Способ моделирования трофической раны в эксперименте


 


Владельцы патента RU 2510083:

Зинатуллин Радик Медыхатович (RU)
Гизатуллин Тагир Рафаилович (RU)

Изобретение относится к экспериментальной медицине. Иссекают кожу до поверхностной фасции в виде круга диаметром 20 мм, после чего по краям раны накладывают кисетный шов. Формируют кожно-фасциальные узловые швы. На поверхности дна раны рассекают поверхностную фасцию перпендикулярными разрезами с образованием ячеек размерами 5×5 мм. Способ позволяет моделировать трофические раны с воспроизведением условий локальной гипоксии и нарушения микроциркуляции. 1 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине, хирургии, и предназначено для получения модели трофических ран в эксперименте.

Выяснение закономерностей репаративной регенерации различных повреждений кожи при остром и хроническом воспалении - одна из актуальных проблем современной биологии и медицины. Известны воспроизводимые модели трофической язвы. В эксперименте на кроликах породы шиншилла отработана воспроизводимая модель трофической язвы с развитием гнойного процесса в ране. В эксперименте животные разделяются на 3 группы: 1 группа контроля - язва без лечения, 2 группа контроля -лечение язвы традиционными методами, 3 группа наблюдения - аппликация на язву оригинальной композиции, содержащей аллогенные прогениторные клетки. На 1,3,5,7,10 и 15 сутки измеряли площадь раневой поверхности, выполняли биопсию из раны. Полученный материал окрашивали гематоксилином и эозином, Ki-67, CD-95.

Оценка результатов: в группе наблюдения, начиная с 1 суток, определяется отграничение раневого дефекта с формированием демаркационного вала и выраженной лимфогистиоцитарной инфильтрацией тканей язвы. Выявлены существенные отличия по количеству носителей маркеров Ki-67, CD-95 в группах контроля и группе наблюдения. По мнению авторов, это связано с местным действием аллогенных прогениторных клеток, которые обеспечивают антибактериальный эффект в ране в фазу воспаления. Продолжительность фаз воспаления, пролиферации и эпителизации сокращается в 3-4 раза по сравнению с контролем. (Суховей Ю.Г., Цирятьева С.Б. Репаративная регенерация трофических язв при использовании аллогенных прогениторных клеток. НИИ клинической иммунологии СО РАМН Тюменский филиал. Материалы Московской международной конференции «Биотехнология и медицина», 14-17 марта 2006 http://www.cmbt.su/ms/science/science65.html)

Также явления трофических ран наблюдались при экспериментальном сахарном диабете при введении крысам аллоксана и перевязки подвздошной артерии.

Методика операции в эксперименте. Крыса неподвижно фиксировалась. Освобождался живот и внутренняя поверхность бедра от волосяного покрова. Поверхность кожи обрабатывалась спиртовым раствором хлоргексидина. Проводилась перевязка общей подвздошной артерии. Формировалась язва диаметром 1,5 см скальпелем. В дальнейшем проводился ежедневный мониторинг состояния микроциркуляции в зоне поражения с помощью доплеровской флоуметрии. На 7 сутки показатели микроциркуляции были такими же, как у больных с трофическими язвами при хронических облитерирующих заболеваниях артерий нижних конечностей [http://medical-diss.com/medicina/kompleksnoe-lecheme-bolnyh-s-troficheskimi-yazvami-pri-obliterimyuschih-zabolevaniyah-arteriy-nizhnih-konechnostey-i-sa].

Известен способ изучения влияния аллогенных дермальных фибробластов в коллагеновом геле на процессы заживления ран с выполнением экспериментального исследования на крысах. В данном эксперименте используются крысы линии Wister, самцы массой 180-200 грамм. У животных создавалась экспериментальная модель длительно незаживающей кожной раны. В условиях операционной после предварительного сбривания шерсти и обработки спины крысы раствором йода, под ингаляционным наркозом парами эфира в сочетании с внутривенной анестезией тиопенталом натрия, проводилось оперативное вмешательство. Острым путем (скальпелем) иссекался полнослойный кожный лоскут по вертебральной линии спины крысы, ближе к шейному отделу. Производилось иссечение кожи и подкожной клетчатки до фасции с формированием раны диаметром 3,5 см. Для предотвращения контракции раны и отграничения краевой эпителизации по периметру раны подшивали полихлорвиниловое кольцо диаметром 3,5 см. Кольцо фиксировали к краям раны 5-8 узловыми швами на всю толщину кожи. В центр дна раны узловым швом подшивали аутодермотрансплантат для оценки процесса эпителизации. Над кольцом фиксировали защищающую рану асептическую марлевую повязку. Животных рассаживали по одному или малыми группами для предотвращения нарушения целостности повязки [http://www.dissercat.com/contenVispolzovanie-allogennykh-fibroblastov-v-kompleksnom-lechenii-bolnykh-troficheskimi-yazvami-v].

