Способ определения влияния пестицидов на бактерии

 

Изобретение относится к микробиологии почв, а именно к способам определения влияния химических соединений на развитие почвенных микроорганизмов, и может быть использовано для контроля за побочным действием пестицидов на почвенную микрофлору при прогнозировании и возможном предотвращении негативных последствий , вызванных попаданием препаратов в почву. Целью изобретения являются ускорение и упрощение способа. Для этого последовательно вносят в питательную среду обычную водную почвенную суспензию и испытуемые растворы пестицидов (в воде, органических растворителях) с последующей инкубацией и нефелометрией образцов, Предлагаемый способ позволяет определять влияние пестицидов на почвенные бактерии, не уступая известным способам в чувствительности, превосходит их по скорости и простоте исполнения. 2 табл. ё

союз совгтских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4607899/13 (22) 23.11.88 (46) 30.03.91. Бюл. М 12 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс (72) С,А.Ивашина (53) 631.46:632.154 (088,8) (56) Сэги Й. Методы почвенной микробиологии, М.: Колос, 1983, с. 295.

Методические рекомендации по оценке токсического действия пестицидов на микроорганизмы почвы. Л.: ВНИИСХМ, 1981, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЛИЯНИЯ

ПЕСТИЦИДОВ НА БАКТЕРИИ (57) Изобретение относится к микробиологии почв, а именно к способам определения влияния химических соединений на развиИзобретение относится к микробиологии почв, а именно к способам определения влияния химических соединений на развитие почвенных микроорганизмов, и может быть использовано для контроля за побочным действием пестицидов на почвенную микрофлору при прогнозировании и возможном предотвращении негативных последствий, вызванных попаданием препаратов в почву.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа, Согласно предлагаемому способу последовательно вносят в питательную среду обычную почвенную суспензию и испытуемые растворы пестицидов(в воде, органических растворителях) с последующей инкубацией и нефелометрией образцов, „„5U „„1638164 А1 (si)s С 12 Q 1/00, C 02 F 3/34, G 01 N 33/48 тие почвенных микроорганизмов, и может быть использовано для контроля за побочным действием пестицидов на почвенную микрофлору при прогнозировании и возможном предотвращении негативных последствий, вызванных попаданием препаратов в почву, Целью изобретения являются ускорение и упрощение способа, Для этого последовательно вносят в питательную среду обычную водную почвенную суспензию и испытуемые растворы пестицидов(в воде, органических растворителях) с последующей инкубацией и нефелометрией образцов, Предлагаемый способ позволяет определять влияние пестицидов на почвенные бактерии, не уступая известным способам в чувствительности, превосходит их по скорости и простоте исполнения.

2 табл, Пример 1, Определение влияния пестицидов акрекса и гетерофоса на почвенные бактерии, В пробирки, содержащие 10 мл мясопептонного бульона (МПБ), последовательно вносят по 1 мл почвенной суспензии (разведение 1;100 в стерильной водопроводной воде) и по 1 мл растворов акрекса или гетерофоса вацетоне(конечная концентрация 0,1 мг препаратов по действующему веществу на 1 л среды — реально встречающиеся концентрации пестицидов).

Ставят два контроля: К вЂ” МПБ+ водная почвенная суспензия разведения 1:100 (на интенсивность развития бактерий в отсутствие препарата и растворителя); К вЂ” МПБ +

+ почвенная суспензия + ацетон (1 мл) (на

1638164

Таблица 1 а

Интенсивность развития почвенных бактерий, 7, пропускаемости питательной с еды

Препараты, контроля

С оки исследования, ч

48ч

24 ч

С аз

95,03 »- 0,13

91,43» 1,72

Таг = 4,17

P =0,1

47,98+ 15,43

Так1 = 6,10

Р=-0,1

87,45»- 3,06

Такр = 4,95

94,82 + 0,24

95,48 + 0,46

Таг = 2,53

P =0,5

95,63»- 0,48

Так1 = 2,99

P=-0,5

95,18»- 0,23

Tax = 2,10 (недост.) Акрекс

Гете рофос

Контроль 1

Контроль 2

P =-0,1

Тгкг =. 2,27 НЯДОСТ,j

Тгк2 = 1,17 недост.

П р и м е ч а н и е. Таг- критерий Стьюдента для акрекса и гетерофоса; Так1,z — критерий

Стьюдента для акрекса и К> и К2: Тгк1.z -- для гетерофоса и К1 и К . влияние органического растворителя на интенсивность развития бактерий), Все операции производят с соблюдением условий стерильности, Сразу же после перемешивания содержимого пробирок от- 5 бирают образцы для нефелометрии, которую проводят при 540 нм в кюветах 3 мм, Затем пробирки помещают в термостат, где инкубируют в течение 48 ч при 30 С (оптимальная для развития почвенных бактерий 10 температура), отбирая образцы для анализов через 24 и 48 ч.

