Штамм гриба реniсilliuм ruвruм - продуцент пигмента - цветового аналога шток розы

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается штаммов, рекомендуемых для производства пищевого~красного красителя - аналога шток розы. Цель изобретения - получение штамма с высокой выработкой пигмента. Штамм Pentcllllum rubrum ВКПМ F-413 получен путем генетико-селекционных приемов, а именно обработкой мутагенами и отбором, из штамма PenlcMlium rubrum ВКМ 2625 - продуцента красного пигмента. Новый штамм обладает более высоким уровнем пигментной активности и позволяет получать.в 3-4 раза больше целевого продукта по сравнению с известным ранее штаммом. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4731877/13 (22) 22.08.89 (46) 30,01.92. Бюл, 1Ф 4 (71) Среднеазиатский научно-исследовательский и проектно-конструкторский институт пищевой промышленности (72) P.À.Àòàêóçèåâà и Х.Т,Саломов (53) 667.211.2/6 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N. 988846; кл, С 09 В 61/00. 1981. (54) ШТАММ ГРИБА PENICILLIVM RUBRUM — П РОДУЦЕ НТ ПИ ГМЕ НТА — ЦВ ЕТОВО ГО

АНАЛОГА ШТОК РОЗЫ

Изобретение относится к биотехнологии и касается штаммов, рекомендуемых для производства пищевого красного красителя: — аналога шток розы.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм

Penlcilllum rubrum ВКМ 2625, полученный иэ ВКМ, Института биохимии и физиологии микроорганизмов AH СССР.

Недостатком этого штамма является его сравнительно низкая продуктивность.

Цель изобретения — получение штамма с высокой выработкой пигмента.

Новый штамм Penfcilllum rub rum M-180 получен с использованием традиционных генетико-селекционных приемов (ультрафиолетовое облучение с последующим отбором} из штамма Penfcf ilium rubrum BKM

2625 — продуцента красного пигмента. Полученный штамм гриба Penlcf ilium rubrum M180 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов под F413,, БЦ,„1708820 А1 (я)5 С 09 В 61/00, С 12 N 1/14 (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается штаммов, рекомендуемых для производства пищевого красного красителя — аналога шток розы. Цель изобретения — получение штамма с высокой выработкой пигмента. Штамм Peniclllium rubrum ВКПМ

F-413 получен путем генетико-селекционных приемов, а именно обработкой мутагенами и отбором, из штамма Penlcf ilium

rubrum ВКМ 2625 — продуцента красного пигмента. Новый штамм обладает более высоким уровнем пигментной активности и позволяет получать.в 3-.4 раза больше целевого продукта по сравнению с известным ранее штаммом; 1 табл.

Ю

Штамм Peofcf ilium rubrum ВКПМ F-413 характеризуется следующйми культурноморфологическими и физиолого-биохимиче1 скими признаками. г

Культурно-морфологические признаки, Штамм получен путем обработки

PenfciIllum rubrum ВКМ 2625 УФ-облучением с помощью бактерицидной лампы

2537А в течение 180 с с последующим отбором колоний с интенсивной пигментацией.

Для выделения нового штамма использована пептонно-глюкозная среда, г/л вод.ы:

Агар-агар 13.0

Пептон 10.0

Глюкоза 40,0

Штамм идентифицирован по Пидопличко Н.М.

Характеристика колоний на пептонноглюкоэной среде с агаром, Рост колоний при 28 С (10-суточная культура) обильный, размер 4 — 5 см, круглые. красного цвета, с обратной стороны круг1708820 лые, структура волокнистая. В среду выделяет красный пигмент, поверхность колоний розовая, биомасса темно-красная.

Пептонно-глюкозная среда беэ ага ра (2суточная культура) при 28 С. 5

Рост без-встряхивания, на поверхности среды образует пленку беэ помутнения. При встряхивании на качалке среда мутнеет.

При выращивании на агаризованной среде

Чапека (2-суточная культура) при 28 С) об- 10 разует оранжевые круглые колонии, диаметром 4-5 см, Поверхность колоний бархатистая, Типы вегетативного тела — мицелий, Субстратный мицелий на пептонно- 15 глюкозной среде с агаром красный, размер

2,0 1,8 мкм. Мицелий короткий, сморщенный, ветвистый.

Воздушный мицелий на пептонно-глюкозной среде с агаром розовый, размер 2,0 20

1,8 мкм. Размножается спорами. В каждой . метуле 3 —.8 конидий. Конидии круглые с гладкой поверхностью,:размеры конидий

2,2 2,8 мкм. Конидиеносцы до 200 2,2-3 мкм, гладкие, отходят от субстрата или от воз- 25 душных гиф (мицелий), собраны в тяжи. Кистички двухъярусные.

Физиолого-биохимические признаки.