Однако данный способ предназначен для лечения только мелких линейных порезов, не осложненных гнойно-воспалительным процессом. Используемые препараты токсичны и недостаточно эффективны. Кроме того, в этом способе невозможно контролировать течение раневого процесса под пленкой, не исключено развитие мацерации и анаэробной инфекции под газо- и водонепроницаемой пленкой.

Известен способ моделирования гнойных ран, заключающийся в том, что проводят неполное выбривание поверхности кожи для моделирования раны таким образом, чтобы остался квадратный участок волос размером 2х2 см в межлопаточной области, затем выполняют Н-образный разрез с длиной продольного сечения 2 см, в поперечном направлении два разреза длиной 2 см каждый, отсепаровывают образовавшиеся кожные лоскуты, покрытые волосами, вправо и влево с последующим раздавливанием зажимом Кохера дна раны, вворачивают внутрь раны кожные лоскуты, покрытые волосами, и накладывают герметичные узловые лигатуры за основания кожных лоскутов с последующим иссечением хирургическим путем образовавшихся швов совместно с кожными лоскутами, отступая на 2-3 мм в латеральные стороны двумя параллельными разрезами от точек выхождения лигатурных стежков [заявка РФ 93031608, 1995 г.].

Известен способ лечения инфицированных ран в эксперименте, в ходе его выполнения сначала получают модель гнойной раны следующим образом. После предварительной обработки кожи в асептических условиях, под наркозом, на выбритом от шерсти участке кожи в межлопаточной области у крыс иссекают кожу с подкожной клетчаткой в виде квадрата 2×2 см (400 мм2) по контуру. Края и дно раны раздавливают зажимом Кохера. В рану вносят марлевый тампон с взвесью суточной культуры полиантибиотикорезистентного клинического штамма золотистого стафилококка в дозе 2 млрд. микробных тел в 1 мл физиологического раствора. Рану у животных контрольной и опытной групп закрывают марлевой повязкой, смоченной изотоническим раствором, заклеивают пластырем во избежание подсыхания раны. У животных в межлопаточной области формируется абсцесс со всеми характерными признаками гнойного воспаления: отмечается отек и гиперемия кожи в области нанесения раны, припухлость, у некоторых животных выделяется гной. С целью предупреждения контракции раны, а также для стандартности условий лечения к краям раны подшивают металлическую рамку, соответствующую размерам раны. Данный способ моделирования трофической раны взят за прототип.

Учитывались следующие параметры течения раневого процесса:

наличие и характер воспалительной реакции, состояние краев и дна раны, сроки очищения раны от некротических тканей и появления грануляций, характер грануляционной ткани, сроки начала эпителизации ран. Для изучения скорости заживления ран вторичным натяжением использовали планиметрический метод Л.Н.Поповой, основанный на регистрации скорости уменьшения раневой поверхности во времени. Процент уменьшения площади раны за сутки определяли по формуле, где: S - площадь раны при предыдущем измерении; Sn - площадь раны при последующем измерении; t -число дней между предыдущим и последующим измерениями [патент РФ №2460553,2012 г.].

Этиологию и патогенез трофической язвы можно представить в виде пирамиды, на вершине которой тяжелый раневой сепсис и синдром полиорганной дисфункции, а в основании - множество врожденных и приобретенных заболеваний и травм, запускающих различные патологические процессы на тканевом (ишемия, гипоксия), микроциркуляторном (микротромбозы и сладж форменных элементов крови, экстравазация белка в перивазальное пространство с накоплением фибрина в тканях и с образованием «фибриновых манжет» вокруг капилляров, что усугубляет метаболические нарушения в тканях, стимулируя эпидермальный некроз) и клеточном (активизация лейкоцитов с выбросом ими лизосомальных ферментов) уровнях.

