Способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства

Авторы патента:

 


Владельцы патента RU 2616898:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и вирусологии и может быть использовано специалистами, работающими в области производства медицинских и ветеринарных биопрепаратов. Изобретение раскрывает способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства, отличающийся тем, что в лунки планшетов вносят моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с pH 7,2-7,4, инкубируют, добавляют 1,0-1,5% раствор бычьего сывороточного альбумина в 0,1-0,2 фосфатном буфере с pH 7,2-7,4 с добавлением в него 0,1-0,25% Tween-20, инкубируют, вводят испытуемые вакцины и референс-вакцину, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, отмывают лунки планшетов 0,1-0,2 фосфатным буфером с pH 7,2-7,4, содержащим 0,1-0,8% Tween-20 с последующим добавлением конъюгата моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена в рабочем титре 1:5000-6000, инкубируют, добавляют 100-120 мкл на лунку однокомпонентного субстратного раствора ТМБ-теста с экспозицией 10-15 минут, после чего добавляют в каждую лунку по 50-60 мкл 0,5-0,6 М раствор H2SO4 и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 450 нм, а иммуногенную активность вакцин против бешенства определяют на основании сопоставления сигналов оптической плотности раствора исследуемого образца, и сравнения его с сигналом оптической плотности раствора референс-вакцины. Изобретение направлено на ускорение и упрощение определения иммуногенной активности вакцины против бешенства. 2 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии и вирусологии и может быть использовано специалистами, работающими в области производства медицинских и ветеринарных биопрепаратов.

Известен способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства, который включает однократное интраперитониальное введение белым мышам пяти разведений референтной вакцины и исследуемых вакцин (10 голов на каждую вакцину), отбор крови и получения сывороток крови на 14 сутки после иммунизации, исследования в сыворотках крови титров антирабических антител методом ИФА, построение калибровочной кривой с показателями индексов иммуногенности разведений референс-вакцины (в МЕ/доза) и соответствующих титров антирабических антител (в МЕ/см3), полученных при исследовании сывороток крови вакцинированных референтной вакциной мышей, проекцию значений титров антирабических антител, полученных при исследовании сывороток крови мышей, вакцинированных исследуемыми вакцинами, в калибровочную кривую, сравнение значений и определения иммуногенной активности исследуемых вакцин, отличающихся тем, что определение иммуногенной активности осуществляют путем сравнения поствакцинальных титров антирабических антител, полученных после введения пяти разведений референс-вакцины и исследуемой вакцины с использованием разработанного шаблона [HIKITOBA А.П. Формування антирабiчного Iммунiтету та вдосконалення методiв контролю iммуногенностi iнактивированних антирабiчных вакцин: дисс.канд. веет.наук 16.00.03 - ветеринарна мiкробiологiя, епiзоотологiя, iнфекцiйнi хвороби та iмунологiя НIКITОBА АЛIНА ПЕТРIВНА. - 2015. - Киiв - 133 с.].

Недостатком этого способа является длительность и сложность постановки опыта, использование мышей, а не целевых животных, обнаруживаемой низкой корреляцией теста NIH и уровнем вируснейтрализующих антител у иммунизированных целевых животных.

Известен также способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства [метод NIH (United States National Institutes of Health)]. Данный тест был разработан в США в 1953, рекомендованный ВОЗ для определения иммуногенной активности инактивированных антирабических вакцин и в неизмененном виде используется до сих пор. Несмотря на широкое использование этого теста, рядом авторов отмечены определенные недостатки постановки этого метода: интрацеребральное заражение мышей не воспроизводит естественный путь попадания вируса в организм животного, а сам тест предусматривает 2 вакцинации с интервалом в 7 дней, что может маскировать настоящие результаты теста и завышать результаты в вакцинах с низкой иммуногенной активностью [Kulpa-Eddya J. Non-animal replacement methods for veterinary vaccine potency testing: state of the science and future directions / J. Kulpa-Eddya, G. Srinivasb, M. Halderc [et al.] // Procedia in Vaccinology. - 2011. - Vol. 5. - P. 60-83; Kumar M. Development of alternative approaches for in-process quality control of rabies vaccine / M. Kumar, R.P. Singh, B. Mishra [et al.] // Advances in animal and veterinary sciences. - 2014. - Vol. 2 (3). - P. 164-170; Nedosekov V. Critical review of the NIH-method for testing potency of inactivated rabies vaccines / V. Nedosekov // Ветеринарна медицина . - 2013. - №10. - С.26-29].

