции следующего вида: у1=-114,015+108,475x1+1,267x2+2,743x3 у2=-114,720+103,793x1+2,370x2+3,399x3, где x1 - наличие очагов хронической инфекции (да - 1; нет - 2), x2 - уровень лейкоцитов (1012/л), x3 - генетический вариант по локусу+250 A/G Ltα: AA - x3=1; AG - x3=2; GG - x3=3.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования вероятности риска возникновения преэклампсии у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона России.

Изобретение относится к медицине и касается способа очистки гозерелина, включающего растворение гозерелина-сырца в водном растворе уксусной кислоты, фильтрование полученного раствора и последующую трехстадийную хроматографическую очистку: жидкостную хроматографию низкого давления на колонне с полистиролдивинилбензольным сорбентом, ионообменную хроматографию низкого давления и ВЭЖХ.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования у пациента с влажной возрастной дегенерацией желтого пятна (AMD) повышенной вероятности эффекта от лечения высокоаффинным антителом против VEGF, в частности, ранибизумабом.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ выявления мутации p.Q368X (с.1102С>Т) в гене MYOC, сопровождающейся развитием наследственной формы первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). Осуществляют выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции и проведение полимеразной цепной реакции в реальном времени с последующей детекцией пика кривой плавления в конечной точке. Амплификацию участка гена MYOC проводят в присутствии двух последовательностей олигонуклеотидов с красителем EvaGreen. Изобретение обеспечивает эффективную диагностику развития ПОУГ у пациентов из семей с отягощенной наследственностью. 1 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования эффективности лечения злокачественного заболевания у субъекта цисплатином. Способ состоит в том, что у пациентов определяют аллельные варианты полиморфизмов rs1142345 гена ТРМТ и rs3219484 гена MUTYH и в зависимости от аллельного статуса одного или обоих указанных полиморфизмов прогнозируют эффективность лечения цисплатином, где благоприятный прогноз определяется наличием у пациента двух аллелей дикого типа полиморфизма rs1142345 гена ТРМТ (генотип АА) и/или комбинации из аллелей дикого и мутантного типов полиморфзма rs3219484 гена MUTYH (генотип GA). Осуществление изобретения обеспечит выявление вариаций, которые могут стать основой для индивидуализации использования препаратов платины в противоопухолевой терапии. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

Настоящее изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения полисорбата в пробе, содержащей белок. Способ по настоящему изобретению включает предварительную обработку пробы посредством щелочного гидролиза с последующим колориметрическим определением на основе металлокомплекса, определяемого при анализе вещества с тиоцианатным реагентом, при этом указанный комплекс экстрагируют несмешивающимся с водой органическим растворителем. Щелочной гидролиз приводит к удалению мешающих белков и повышению селективности относительно поверхностно-активных веществ, подобных определяемому при анализе веществу, например селективности по Tween 80 относительно Triton X-100. 2 н. и 13 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 8 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано для исследования резецированного органокомплекса по поводу ампулярной карциномы. Для этого располагают органокомплекс согласно анатомическому строению, проводят его диссекцию, макроскопическое исследование, взятие опухоли, микроскопическое и иммуно-гистохимическое исследование. Способ позволяет провести постановку более объективного, достоверного и точного диагноза после проведенного хирургического лечения. 6 з.п. ф-лы, 7 ил.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-детекции Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp. в клиническом материале. Осуществляют выделение ДНК, амплификацию и электрофорез. Проводят мультиплексную ПЦР с использованием специфичных праймеров в циклическом режиме. При электрофоретическом обнаружении ампликонов размерами 286 п.н., и/или 768 п.н., и/или 135 п.н., и/или 428 п.н. определяют наличие Atopobium vaginae, и/или Leptotrichia amnionii, и/или Sneathia sanguinegens, и/или Eggerthella spp. соответственно. Изобретение обеспечивает одновременное выявление в клиническом материале до 4 видов ассоциируемых с бактериальным вагинозом бактерий. 1 ил., 2 табл., 10 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда. Сущность изобретения: в сыворотке крови определяют содержание лактата и лактатдегидрогеназы. При значении концентрации лактата выше 2,1 ммоль/л и значении концентрации лактатдегидрогеназы ниже 225 Е/л диагностируют нарушение в энергетической системе у работников. Использование изобретения повышает точность и достоверность диагностики нарушений в энергетической системе у работников химической и нефтехимической промышленности и служит прогнозом развития профессиональных заболеваний у работников химического комплекса. 4 пр.