Дополнительно происходят локальные и системные сдвиги, формирующие синдром гипервязкости крови. В ответ на выраженную локальную гипоксию тканей в области трофической венозной язвы активируются процессы свободнорадикального перекисного окисления липидов, приводящие к системному истощению с развитием цитокинопосредованного повреждающего воздействия на ткани дистальных сегментов конечности. В результате возникновения первичного аффекта нарушается барьерная функция кожи. Повреждение ее слоев сопровождается некрозом мягких тканей и массивным экссудативным процессом. В дальнейшем происходит быстрая бактериальная контаминация трофической язвы, которая в ряде случаев может приобретать генерализованный характер (http://www.rmj.ru/articles 6924.htm).

Имеющиеся в арсенале исследователей экспериментальные модели трофических язв и ран не учитывают полностью патогенез, связанный с гемической ишемией и гипоксией на тканевом уровне, а также нарушения микроциркуляции вследствие образования микротромбозов, сладж форменных элементов крови, экстравазации белка в перивазальное пространство с накоплением фибрина в тканях и образованием «фибриновых манжет» вокруг капилляров, что вызывает метаболические нарушения в тканях, препятствуя заживлению. Наличие локальной гипоксии тканей в области трофической раны активирует процессы свободнорадикального окисления и перекисного окисления липидов, приводящие к системному истощению с развитием цитокинопосредованного повреждения тканей. Кроме того, модели трофических ран не содержат в себе нарушений барьерной функции кожи, а повреждение ее слоев происходит посредством иссечения некоторой площади и глубины ткани.

Таким образом, предложенные модели трофических ран являются по происхождению острыми ранами, в них отсутствуют основные звенья патогенеза: гипоксия и ишемия, применяемые при этом удерживающие приспособления и швы всего лишь обеспечивают несоединение краев ран, при этом характеристика периферического кровотока и микроциркуляции не изменяется и позволяет этой острой ране зажить самостоятельно.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа моделирования трофической раны в эксперименте с учетом наличия локальной гипоксии и нарушения микроциркуляции.

Технический результат - повышение точности модели трофической раны за счет учета наличия локальной гипоксии и нарушения микроциркуляции.

Сущность изобретения поясняется чертежом, на котором схематично изображен предлагаемый способ.

Предлагаемый способ моделирования трофической раны в эксперименте осуществляется следующим образом. После предварительной обработки кожи в асептических условиях, под наркозом, на выбритом от шерсти участке кожи в межлопаточной области у крыс 1 иссекают кожу до поверхностной фасции в виде круга (что приближено к форме клинического проявления трофической раны) диаметром 20 мм, площадью 314 мм. По краям раны накладывают кисетный шов 2 для создания картины нарушения микроциркуляции. В целях удержания краев раны и предотвращения их сближения накладывают кожно-фасциальные узловые швы 3. На поверхности дна образованной раны производят рассечение поверхностной фасции поперечными и продольными, взаимоперпендикулярными разрезами, которые образуют ячейки 4 размерами 5×5 мм (см. чертеж).

Рану у животного закрывают марлей, смоченной антисептическим раствором, поверх накладывается асептическая повязка.

Предлагаемый способ моделирования позволяет формировать трофическую рану в эксперименте со всеми характерными для нее признаками: отек, гиперемия кожи в области раны, нарушенная микроциркуляция, локальная гипоксия, серозное отделяемое.

В доступных источниках научно-медицинской и патентной информации авторами не был найден тождественный способ моделирования трофической раны в эксперименте. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию "Новизна".

Исследованиями авторов доказано, что предлагаемый способ моделирования трофической раны в эксперименте повышает точность модели за счет учета наличия локальной гипоксии и нарушения микроциркуляции. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию "Изобретательский уровень".

Данным способом были смоделированы трофические раны на 12 экспериментальных животных (беспородных крысах). Во всех случаях был достигнут указанный технический результат.

Пример. Для моделирования трофической раны в эксперименте для оценки динамики развития воспалительных процессов - отека, гиперемии кожи и серозного отделяемого в области раны - и местных трофических нарушений - нарушения микроциркуляции и локальной гипоксии - производили предварительную обработки кожи экспериментального животного (лабораторная крыса) в асептических условиях, под наркозом, на выбритом от шерсти участке кожи в межлопаточной области иссекали кожу до поверхностной фасции в виде круга диаметром 20 мм, площадью 314 мм. Затем по краям раны наложили кисетный шов для создания картины нарушения микроциркуляции, что позволило уменьшить нормальное кровоснабжение, а именно приток артериальной крови в область моделируемой трофической раны, нарушение венозного оттока в вышеуказанной области и нарушение лимфатической дренажной функции. Данная манипуляция привела к местному отеку тканей, местной гиперемии, увеличению серозного отделяемого с поверхности смоделированной раны. Признаком гипоксии в моделируемой ране являлось изменение цвета с красного на бледно-розовый и наличие полнокровных венозных сосудов.