Недостатком этого способа также является его длительность (более 14 дней) и сложность постановки опыта, использование животных. К этому следует добавить риск опасности для персонала при работе с живым вирусом бешенства, который относится к возбудителям II группы патогенности. Также существуют проблемы, связанные с гуманным обращением с животными, так как интрацеребральное введение вируса «жестокое», как и сам ход болезни.

Техническим результатом изобретения является упрощение и ускорение способа.

Технический результат достигается в способе определения иммуногенной активности вакцины против бешенства путем исследования ее тем, что в лунки полистирольных планшетов вносят моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с pH 7,2-7,4 из расчета 1,0-2,0 мкг на лунку, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, затем добавляют 1,0-1,5% раствор бычьего сывороточного альбумина в 0,1-0,2 фосфатном буфере с pH 7,2-7,4 с добавлением в него 0,1-0,25% Tween-20, инкубируют при комнатной температуре 30-40 мин, далее в лунки полистирольных планшетов вводят испытуемые вакцины и референс-вакцину в разведениях от 1:10 до 1:320 в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с pH 7,2-7,4, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, далее пятикратно отмывают лунки полистирольных планшетов 0,1-0,2 М фосфатным буфером с PH 7,2-7,4, содержащим 0,1-0,8% Tween-20 с последующим добавлением конъюгата моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена в рабочем титре 1:5000-6000, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, затем добавляют 100-120 мкл на лунку полистирольных планшетов однокомпонентного субстратного раствора ТМБ-теста с экспозицией 10-15 минут, после чего добавляют в каждую лунку по 50-60 мкл 0,5-0,6 М раствор H2SO4 и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 450 нм, а иммуногенную активность вакцин против бешенства определяют на основании сопоставления сигналов оптической плотности раствора исследуемого образца, и сравнения его с сигналом оптической плотности раствора референс-вакцины.

Известен бычий сывороточный альбумин (сокращенно БСА, англ. Bovine Serum Albumin, BSA) - белок плазмы крови крупного рогатого скота с молекулярной массой 69000 ДHYPERLINK “https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%94%D0%B0%D0%BB%D1%8C%D1%82%D0%BE%D0%BD"a. одноцепочечный, состоящий из 607 аминокислотных остатков, /https://ru.wikipedia.org/wiki/Бычий_сывороточный_альбумин/.

Полисорбат 20 (международное название - Tween-20). Химическая формула: C58H114O26. Это прозрачная вязкая жидкость от желтого до желто-зеленого цвета. Плотность примерно 1,1 г/мл. Растворяется в растительном масле. Используется как основа для растворения эфирных масел для парфюмерных композиций на водной основе, эффективен даже при высоких концентрациях эфирных масел. Используется в спреях-репеллентах, спреях для тела, продуктах для ванн и освежителях воздуха, в качестве стабилизатора и регулятора вязкости в шампунях, жидком мыле и кондиционерах. Используется также, как и полисорбат 80, в скрабах из сахара и соли. [Ayorinde FO, Gelain SV, Johnson JH Jr, Wan LW. (2000). "Analysis of some commercial polysorbate formulations using matrix-assisted laser desoiption/ionization time-of-flight mass spectrometry". Rapid Communications in Mass Spectrometry 14 (22): 2116-2124].

Известен однокомпонентный субстратный раствор (ТМБ-тест), изготовленный в соответствии с ТУ 9389-038-05784466-2013 и предлагаемый к продаже, представляет собой бесцветную жидкость, содержащую стабилизированный водно-органический буферный раствор ТМБ и пероксида водорода. Известен ТМБ - 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида - (Патент РФ №2268253, Композиция для хранения водного раствора 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида (ТМБ) и пероксида мочевины, МПК C07C 211/43, C12Q l/00, опубл. 20.01.2006, Бюл. №02).

Известно использование лунок полистирольных планшетов для проведения иммуноферментного анализа (А.М. Егоров, А.П. Осипов и др. Теория и практика иммуноферментного анализа, М., Высшая школа, 1991. - с.275).