Изобретение относится к области молекулярной генетики и микологии и предназначено для диагностики онихомикоза. Осуществляют выделение ДНК из биологического материала ногтей, проведение ПЦР и детекцию полученных результатов с помощью электрофореза в агарозном геле. Анализируют следующий спектр грибов: Trichophyton spp., Candida spp., Aspergillus spp., Fusarium spp., Scopulariopsis brevicaulis и микромицетов любой родовой принадлежности, используя мультиплексное решение для ПЦР с применением праймеров в двух реакциях, причем для определения грибов родов Aspergillus и Fusarium используют общий обратный праймер. В I реакции при детекции полосы, соответствующей 168 п.н., диагностируют онихомикоз, вызванный микромицетом Scopulariopsis brevicaulis, 120 п.н. - Candida spp., 600-650 п.н. - онихомикоз вызван любым микромицетом. Во II реакции при детекции полосы, соответствующей 302 п.н., диагностируют онихомикоз, вызванный микромицетом Trichophyton spp., 221 п.н. - Fusarium spp., 193 п.н. - Aspergillus spp. Изобретение обеспечивает эффективный способ одновременной идентификации всех этиологических агентов, клинически значимых для онихомикоза России. 1 ил., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемаггютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА). Изобретение может быть также использовано для получения набора для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотки крови человека в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Изобретение представляет собой способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической шигеллезной, имеющей способность сохранять функциональную активность антител при их длительном нахождении в водных растворах, с использованием полиглюкина и красгемодеза, сыворотку диагностическую шигеллезную, полученную таким способом, и набор для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотке крови, включающий такую сыворотку. Изобретение позволяет в любой момент времени иметь уже готовую к использованию сыворотку, сократить расход используемых материалов, исключить из стадии получения трудоемкую и энергозатратную стадию лиофильной сушки, что значительно упрощает процесс получения сыворотки. 5 н.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, медицине и ветеринарии, а именно к получению жидкой стабильной шигеллезной сыворотки, которая может быть использована для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), а также в реакции агглютинации (РА). Изобретение может быть также использовано для получения набора для выявления специфических антител к различным видам шигелл в сыворотке крови человека в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Изобретение представляет собой способ получения стабильной жидкой сыворотки диагностической сальмонеллезной, имеющей способность сохранять функциональную активность антител при их длительном нахождении в водных растворах, с использованием полиглюкина и сорбита, сыворотку диагностическую сальмонеллезную, полученную таким способом, и набор для выявления специфических антител к различным видам сальмонелл в сыворотке крови, включающий такую сыворотку. Изобретение позволяет в любой момент времени иметь уже готовую к использованию сыворотку, сократить расход используемых материалов, исключить из стадии получения трудоемкую и энергозатратную стадию лиофильной сушки, что значительно упрощает процесс получения сыворотки. 5 н.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к травматологии, и предназначено для прогнозирования нарушения консолидации при переломах костей конечностей. Осуществляют выделение ДНК, проводят анализ полиморфизмов гена TGFβ1 и гена EGFR. При выявлении генотипа -25Pro/Pro гена TGFβ1 и генотипа -2073Т/Т гена EGFR прогнозируют вероятность развития нарушения консолидации перелома. Изобретение обеспечивает повышение точности прогноза. 1 табл., 3 пр.
Наверх