Для удержания краев раны и предотвращения их сближения накладывали кожно-фасциальные узловые швы. На поверхности дна образованной раны произвели рассечение поверхностной фасции поперечными и продольными, взаимоперпендикулярными разрезами, которые образовали ячейки размером 5×5 мм для создания картины трофических изменений не только кожи, но и части поверхностной фасции, а также нижележащих тканей.

Рану у животного закрывали марлей, смоченной антисептическим раствором - 4% водным раствором борной кислоты, поверх наложили и фиксировали асептическую повязку.

Предлагаемый способ легко воспроизводим и при его использовании достигается указанный технический результат. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «Промышленная применимость».

Способ моделирования трофической раны, включающий иссечение кожи в межлопаточной области у крыс в виде геометрической фигуры, отличающийся тем, что иссекают кожу до поверхностной фасции в виде круга диаметром 20 мм, после чего по краям раны накладывают кисетный шов, а также кожно-фасциальные узловые швы, затем на поверхности дна образованной раны производят рассечение поверхностной фасции поперечными и продольными, взаимоперпендикулярными разрезами с образованием ячеек размером 5×5 мм.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к устройствам для дисперсного анализа радиоактивных аэрозолей, а также к средствам обучения в медицине, оно предназначено для моделирования фракционного осаждения аэрозольных частиц в отделах респираторного тракта человека.
Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к токсикологии. Исследуют поведение потомства белых крыс, подвергшихся воздействию токсического вещества, с помощью теста «открытое поле».
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для изучения патогенетического механизма развития молниеносного сепсиса с целью поиска новых патогенетических и этиотропных методов лечения сепсиса.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, стоматологии и патофизиологии. Моделирование инфицированной раны слизистой оболочки полости рта проводят на внутренней поверхности нижней губы животного по средней линии.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам профилактики развития опухолей у экспериментальных животных с высокой частотой спонтанного опухолеобразования.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии кожного лоскута на питающей ножке. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и хирургии, и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого лабораторным животным на вторые сутки эксперимента моделируют ишемию мышц голени.
Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней внутрибрюшинным введением L-нитроаргининметилового эфира в дозе 25 мг/кг.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения механизмов коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных.

Изобретение относится к области использования растительных объектов для контроля токсического эффекта нескольких лекарственных препаратов. Способ включает комплексную оценку морфофизиологических нарушений, наблюдаемых в фитотестах. Тестируют каждый препарат отдельно, а также их жидкие смеси в различной концентрации. Морфофизиологические нарушения выявляют на семенах кресс-салата (Lepidium sativum). При этом показателями морфофизиологических нарушений служат снижение всхожести семян, снижение средней общей длины проростков и изменение среднего сухого веса проростков. После статистической обработки результатов прогнозируют возможный токсический эффект смеси лекарственных препаратов, что позволяет проводить предварительный, перед клиническими испытаниями, скрининг лекарственных препаратов. 6 пр., 6 табл., 1 ил.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения средств, предназначенных для коррекции ишемии. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента. Ресвератрол вводят внутрижелудочно в суточной дозе 2,0 мг/кг с первых суток эксперимента каждые 46 часов. Способ, являясь нетоксичным с минимальным числом противопоказаний, обеспечивает увеличение выживаемости кожного лоскута в условиях редуцированного кровообращения за счет активации процесса прекондиционирования. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования иммунозависимого невынашивания беременности для изучения иммунологии и иммунопатологии беременности, оценки эффективности доклинических испытаний способов лечения и профилактики невынашивания беременности иммунной этиологии. Способ включает введение самкам лабораторных мышей N-ацетил-β-1-О-гептилмурамил-L-аланил-D-изоглутамина внутрибрюшинно в дозе 20 мкг в 0,1 мл 0,9% раствора NaCl на 1 животное. Введение осуществляют на 5-е сутки беременности в период имплантации бластоцисты и на 7-е сутки в начале периода плацентации. Способ обеспечивает высокий уровень резорбции эмбрионов, высокую воспроизводимость модели и возможность использования как линейных, так и нелинейных животных. 3 пр., 3 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и касается способов управляемого снижения агрегационной активности тромбоцитов in vitro. Для этого в плазму, содержащую 200-220 тыс./мкл тромбоцитов, непосредственно после ее получения, вводят мексидол. При этом мексидол используют в концентрации от 0,1 до 0,8 мг/мл инкубационной смеси. Инкубацию проводят в течение 10-15 минут при комнатной температуре. Способ обеспечивает агрегационную активность тромбоцитов до необходимой экспериментатору величины.