Конъюгат моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, меченный ферментом пероксидазой хрена, готовят в соответствии с "Временной инструкцией по изготовлению и контролю антивидовых иммуноглобулинов, меченных ферментом пероксидазой", утвержденной ГУВ МСХ СССР 9.12.85 ТУ 46-21-78-85 (3) / Патент РФ №2196609, Набор для ретроспективной иммуноферментной диагностики инфекционного ринотрахеита животных, МПК A61K 39/265, G01N 33/569, G01N 33/535, G01N 33/543, опубл. 20.01.2003; А.М. Егоров, А.П. Осипов и др. Теория и практика иммуноферментного анализа, М., Высшая школа, 1991 - с. 271/.

Референс-вакцина производится по технологии, разработанной во «ВНИТИБП» и переданной на ФКП "Щелковский биокомбинат" - СТО-00494189-0042-2010.1. Пухова Н.М. Создание национального отраслевого стандарта имуногенности антирабических вакцин /Н.М. Пухова, А.Я. Самуйленко, И.В. Иванов [и др.] // ж. Ветеринарная медицина. - 2011. - №95. - С. 178/.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы определения иммуногенной активности вакцины против бешенства аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизны».

Все режимы способа осуществимы в промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

На основе данных, полученных при изучении молекулярной структуры вируса бешенства, установлено, что основные антигенные детерминанты, индуцируют защитный иммунный ответ, находятся на гликопротеине, содержание которого коррелирует с иммуногенностью вакцин против бешенства [Pizza А.Т. Effect of the Contents and Form of Rabies Glycoprotein on the Potency of Rabies Vaccination in Cattle / A.T. Piza, K.M.S. Pieri, G.M. Lusa [et al.] // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. - 2002. - Vol. 97. - P. 265-268; Rooijakker E.J.M. Rabies vaccine potency control: comparison of ELISA systems for antigenicity testing / E.J.M. Rooijakker, J.P. Uittenbogaard, J. Groerf // Journal of Virological Methods. - 1996. - Vol. 58. - P. 111-119.]. Поэтому, при оценке качества вакцин Комитет экспертов ВОЗ с 1992 года предлагает использовать альтернативные методы in vitro, которые уже с 1984 совершенствуются для определения содержания антигенов в вакцинах. Данный подход нашел успешное применение для определения концентрации РНК желтой геморрагической лихорадки, человеческого герпес вируса-6 и цитомегаловируса. Однако способы количественного определения вышеприведенных вирусов непригодны для исследования вакцинного материала против бешенства и не могут дать оценку иммуногенности вакцин против бешенства.

Нами впервые предложен способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства на основе определения гликопротеина вируса бешенства при использовании молекулярно-генетических методов. Предложенный способ позволяет сократить время исследования до 3 часов и существенно упростить процесс определения иммуногенной активности вакцины против бешенства, т.е. предложение соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

В лунки полистирольных планшетов вносят моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, в 0,1 М фосфатном буфере с pH 7,2 из расчета 1,0 мкг на лунку, инкубируют 45 мин при комнатной температуре, затем после двукратной отмывки 0,1М фосфатным буфером с pH 7,2-7,4 и с 0,1% Tween-20 добавляют 1,0% раствор бычьего сывороточного альбумина в 0,1М фосфатном буфере с pH 7,2 с добавлением в него 0,1% Tween-20, инкубируют при комнатной температуре 30 мин, двукратно отмывают лунки 0,1М фосфатным буфером с pH 7,2-7,4 с 0,1% Tween-20, далее в лунки полистирольных планшетов вводят испытуемые вакцины и референс-вакцину в разведениях от 1:10 до 1:320 в 0,1М фосфатном буфере с PH 7,2, инкубируют 45 мин при комнатной температуре, далее пятикратно отмывают лунки полистирольных планшетов 0,1М фосфатным буфером с pH 7,2, содержащим 0,1% Tween-20 с последующим добавлением конъюгата моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена в рабочем титре 1:5000. Конъюгат моноклональных антител, специфичный к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена инкубируют 45 мин при комнатной температуре, затем после пятикратной отмывки лунок 0,1М фосфатным буфером с pH 7,2-7,4, содержащим 0,1% Tween-20, добавляют 100 мкл на лунку полистирольных планшетов однокомпонентного субстратного раствора ТМБ-теста с экспозицией 10 минут, после чего добавляют в каждую лунку по 50 мкл 0,5 М раствор H2SO4 и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 450 нм, а иммуногенную активность вакцин против бешенства определяют на основании сопоставления сигналов оптической плотности раствора исследуемого образца, и сравнения его с сигналом оптической плотности раствора референс-вакцины. Иммуногенность исследуемой инактивированной вакцины против бешенства, определенная методом NIH и заявляемым способом составила в международных единицах 3 МЕ/мл.