Дыхание аэробное. Температура роста: максимальная 37 С; минимальная 22 С; оп- ЗО тимальная 28 С, рН среды: максимум 6,8; минимум 6.0; оптимум 6,2.

Штамм обладает слабым спектром действия. B зоне диффузии культуральной жидкости вирулентный фаг не содержится. 35

Утилизацию источника углерода изучали на фоне основной среды: 0,5;/ пептона и

0,1 5 KzHP04, 2 мл 1.6 -ного спиртового раствора бромкреэол пурпура. При рН 6,8 индикатор имеет пурпурный цвет, при 5,2 40 желтый.

Отношение штамма к источникам углерода и азота ("+" — усваивает; "-" — не усваивает):

Источник углерода 45

Глюкоза +

Фруктоэа

Мальтоэа +

Маннит +

Арабиноза

Сорб ит

Дул ьцит

Яблочная кислота +

Янтарная кислота

Щавелевая кислота 55

Источник азота

Пептон +

Мочевина +

Усвоение азота минеральных солей + (сернокислый аммоний)

Рост на без азотистой среде

Другие характерные физиологические особенности обмена: крахмал гидролизует, желатину не разжижает, молоко не пептонизирует. Штамм обладает непатогенными свойствами, Рост: развитие штамма ингибируется под действием толуола, хлороформа, фенола, спирта, ультрафиолетовых лучей, а также при нагревании выше 1000С в течение 20

Штамм Penicilllvm rubrum ВКПМ F-413 отличается от прототипа по морфологии гиф, длина которых резко укорачивается.

Мицелий сморщенный,-гранулярный, Пример. Посевной материал получают выращиванием в колбах в жидкой среде. следующего состава, г/л: КгНРО4 1,0;

Mg SO< 0,5; МэИОз 3,0; KCl 0.5; FeS04 следы; сусло пивное 7 Б 1,0 л.

Состав перемешивают, измеряют рН (6,2). Приготовленную питательную среду разливают в колбы емкостью 750 мл по 100 мл, стерилизуют в автоклаве при 0,75 атм в течение ЗО мин, охлаждают до 25 С, Посевным материалом для колбы служит 2-суточная культур". Для этого культуру выращивают нэ сусле-агаре в пробирке. Количество посевной культуры нормируется в соответствии с требованием. В колбы объемом 750 мл с 100 мл выше описанной среды и роиз водится смыв одного кося ка. Колбы ставят при 200 об/мин и выращивают при

28 С в течение 4 сут. Чистая культура как посевной материал используется для засева посевного аппарата в количестве 57ь от объема питательной среды. Затем культивируют 5 дней и передают в спецсосуды (лотки), содержащие питательную среду со следующим составом, г/л: К2НРО4 1,0; МцЯО4 0,5;

МэйОз 3,0; KCl 0,5.; FeSO4 следы; рисовая мучка 200,0; сусло пивное 7 Б 1,0 л.

Минеральные соли растворяют в сусле и замэчивают рисовую мучку. Способ культивирования в спецсосудах поверхностный.

Продолжительность, культивирования 8 сут при 28 С. Образовавшаяся пигментная масса служит источником для производства пищевого красителя.

Пример 2. Культивирование предлагаемого штамма на среде прототипа для сравнительного анализа их пигментной активности.

Штаммы ВКПМ F-413 и ВКМ 2625 выращивали в пробирках со скошенной пептонно-глюкозной средой с агаром 2 сут и в колбы (объем 300 мл., содержание среды 50 мл) производили с них смыв. Способ выращивания поверхностный, при 28 С, в тече1

1708820 тивности и выработки пигмента при проверке штаммов ВКПМ F-413 и ВКМ 2625.

Составитель Р.дтакуэиева

Редактор Л.Веселовская Техред М.Моргентал Корректор С.Черни

Заказ 402 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ние 12 сут. Каждые два дня onðåäåëÿã è пигментную активность обоих штаммов. Красящее вещество извлекали из 50 мл среды 100 мл 96 -ного спирта и 1 мл пигментно-спиртового раствора доводили до 100 мл и измеряли на КФК-2 оптическую плотность раствора при 490 нм, используя элемент б мм.

Оптическая плотность 100 мл пигментно-спиртового раствора 12-суточной культуры прототипа равнялась 9-,5, а предлагаемого штамма — 13,2.

В таблице приведены данные сопоставительного анализа уровня пигментной акКак видно из таблицы. предлагаемый

5 штамм ВКПМ F-413 вырабатывает в 3-4 раза больше красящего вещества, чем штамм

ВКМ 2625(прототип), причем за периодпроведения опытов (1 год) не наблюдалось ни одного случая падения пигментной активно10 сти.

Формула изобретения

Штамм гриба Penlclllium rubrum ВКПМ

F-413 — продуцент пигмента — цветового аналога шток розы,