Изобретение относится к экспериментальной медицине. Формируют сплошной свободный полнослойный кожный лоскут размером 1,5 см у крысы. Иссекают фасцию, покрывающую раневую поверхность, с обнажением подлежащей мышцы на прежнем ложе. Фиксируют по противолежащим краям лоскут к краю кожи. Сшивают между собой свободные края кожи. Через 8-9 суток разъединяют и разводят в стороны сросшиеся над лоскутом края кожи. Способ обеспечивает оптимальные условия приживления кожного лоскута, позволяет достигнуть полного контакта с подлежащими тканями, улучшения развития микроциркуляторного русла, без применения медикаментозных средств, стимулирующих ангиогенез. 1 пр. 9 ил.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии в условиях редуцированного кровообращения. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента. L-норвалин вводят внутрижелудочно в суточной дозе 10,0 мг/кг с первых суток эксперимента каждые 46 часов эксперимента. Способ обеспечивает увеличение выживаемости кожного лоскута в условиях редуцированного кровообращения за счет активации процесса прекондиционирования фармакологическим препаратом. 1 табл.
Изобретение относится к судебной медицине и может быть использовано для определения давности наступления смерти по морфологическим изменениям гнилостно измененных спаек. Для этого при судебно-медицинском исследовании трупа производят забор спаек и участка мышечной ткани брюшной стенки из места прикрепления спайки. Затем с образцов этих тканей получают гистологические срезы, которые окрашивают гематоксилином и эозином, трихромом по Масону и Зербино. Далее проводят микроскопическое исследование окрашенных срезов. Если в срезах определяют потерю клеточного состава в окраске гематоксилином и эозином, при сохранении окраски мышечных клеток по Зербино и окрашивании коллагеновых и ретикулярных волокон в окраске трихромом по Масону, то устанавливают давность наступления смерти от 7 до 10 суток. Если исследуемые ткани дополнительно теряют способность к окрашиванию мышечных клеток по Зербино, то устанавливают давность наступления смерти в период с 10 до 14 суток. Если в срезах не окрашиваются ретикулярные волокна, при сохранении окраски коллагеновых волокон трихромом по Масону, то устанавливают давность наступления смерти свыше 14 суток. Способ повышает точность определения давности наступления смерти до 14 суток посмертного периода.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается разработки способов лечения невынашивания беременности и других заболеваний матки, связанных с несостоятельностью эндометрия. Для этого в экспериментальных условиях в стенку матки крысы, находящейся в состоянии псевдобеременности, вводят суспензию, содержащую 300 тысяч стволовых клеток эндометрия, выделенных из менструальной крови женщины. Затем крысе проводят подкожное введение прогестерона в дозе 2 мг на грамм веса животного. Способ обеспечивает стимуляцию образования децидуальной оболочки эндометрия, при этом создавая модель управления децидуальной реакции при помощи трансплантации стволовых клеток, в т.ч. человеческого происхождения.2 табл.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано как способ моделирования первичного склерозирующего холангита. Для этого крысе вводят пикрилсульфоновую кислоту в просвет проксимального отдела слепой кишки в дозе 0,07-0,15 мг/кг и в сигмовидную кишку в дозе 0,02-0,05 мг/кг. Интервал между введениями составляет 45-60 минут. Способ обеспечивает воспроизведение комплекса клинических проявлений заболевания. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и предназначено для повышения устойчивости организма к острой гипоксии в эксперименте. В первый, третий и пятый день тренировки лабораторному животному вводят амтизол в дозе 25 мг/кг. Во второй, четвертый и шестой день животным создают умеренную гипобарическую гипоксию путем «подъема на высоту 5000 метров» с экспозицией 60 минут. Способ позволяет увеличить продолжительность жизни животных при тяжелой гипобарической гипоксии как в период срочной, так и в период долгосрочной адаптации к гипоксии. 2 табл., 3 пр.
Наверх