(Для конъюгации пероксидазы хрена с антителами, моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, переводят в 0,1 М Na-карбонатный буфер, pH 9,5 с помощью обычного диализа или для этой процедуры используют колонки на основе Сефадекса-25 для смены буфера фирмы GE Healthcare (NAP-5, NAP-10, PD-10). Навеску 2 мг пероксидазы растворяют в 0,4 мл бидистиллированной воды. Готовят раствор 0,1М перйодата натрия в бидистиллированной воде, и сразу же добавляют 0,1 мл этого раствора к раствору пероксидазы. Быстро перемешивают, обертывают пробирку с реакционной смесью фольгой (реакция должна проводиться в темноте) и инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре при постоянном перемешивании. Признаком образования активной формы пероксидазы служит изменение окраски раствора фермента с желто-коричневой на зеленоватую. Активированную пероксидазу переводят в буфер пришивки (1 мМ ацетат натрия pH 4,4 на колонке), используя колонку для смены буфера. Далее на 2 мг активированной пероксидазы необходимо взять 1 мг моноклональных антител. Раствор антител к пероксидазе (активированной) добавляется в 0,1 М Na-карбонатном буфере, pH 9,5. Инкубацию реакционной смеси проводят при перемешивании на шейкере в течение 40 минут при +37°C в пробирке, обернутой фольгой. Готовят свежий раствор борогидрида натрия, растворив 2 мг в 0,5 мл бидистиллированной воды. Добавляют 0,1 мл полученного раствора к реакционной смеси и инкубируют 20 мин при +37°C. Конъюгат антител с пероксидазой переводят в буфер хранения натрий-фосфатный буфер (PBS) на колонке для смены буфера или методом диализа - см. А.М. Егоров, А.П. Осипов и др. Теория и практика иммуноферментного анализа, М., Высшая школа, 1991. - с. 271).

Пример 2.

В лунки полистирольных планшетов вносят моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, в 0,2 М фосфатном буфере с pH 7,4 из расчета 2,0 мкг на лунку, инкубируют 60 мин при комнатной температуре, лунки двукратно отмывают 0,2М фосфатным буфером с pH 7,4, содержащим 0,8% Tween-20, затем добавляют 1,5% раствор бычьего сывороточного альбумина в 0,2М фосфатном буфере с pH 7,4 с добавлением в него 0,25% Tween-20, инкубируют при комнатной температуре 40 мин, двукратно отмывают лунки 0,2М фосфатным буфером с pH 7,4, содержащим 0,8% Tween-20, далее в лунки полистирольных планшетов вводят испытуемые вакцины и референс-вакцину в разведениях от 1:10 до 1:320 в 0,2М фосфатном буфере с РН 7,4, инкубируют 60 мин при комнатной температуре, далее пятикратно отмывают лунки полистирольных планшетов 0,2 М фосфатным буфером с pH 7,4, содержащим 0,8% Tween-20 с последующим добавлением конъюгата моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена в рабочем титре 1:6000. Конъюгат моноклональных антител, специфичный к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена инкубируют 60 мин при комнатной температуре, затем после пятикратной отмывки лунок 0,2М фосфатным буфером с pH 7,2-7,4, содержащим 0,8% Tween-20, добавляют 120 мкл на лунку полистирольных планшетов однокомпонентного субстратного раствора ТМБ-теста с экспозицией 15 минут, после чего добавляют в каждую лунку по 60 мкл 0,6 М раствор H2SO4 и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 450 нм, а иммуногенную активность вакцин против бешенства определяют на основании сопоставления сигналов оптической плотности раствора исследуемого образца, и сравнения его с сигналом оптической плотности раствора референс-вакцины. Иммуногенность исследуемой инактивированной вакцины против бешенства, определенная методом NIH и заявляемым способом составила в международных единицах 2,8 МЕ/мл.

Таким образом, заявленное предложение при сохранении чувствительности и точности способа позволяет сократить способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства с 21 суток до 3 часов. Кроме того, способ позволяет исключить работу персонала лабораторий с живым вирусом бешенства штамма «CVS», отказе от использования большого количества животных. Заявляемый способ обеспечивает простоту и безопасность работы.

Способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства путем ее исследования, отличающийся тем, что в лунки полистирольных планшетов вносят моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с рН 7,2-7,4 из расчета 1,0-2,0 мкг на лунку, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, затем добавляют 1,0-1,5% раствор бычьего сывороточного альбумина в 0,1-0,2 фосфатном буфере с рН 7,2-7,4 с добавлением в него 0,1-0,25% Tween-20, инкубируют при комнатной температуре 30-40 мин, далее в лунки полистирольных планшетов вводят испытуемые вакцины и референс-вакцину в разведениях от 1:10 до 1:320 в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с рН 7,2-7,4, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, далее пятикратно отмывают лунки полистирольных планшетов 0,1-0,2 фосфатным буфером с рН 7,2-7,4, содержащим 0,1-0,8% Tween-20 с последующим добавлением конъюгата моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена в рабочем титре 1:5000-6000, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, затем добавляют 100-120 мкл на лунку полистирольных планшетов однокомпонентного субстратного раствора ТМБ-теста с экспозицией 10-15 минут, после чего добавляют в каждую лунку по 50-60 мкл 0,5-0,6 М раствор H2SO4 и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 450 нм, а иммуногенную активность вакцин против бешенства определяют на основании сопоставления сигналов оптической плотности раствора исследуемого образца, и сравнения его с сигналом оптической плотности раствора референс-вакцины.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к оптическим биосенсорам, предназначенным для определения белковых молекул в малых концентрациях. Заявленный флуоресцентный оптический ДНК-биосенсор состоит из подложки, адсорбированной на подложке тонкой пленки комплекса ДНК-белок, причем подложка выполнена из монокристаллического кремния с ориентацией поверхности (100), размером 18×18 мм и толщиной 380±20 мкм, шероховатость рабочей поверхности ≤0,06, а содержание белка в тонкой пленке составляет от 10-15 до 10-9 моль/л.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике. Сущность способа: осуществляют забор крови в пробирку, содержащую антикоагулянт, перемешивают и оставляют на 20 мин для свободного осаждения эритроцитов при комнатной температуре, после седиментации эритроцитов берут 0,5 мл лейкоцитарной взвеси и определяют в ней количество лейкоцитов любым способом (рутинным или автоматизированным), доводят ее концентрацию до величины 5*109 лейкоцитов/л дистиллированной водой, биологическую жидкость помещают в морозильную камеру при температуре -20°С до полного замораживания и используют ее после процесса размораживания для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов.

Изобретение относится к медицине и касается способа получения бифункционального аффинного сорбента для хроматографической очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих путем иммобилизации неосмектина с гетерологичными антигенами, дающими перекрестные реакции с иммуноглобулинами, где к сорбенту вносят водорастворимый антиген, проводят экспозицию, отмывают от несвязавшегося антигена, доводят рН и проводят одномоментную очистку иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося ФИТЦ и гетерологичных антител с контролем иммунологических показателей готовых препаратов в РИФ.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для выявления антиотцовских антител после иммунизации женщин с идиопатическим привычным выкидышем лимфоцитами полового партнера.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении пациентов после трансплантации сердца для диагностики отторжения трансплантированного сердца.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления риска формирования Т-хелперного иммунодефицита у человека в условиях Арктики. Для этого осуществляют забор крови из вены и определяют общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3+.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин во втором триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2).
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования синдрома задержки роста плода в третьем триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2), у женщин во втором триместре беременности.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения присутствия белка STEAP-1 в биологическом образце, полученном от индивида, имеющего подозрение на метастатический рак предстательной железы.
Изобретение относится к области диагностики, а именно к способу определения пола плода в ранние сроки его внутриутробного развития. Способ определения пола плода заключается в определении уровня антимюллерова гормона (АМГ) в сыворотке крови, в сроки 7, а также 9-10 недель беременности, и при увеличении АМГ в 2,6 и более раз за этот период диагностируют наличие плода мужского пола, при увеличении его не выше чем в 1,5 раза - наличие плода женского пола. Вышеописанный способ позволяет с высокой точностью диагностировать пол плода в ранние сроки беременности. 4 пр.