Полученные данные подвергают статистической обработке и оценивают действие испытанных концентраций пестицидов по 15 их влиянию на развитие (размножение) бактерий, Результаты исследований приведены в табл. 1.

Статистически достоверное отличие 20 процента пропускаемости образцов (табл. 1) по сравнению с К1 и К2, наблюдаемое особенно четко через 48 ч инкубации, свидетельствует о подавлении препаратом пестицида развития почвенных бактерий, 25

Пример 2, Сравнение чувствительности предлагаемого и известных способов определения влияния пестицидов на почвенные бактерии. 30

Сравнения чувствительности предлагаемого и известных способов проводят в идентичных условиях с концентрациями пестицидов акрекса и ге.терофоса 0,1 мгl кг/л, Результаты во всех случаях фиксируют в од- 35 ни сроки (до 48 ч).

Предлагаемый способ применяют согласно примеру 1. B известном способе используют бактериальную суспензию из культуры Bacillus megaterium, применение которой в качестве тест-культуры обусловлено тем, что эта почвенная бактерия является быстрорастущей на среде МПБ, Определение численности бактерий проводят на мясопептонном агаре (МПА).

Результаты исследований приведены в табл. 2.

Согласно результатам, приведенным в табл. 2, видно, что предлагаемый способ по чувствительности не уступает, а в ряде случаев превосходит известные. Причем, от способа-прототипа он отличается простотой исполнения, поскольку не требует выделения в чистую культуру и инкубирования тест-культуры микроорганизмов.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет определять влияние пестицидов на почвенные бактерии, не уступая известным способам в чувствительности, превосходит их по скорости и простоте испол н ения, Формула изобретения

Способ определения влияния пестицидов на бактерии путем выращивания бактерий на жидкой питательной среде, содержащей исследуемые пестициды, с последующим измерением интенсивности роста бактерий нефелометрическим методом, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, в качестве источника бактерий используют водную почвенную суспензию.

1638164

Таблица 2

Препараты, контроли

Чувствительность предлагаемого и известных способов определения влияния пестицидов на почвенную микрофлору,g пропускэемости питательной с еды

С оки исследования

С аз

48ч

24ч

Акре кс

Гете рофос

Контроль 1

Контроль 2

Акрекс

Гете рофос

Контроль 1

Контроль 2

Акрекс

Численность мик оо ганизмо вв1г

Почвы

4,7 10 + 0,14

4,3 10 Î,S1

5,010 ":0,14

Так = 1,5 (недостов.)

Тгк=1,15 не остов.

Гете рофос

Контроль

П р и м е ч а н и е. Таг — критерий Стьюдента для акрекса и гетерофоса; Так1,2 — критерий

Стьюдента для акрекса и К1 и К2; Тгк1,2 — для гетерофоса и К1 и Кг

Составитель С.Левин

Редактор Л,Веселовская Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор И.Зрдейи

Заказ 901 Тираж 390 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

88,7 0,46

87,0": 0,22

90,0ч- 0,83

Так1 = 1,36 (н едост.) 90,5 ч- 0,28

Так2 = 3,3

P = 0,5

Тгк1 = 3,4

Р = 0,5

Тгк2 = 4,6

Р=0,1

96,7 ": 0,40

98,0» 0,47

93,5 + 1,65

97,6": 0,30

Так1 = 1,86 (недостов,) Так2 = 1,6 (недостов.) Тгк1 = 2,6

P=0,5

Тгкг = 0,76 недостав.

87,0 ч 2,03

82,0 + 3,43

38,7 ч:1,31

Так1 = 20,04

Р=0,1

80,1 + 1,89

Такр = 2,49

P = 0,5

Тгк1 = 11,79

Р = 0,1

Тгкг = 0,48 (недостов)

96,2 +. 0,46

97,5 ч 0,73

48,0 ч- 6,95

97,0 +0,40

Т . =692

Р=0,1

Так2 = 1,33 (недостов.)

Тгк1 = 7,17

P =0,1

Тгкг = 1,92

63,4 +3,3

74,1 + 4,1

19,7 - 0,85

Так1 = 12,8

P =0,1

48 6 ч-1 28

Так2 = 4,12

P =0,1

Тгк1 = 12,6

P =0,1

Тгкр = 4,4

Р = 0,1

75,5 ч 2,1

81,1 3,1

31,0 ч-0,73

69,1 ч 1,47

Так = 20,2

P =0,1

Такг = 2,56

P = 0,5

Тгк1 = 16,16

Р=0,1

Тгк2= 3,5

P =0,5