Изобретение относится к акушерству и касается прогнозирования угрозы невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации. Способ состоит в том, что в лейкоцитах периферической крови беременной на 5-11 неделе гестации с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени определяют уровни экспрессии генов Toll-подобных рецепторов TLR4 и TLR9, гена противомикробного пептида HBD1. При одновременном снижении определяемых показателей, по меньшей мере, в 2,5 раза по сравнению с их уровнем, установленным при физиологически протекающей беременности, прогнозируют угрозу выкидыша в первом триместре гестации. Использование изобретения позволяет осуществить профилактику осложнений, обусловленных инвазивностью исследования (исключение забора биологического материала клеток эндометрия) при одновременном обеспечении точности прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации за счет использования в качестве биологического материала лейкоцитов периферической крови. 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к оториноларингологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики острого риносинусита. Способ дифференциальной диагностики острого риносинусита включает исследование сыворотки крови больного до начала лечения и определение уровней цитокинов интерлейкина - 6 (IL-6) и γ-интерферона (γINF) пг/мл, после чего вычисляют коэффициент диагностики K по формуле: K=IL-6/γINF, и при значении K≤1,4 диагностируют вирусный риносинусит, при выполнении условия 1,4<K<2,5 диагностируют поствирусный риносинусит, при значении K≥2,5 диагностируют бактериальный риносинусит. Предложенный способ позволяет с высокой достоверностью проводить дифференциальную диагностику острого риносинусита за счет использования объективных критериев оценки, позволяющих четко, быстро и однозначно дифференцировать вирусный, поствирусный и бактериальный риносинусит. 3 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования осложненного течения ОРИ у детей. Для этого у детей путем в браш-биоптате слизистой носо-ротоглотки определяют местный неспецифический секреторный иммуноглобулин А, колонизационную активность: индекса инфицирования, индекса адгезии, степени деструкции эпителиоцитов и уровень внеклеточного фосфатидилхолина. По снижению уровня местного неспецифического иммуноглобулина А в пределах 4-16 lg, индекса инфицирования 50-100%, индекса адгезии клеточных эпителиоцитов 100-500 м.кл., деструкции эпителиоцитов 20-50%, уровня внеклеточного фосфатидилхолина 0,001-0,01 мг/мл прогнозируют осложненное течение острых респираторных инфекций у детей. Использование данного способа позволяет прогнозировать осложненное течение ОРИ у детей на ранних стадиях путем одновременного определения нескольких показателей, интегрально характеризующих антиинфекционную резистентность слизистой носо-ротоглотки. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и хирургии, и может быть использовано для прогнозирования генетической предрасположенности или повышенного риска развития инфекционного эндокардита (ИЭ) у пациентов из группы риска. Сущность способа: проводят генотипирование по полиморфному локусу I462V гена CYP1A1 и по полиморфному локусу I105V гена глутатион-S-трансферазы Пи1 GSTP1 у пациентов группы риска, при выявлении носительства сочетания генотипов CYP1A1 I462I и GSTP1 I105V у их носителей прогнозируют 22,6-кратный риск развития инфекционного эндокардита. В группу риска входят лица с внутривенной наркоманией, врожденными и приобретенными пороками сердца, протезированными клапанами и другими операциями на сердце, коронарных артериях, иммунодефицитными состояниями. Способ позволяет установить генетическую предрасположенность к ИЭ у пациентов из группы риска, помогает определить тактику ведения пациентов и индивидуализировать комплекс профилактических и лечебных мероприятий. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки готовности женщин с хроническим эндометритом к экстракорпоральному оплодотворению, включающий обследование женщин в период окна имплантации в цикле, предшествующем проведению программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), отличающийся тем, что у женщин с хроническим эндометритом на 19-21 день менструального цикла получают смыв из полости матки, в котором методом твердофазного иммуноферментного анализа определяют содержание альфа-2-макроглобулина (а2-МГ) и при содержании а2-МГ равном или более 4,5 мг/л оценивают готовность женщин к ЭКО как низкую, рекомендуют дополнительное лечение и перенос сроков ЭКО, а при содержании а2-МГ менее 4,5 мг/л оценивают готовность женщин к ЭКО как высокую и рекомендуют инициацию программы ЭКО. Осуществление изобретения обеспечивает неинвазивный способ оценки готовности к ЭКО, позволяющий повысить эффективность ЭКО за счет выбора оптимального периода начала программы. 3 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и детской кардиологии, и касается предгравидарного прогнозирования риска формирования септальных форм врожденных пороков сердца у плода. Способ включает молекулярно-генетическое тестирование семейной пары, планирующей беременность на догестационном этапе, с выявлением женского аллеля HLA-DRB1*03, HLA-DRB1*12 и мужского генотипа HLA-DRB1*01,04. Вероятный прогноз развития врожденного порока рассчитывают по формуле ,где Y - вероятность риска формирования септальных форм врожденного порока сердца в последующих поколениях (%); X1 - женский аллель HLA-DRB1*03, при этом X1 принимает значение равное 0 при отсутствии аллеля в генотипе, X1=1 при наличии аллеля HLA-DRB1*03 в гетерозиготе и X1=2 при наличии аллеля HLA-DRB1*03 в гомозиготе; X2 - мужской генотип HLA-DRB1*01,04, X2=0 при отсутствии данного генотипа, X2=1 при наличии генотипа HLA-DRB1*01,04; X3 - женский аллель HLA-DRB1*12, соответственно X3=0 при отсутствии аллеля в генотипе, X3=1 при наличии аллеля HLA-DRB1*12 в гетерозиготе и X3=2 при наличии аллеля HLA-DRB1*12 в гомозиготе. Изобретение обеспечивает повышение эффективности и достоверности прогнозирования развития септальных форм врожденных пороков сердца у плода в последующей беременности. 3 пр., 1 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности гастроэнтерологии, и касается способа диагностики тяжести течения хронического гастрита у детей. Сущность способа заключается в изучении клинических, морфологических и иммуногистохимических показателей слизистой оболочки желудка на наличие антигенов простого герпеса, цитомегаловируса и вируса Эпштейн-Барр. Поводят оценку числа микрососудов слизистой оболочки желудка и их эндотелий, неравномерность толщины стенки микрососудов, наличие разрастания соединительной ткани в их стенке, изменения ядер, ядерно-цитоплазматического индекса и наличие периваскулярного отека. При обнаружении вирусной моноинфекции с изменениями эндотелия до 40% микрососудов в виде неравномерного увеличения толщины их стенок, а также гиперхроматоза ядер эндотелиоцитов диагностируют легкое течение. При обнаружении не менее двух вирусных инфекций с увеличением числа микрососудов от 30% до 50% и изменением эндотелия в 45%-60% микрососудов диагностируют течение средней тяжести. При наличии вирусно-бактериальной инфекции с увеличением числа микрососудов более чем на 50% и тотальными изменениями эндотелия более 60% микрососудов диагностируют тяжелое течение хронического гастрита. Использование способа позволяет с высокой точностью оценить тяжесть течения хронического гастрита у детей. 3 пр.

Группа изобретений относится к области молекулярной диагностики и может быть использована для диагностики заболеваний с помощью молекул биомаркеров. Устройство для обнаружения специфической молекулы-мишени или биомаркера путем определения изменения электрических свойств включает: измерительный датчик, включающий проводящую или полупроводящую структуру; систему электродов, передающих сигнал от устройства; и контрольный датчик, имеющий структуру, идентичную измерительному датчику, но защищенную, т.е. предотвращающую образование связи с биомаркером и действующую как встроенный эталон. Структура измерительного датчика включает аптамерное покрытие и способна образовывать связь с биомаркером, вызывая изменение электрических свойств. Группа изобретений относится также к способу анализа пробы на наличие молекулы-мишени или биомаркера посредством указанного устройства. Группа изобретений обеспечивает повышение достоверности анализов. 2 н. и 28 з.п. ф-лы, 17 ил., 3 пр.

Изобретение относится к медицине и касается системы для получения аутологичной сыворотки с повышенным содержанием IL-1RA и со сниженным содержанием провоспалительного цитокина, включающей шприц, внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированным на нем моноклональными антителами к IL-1β, содержащий стеклянные шарики диаметром от 2,5 до 3,5 мм, занимающие до 40% от общего объема шприца, и по меньшей мере один шприц, внутренние стенки которого покрыты твердофазным полимерным сорбентом с фиксированными на нем человеческими IL-1β, и стерильный переходник, выполненный с возможностью перемещения аутологичной сыворотки из шприца с антителами в шприц с человеческим IL-1β. Изобретение обеспечивает значительное снижение концентрации провоспалительного цитокина ИЛ-1β и повышение эффективности лечебного действия аутологичной концентрированной сыворотки. 3 з.п. ф-лы, 3 пр., 7 ил.
Наверх